閆優(yōu)優(yōu) 梁 毅

（中國藥科大學(xué)，江蘇南京211198）

1 測定方法的初步選擇

1.1 藥品結(jié)構(gòu)

硫酸氫氯吡格雷的藥品結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 硫酸氫氯吡格雷的藥品結(jié)構(gòu)

硫酸氫氯吡格雷的藥品溶解性：易溶于水和甲醇，幾乎不溶于環(huán)己烷，以此可以初步確定使用水、DMF作為溶劑均可。稱取供試品適量，分別加入水、DMF進(jìn)行溶解度試驗(yàn)。

1.2 殘留溶劑種類確定

硫酸氫氯吡格雷的反應(yīng)流程如圖2所示。

圖2 硫酸氫氯吡格雷的反應(yīng)流程

本品合成工藝中使用了甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯這5種有機(jī)溶劑，根據(jù)ICHQ3C（R5）殘留溶劑指導(dǎo)原則，確定甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯5種有機(jī)溶劑的殘留限度依次為甲醇不得過0.3%，丙酮不得過0.5%，二氯甲烷不得過0.06%，乙酸乙酯不得過0.5%，甲苯不得過0.089%。甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯與甲苯5種有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)分別為64.5℃、56.12℃、39.75℃、77.112℃和110.63℃。5種有機(jī)溶劑沸點(diǎn)和極性差異較大，故決定采用程序升溫法進(jìn)行測定。

1.3 建立初步的測定方法

參照BP2012AppendixⅧL殘留溶劑法和多次試驗(yàn)結(jié)果，最終確定初步測定方法。

1.3.1 色譜條件

（1）色譜柱為熔融石英毛細(xì)管柱DB-624：30m×0.53mm×3.0μm。（2）載氣：氮?dú)猓∟2），柱流速為4.6mL/min（恒流模式）。（3）分流比：20:1。（4）柱溫：先在50 ℃維持5min，再以每分鐘15℃的升溫速率升至180℃，維持5min。（5）進(jìn)樣口溫度：150℃。（6）檢測器溫度：250℃。（7）氫氣：30mL/min。（8）空氣：400mL/min。（9）尾吹氣：25mL/min。

1.3.2 頂空進(jìn)樣條件

（1）恒溫爐溫度：65℃。（2）平衡時(shí)間：25min。（3）進(jìn)樣量：1mL。（4）溶劑：DMF。

2 測定方法的考察與優(yōu)化

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果

對(duì)照溶液：精密稱取120.08mg甲醇、200.04mg丙酮、24.04mg二氯甲烷、200.02mg乙酸乙酯和35.62mg甲苯于100mL容量瓶中，加入DMF稀釋至100mL，再移取該溶液10.0mL，DMF稀釋至100mL。按照上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果如圖3所示。

圖3對(duì)照溶液甲醇峰的理論塔板數(shù)為20100；甲醇峰與丙酮峰之間的分離度為13.2；丙酮峰與二氯甲烷峰之間的分離度為5.4；二氯甲烷峰與乙酸乙酯峰之間的分離度為16.9；乙酸乙酯峰與甲苯峰之間的分離度為31.0；甲苯峰與DMF峰之間的分離度為14.2。理論板數(shù)均大于5000，各相鄰峰之間分離度均大于1.5，符合要求。

圖3 進(jìn)樣分析結(jié)果

2.2 供試品溶液的測定及優(yōu)化

供試品溶液：稱取200.24mg硫酸氫氯吡格雷樣品于20mL頂空瓶中，加入5.0mL與第2.1節(jié)中相等的對(duì)照溶液，密封。按照上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果如圖4所示。

圖4 進(jìn)樣分析結(jié)果

圖4供試品溶液測試結(jié)果顯示供試品溶液中甲醇峰面積僅為3.55%，遠(yuǎn)小于對(duì)照溶液中甲醇峰面積32.64%，回收率遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于100%。推斷是因?yàn)樵诖松V條件下供試品溶液中甲醇與樣品作用，而導(dǎo)致無法準(zhǔn)確測定甲醇的殘留量。故決定對(duì)溶劑進(jìn)行調(diào)整。

2.3 確定最佳測定方法

溶劑的選擇：DMF-水（1:1）、DMF-0.05MNaOH（1:1）、DMF-0.05MHCl（1:1）。

DMF-水（1:1）：供試品溶解性差，故排除該溶劑。

DMF-0.05MNaOH（1:1）：由于硫酸氫氯吡格雷結(jié)構(gòu)和殘留有機(jī)溶劑乙酸乙酯中有酯鍵的存在，在堿性條件下易水解，故排除該溶劑。

DMF-0.05MHCl（1:1）：供試品溶解性好，且測試結(jié)果未發(fā)現(xiàn)硫酸氫氯吡格雷結(jié)構(gòu)和殘留有機(jī)溶劑乙酸乙酯中酯鍵水解，測試結(jié)果如圖5、圖6所示。

圖5 測試結(jié)果

圖6 供試品溶液測試結(jié)果

圖6供試品溶液測試結(jié)果：甲醇峰的理論塔板數(shù)為19977；甲醇峰與丙酮峰之間的分離度為13.2；丙酮峰與二氯甲烷峰之間的分離度為5.5；二氯甲烷峰與乙酸乙酯峰之間的分離度為17.1；乙酸乙酯峰與甲苯峰之間的分離度為31.0；甲苯峰與DMF峰之間的分離度為14.1。理論板數(shù)均大于5000，各相鄰峰之間分離度均大于1.5，符合要求。

供試品溶液中甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯與甲苯5種有機(jī)溶劑回收率分別為101%、102%、92%、93%和92%，符合要求。

故確定溶劑為DMF-0.05MHCl（1:1）。

3 分析方法驗(yàn)證

3.1 驗(yàn)證項(xiàng)目與可接受標(biāo)準(zhǔn)

通過對(duì)上述硫酸氫氯吡格雷有機(jī)殘留溶劑分析方法的驗(yàn)證，證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求，驗(yàn)證項(xiàng)目與可接受標(biāo)準(zhǔn)如表1所示。

3.2 驗(yàn)證程序

3.2.1 儀器與試劑

儀器：Agilent7890A-CTC。

表1 驗(yàn)證項(xiàng)目與可接受標(biāo)準(zhǔn)

試劑：原藥（某公司，批號(hào)130401、130402、130403）；甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯與甲苯均為分析純，N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純。

3.2.2 測試方法

3.2.2.1 系統(tǒng)適用性方法

標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取甲醇120mg、丙酮200mg、二氯甲烷24mg、乙酸乙酯200mg、甲苯35.6mg于100mL容量瓶中，并用溶劑稀釋至刻度，搖勻；移取10.0mL此溶液加溶劑稀釋至100mL，搖勻。將上述溶液重復(fù)進(jìn)樣6針，記錄色譜圖。

3.2.2.2 專屬性方法

定位溶液：分別取適量甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯于裝有5mL溶劑的20mL頂空瓶中，密封。

樣品溶液：稱取樣品（批號(hào)1304001）200.20mg至20mL頂空瓶中，加5mL溶劑溶解，密封。

混合溶液（1）：分別取適量甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯于裝有5mL溶劑的20mL頂空瓶中，密封。

混合溶液（2）：稱取樣品（批號(hào)1304001）200.04mg至20mL頂空瓶中，加5mL溶劑溶解，分別取適量甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯于上述溶液中，密封。

將上述溶液按照上述方法進(jìn)行測試，記錄色譜圖。

3.2.2.3 線性、準(zhǔn)確性、回收精密度和范圍方法

溶液配制：各個(gè)溶液相對(duì)濃度為限度的10%～150%，至少有5個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平配制3個(gè)溶液。此次驗(yàn)證配制了10%測試溶液、40%測試溶液、80%測試溶液、100%測試溶液、120%測試溶液和150%測試溶液6個(gè)濃度水平。

3.2.2.4 報(bào)告水平（或定量限）方法

配制相對(duì)濃度為限度的10%的溶液，平行測試6次。

3.2.2.5 檢測限方法

根據(jù)定量限結(jié)果，不斷稀釋直到該濃度下的分析物不能被檢測，平行測試3次。

3.2.2.6 測試精密度、方法精密度

測試精密度：配制一個(gè)樣品溶液分成6份進(jìn)行分析。

方法精密度：配制6個(gè)樣品溶液分別進(jìn)行分析。

3.2.2.7 中間精密度

2個(gè)檢驗(yàn)員在不同時(shí)間于不同的儀器上用不同批號(hào)的色譜柱對(duì)同一樣品進(jìn)行檢測，比較測試結(jié)果。

3.2.2.8 耐用性

主要考察柱流速變化、升溫速率變化、頂空恒溫變化和頂空平衡時(shí)間變化對(duì)測試結(jié)果的影響。

3.2.2.9 溶液穩(wěn)定性

配制一份樣品溶液分裝多份，分別于室溫放置0h、6h、12h、18h、24h、48h，按照上述方法進(jìn)行測試，記錄色譜圖。

3.2.3 結(jié)果匯總

測試結(jié)果匯總?cè)绫?所示。

表2 結(jié)果匯總

4 結(jié)語

通過多次試驗(yàn)，確定了硫酸氫氯吡格雷留溶劑的檢測方法。

色譜柱：熔融石英毛細(xì)管柱DB-62430m×0.53mm×3.0 μm；載氣：氮?dú)猓∟2），柱流速為4.6mL/min（恒流模式）；分流比：20:1；柱溫：先在50 ℃維持5min，再以每分鐘15℃的升溫速率升至180℃，維持5min；進(jìn)樣口溫度：150℃；檢測器溫度：250℃；爐溫溫度：65℃；進(jìn)樣針溫度：75 ℃；CTC吹掃壓力：50kPa（0.5bar）；平衡時(shí)間：25min；進(jìn)樣量：1mL。

操作方法：溶劑為0.05mol/L鹽酸溶液-DMF（1:1）。

溶液的配制：（1）空白溶液：溶劑。（2）對(duì)照品溶液：精密稱取120mg甲醇、200mg丙酮、24mg二氯甲烷、200mg乙酸乙酯、35.6mg甲苯置于同一100mL容量瓶中，加溶劑稀釋至100mL，搖勻；精密移取10mL此溶液加溶劑稀釋至100mL，搖勻，作為對(duì)照品溶液。（3）供試品溶液：精密稱取0.2g樣品置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，加5mL溶劑，密封，作為供試品溶液。

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：按上述GC分析和頂空分析條件，分別進(jìn)空白溶液、定位溶液、對(duì)照品溶液，記錄色譜圖。各峰間的分離度應(yīng)不得少于1.5；理論塔板數(shù)按甲醇峰計(jì)應(yīng)不得少于5000；各溶劑峰峰面積的RSD應(yīng)不得大于10%。

測定法：按上述條件將對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)；系統(tǒng)適應(yīng)性符合規(guī)定，測試供試品溶液，記錄色譜圖，讀取峰面積。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。