劉文娥，張婉妮(綜述)，陳燕霞(審校)

(1.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院婦產科，長沙 41007； 2.湖南中醫(yī)藥大學七年制研究生班，長沙 410007)

盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease，PID)是女性生殖器及其周圍結締組織、盆腔腹膜發(fā)生的炎癥，是女性常見的多發(fā)病，其嚴重影響育齡期婦女的生殖健康和生活質量。PID主要包括子宮內膜炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、盆腔腹膜炎等，若PID未得到及時、徹底的治療，可導致不孕、輸卵管妊娠、慢性盆腔痛，炎癥反復發(fā)作可嚴重影響婦女的生殖健康，增加家庭與社會的經濟負擔[1]。動物模型對深入系統(tǒng)研究PID具有重要意義，隨著科研技術發(fā)展的不斷進步，PID的造模方法也在不斷完善，現(xiàn)對相關方法綜述如下。

1 物理性方法

1.1異物置入法 將異物置入體內，一方面會對正常組織產生刺激作用，引發(fā)局部炎性反應；另一方面也會引起機體的免疫反應。劉元等[2]、張晴等[3]麻醉大鼠后，于下腹正中切開2 cm，暴露子宮，沿左側子宮角上1 cm處做一橫切口，將酒精消毒的塑料管(管徑2 mm，長5 mm，重2 mg)埋入子宮內制備大鼠子宮炎癥模型。

1.2機械損傷法 機械損傷法是常用的造模方法，但很少單獨應用，多與他方法聯(lián)合。實驗多采用磨口針頭在宮腔內來回抽拉數(shù)次，機械性損傷子宮內膜組織，細菌通過破損處侵入或長期刺激子宮，促使炎癥形成。黃淑鳳等[4]和常潤等[5]在機械損傷的基礎上加以化學燒傷或細菌接種法均達到預期效果。

2 化學性方法

2.1苯酚膠漿法 該法是PID動物模型中使用較早、應用較為廣泛的造模方法之一，其通過苯酚對組織的化學性燒傷而達到致炎目的。研究中常用25%苯酚膠漿(苯酚5 mL、西黃芪膠1 g、甘油4 mL加水至20 mL制成或由液化苯酚、蒸餾水以及羧甲基纖維素鈉配置而成)。馬云等[6]麻醉大鼠后開腹，注射器針頭于子宮分岔處進入宮腔內，朝右側卵巢方向緩慢推注苯酚膠漿0.06 mL。造模后第11日，肉眼可見模型組右側子宮明顯水腫，有炎性包塊，與周圍組織粘連不清；鏡下顯示腔壁結構紊亂，腺體萎縮變形，全層可見大量炎性細胞浸潤。汪明德等[7]、程靖等[8]和張彥等[9]均采用此法制備大鼠PID模型。付桂香等[10]采用苯酚膠漿大鼠陰道注射制備陰道及宮頸炎癥模型：用錐形靜脈切開針進入大鼠陰道深部，并注入苯酚膠漿，每只0.3 mL，每3天注射1次，共3次。

苯酚膠漿法屬于化學性燒傷法，可造成炎性反應與粘連，發(fā)病特點雖與人類PID相異，但在阻塞性輸卵管炎及不孕的研究中占優(yōu)勢。因苯酚膠漿法簡單易行，造模時間短，在某種程度上仍為學者所接受。

2.2鹽酸法 鹽酸是一種強酸，體內注射鹽酸可對正常組織產生刺激、腐蝕作用而致炎。傅汝廉等[11]最早使用鹽酸闌尾靜脈注射法建立闌尾炎性包塊模型，劉慶等[12]參考傅氏方法，向雙側宮腔注射0.3 N的鹽酸,除2只大鼠因麻醉原因死亡外，其余大鼠鏡下可見宮腔內大量膿細胞積聚，部分上皮變性、壞死，黏膜下層充血水腫、炎細胞浸潤。

鹽酸致炎法方法雖簡單，但由于酸性太強，因而在實驗研究中并不常用，其劑量與濃度的選擇需根據(jù)實驗研究的具體要求而定。

3 生物性方法

引起PID的病原體包括內源性和外源性兩類，兩種病原體可單獨應用，但常混合存在[1]。生物性造模法更接近人類PID的致病過程，但造模時間較長，一般需20 d左右[13]。造模所選菌液可為單一細菌，也可為混合菌液，混合菌液造模更有利于炎癥產生，也更接近人類PID致病特點。動物造模中菌液濃度的選擇要合理，既要滿足實驗的致炎目的，又不能引起菌血癥導致動物死亡。

3.1內源性病原體感染法 內源性病原體主要來自于寄居于陰道內的微生物群，包括需氧菌和厭氧菌，需氧菌主要是大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌，而厭氧菌主要是脆弱類桿菌。

孫曉瑋等[14]取大鼠下腹正中做長0.8～1.0 cm的切口，暴露右側子宮，用注射器取0.1 mL大腸埃希菌菌液(濃度為6×109個/L)注入大鼠子宮。模型組大鼠肉眼可見子宮腫脹、發(fā)硬，與周圍組織粘連，形成硬結；鏡下可見管壁黏膜層與肌層結構模糊，上皮細胞變性壞死脫落，組織充血水腫伴炎性細胞浸潤。衛(wèi)昊等[15]將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌按2∶1∶1比例溶于無菌性生理鹽水中，運用比濁法配制成濃度為3×1011個/L的混合菌液，在大鼠右側子宮注入混合菌懸液0.1 mL。結果提示，模型組大鼠子宮黏膜上皮有明顯的變性壞死，肌層與固有層均有明顯的結締組織增生及炎細胞浸潤，肌層排列紊亂，管腔有一定粘連阻塞，漿膜層有散在炎細胞浸潤。師偉等[16]、楊林波等[17]和邱賽紅等[18]均采用混合菌液接種法造模成功。

以上方法均為開腹后子宮注射器接種。此外，馮平安等[19]采用小鼠腹腔直接注射脆弱類桿菌懸液0.35 mL、大腸埃希菌菌液0.5 mL制備小鼠盆腔炎模型。李俊良等[20]采用逆行宮腔插管灌注細菌法，將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌以1∶1配制成濃度為1×1010/L的菌液后多次經陰道注入宮腔內以持續(xù)刺激宮腔。實驗結果顯示，雙側輸卵管水腫、充血、盆腔積液，雙側輸卵管壁增厚，呈串珠樣改變。

3.2外源性病原體感染法 外源性病原體主要為性傳播疾病的病原體，如解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟菌等，其主要沿生殖道黏膜上行蔓延感染。

劉弘等[21]采用苯甲酸雌二醇預處理(皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.2 mL，每周1次，共4次)小鼠，然后給予小鼠陰道多次接種解脲支原體血清8型感染液制備PID模型。造模后小鼠陰道發(fā)紅，分泌物增多，宮頸肥大，子宮及輸卵管水腫；陰拭子培養(yǎng)支原體均為陽性；病理切片顯示生殖器官4個部位均有明顯的中性粒細胞浸潤。韓建德等[22]給予雌性小鼠陰道內接種小鼠肺炎沙眼衣原體，3周內輸卵管發(fā)生急性炎癥，3周后輸卵管出現(xiàn)扭曲、阻塞、積水等慢性炎性改變。

此外，朱葉等[23]和師振予等[24]將解脲支原體、金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌按 1∶1∶1的比例混合配制成濃度為3×1015/L的混合菌液，并將其注入大鼠一側宮腔內制備PID模型；李鑫等[25]將蘸有金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌以及解脲支原體混合菌液的醫(yī)用明膠片經陰道塞至宮腔內，連續(xù)4次，制備PID模型。

國內制備PID模型多采用小動物，如大鼠、小鼠、豚鼠、兔等，小動物模型具有成本低、易于處理、并能夠改變其基因(如敲除小鼠基因)等優(yōu)點,但其與人類疾病機制相差甚遠。自非人靈長類動物(non-human primates,NHPs)允許用于人類生物、生理、解剖的研究后，國外多傾向使用NHPs用于生物醫(yī)學研究。雌性NHPs生殖系統(tǒng)的大小和形態(tài)與女性相似[26]。國外多采用沙眼衣原體感染NHPs(黑猩猩、狨猴、獼猴、狒狒等)制備PID模型，通過多次重復逆行性宮頸、子宮內膜或輸卵管直接接種沙眼衣原體致宮頸炎、子宮內膜炎或輸卵管炎模型，其更類似于人類PID模型[27]。但NHPs本身價格昂貴,且還需要專業(yè)設施以及職業(yè)技術人員來照顧這些動物，所需的成本巨大，對于很多實驗室來說都是無法完成的。

4“病證結合”制備PID動物模型

目前，關于建立不同證型的PID動物模型的研究報道較少，且單一。凌娜等[28]制備了陽虛證慢性盆腔炎大鼠動物模型：在采用混合菌接種法(大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌比例2∶1∶1)制備大鼠盆腔炎的基礎上，將造模后的大鼠用地塞米松混懸液(18 mg/L)2 mL+生理鹽水2 mL，每日下午17：00～19：00灌胃，連續(xù) 7 d，中間休息1 d，共灌胃16次。采用地塞米松混懸液灌胃后實驗大鼠逐漸出現(xiàn)行動遲緩、神志萎靡、蜷縮、拱背、足部腫脹、體毛稀疏尤以尾部突出等脾腎陽虛的表現(xiàn)。

黃青等[29]對大鼠皮下注射0.08 mg/100 g的鹽酸腎上腺素后，將大鼠放入0 ℃冰水中，5 min后取出，2 h后再次注射鹽酸腎上腺素0.08 mg/100 g，再次放入0 ℃冰水中5 min，制備大鼠盆腔炎急性血瘀模型。通過測定血液流變學指標提示造模的準確性。

葉秋香等[30]采用苯酚膠漿法疊加冰浴法建立寒凝血瘀證慢性盆腔炎大鼠模型，即在苯酚膠漿法建立盆腔炎模型的基礎上，將大鼠放入冰浴槽中，不斷加入水和冰塊，直至測水溫為0 ～1 ℃、水面與直立大鼠頸部相平為止，每日冰浴1次，每次20 min，連續(xù)2周。

5 小 結

PID是一個全球性的健康問題，其嚴重影響著女性的正常工作、學習和生活。隨著對PID研究的不斷深入，其造模方法也在不斷的發(fā)展與改進，使其更加接近人類疾病的致病特點。但研究中仍然存在很多弊端，如動物造模多采用開腹手術，實際過程中難免造成腹腔感染，嚴重影響動物造模術后的存活率、造模效果及實驗的準確性；逆行性宮腔混合菌液接種接近人類上行感染機制，但接種感染率低，需多次重復試驗，實際造模效果難以判定；NHPs價格昂貴，且數(shù)量有限，而小動物模型無法真實復制人類疾病模型。因此開發(fā)出一種高效、安全、持久、快捷的造模方式仍是擺在研究者面前長期而艱巨的任務。

此外，中醫(yī)“病證結合”PID動物模型尚不夠成熟，僅見于個別報道，且局限在血瘀、陽虛等方面，而濕熱、氣滯、氣虛等方面的研究還很欠缺，關于中醫(yī)證候與PID的相關性研究還需要研究者不斷大膽創(chuàng)新，使動物造模及診治上更加凸顯中醫(yī)特色。

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