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        MCM7與腫瘤相關因子的研究進展

        2014-03-06 17:49:33綜述楊永秀審校
        醫(yī)學綜述 2014年23期

        李 瑤(綜述),楊永秀(審校)

        (1.蘭州大學第一臨床醫(yī)學院,蘭州 730000; 2.蘭州大學第一臨床醫(yī)院婦產(chǎn)科,蘭州 730000)

        微小染色體維持蛋白7(minichromosome maintenance proteins 7,MCM7)是微小染色體維持蛋白(minichromosome maintenance proteins,MCMs)的家族成員之一。MCMs是一類高度保守的蛋白質(zhì),最初在酵母中發(fā)現(xiàn),隨后證實其亦存在于真核細胞生物中。MCMs家族至少包括6個成員:MCM2、MCM3、MCM4、MCM5、MCM6及MCM7,具有類似的結構和功能,參與DNA的復制和延伸,確保每次細胞周期中DNA僅且復制一次,與細胞增殖關系密切[1]。MCM2~7復合體在DNA復制中具有極其重要的功能,也是細胞生長過程中很多信號通路的一個聚焦點,其中MCM4/MCM6/MCM7復合體就具有ssDNA依賴性ATPase活性、ATP依賴性ssDNA結合活性和DNA解螺旋酶活性[2]。腫瘤的形成多是由于各種理化因素、生長因子、原癌基因等條件的刺激致使細胞周期失控,細胞異常分化及增殖,而G1期為DNA合成前期,決定細胞周期的長短,S期為DNA合成期,均為關鍵性步驟,因此MCM7在G1期和S期對細胞周期的調(diào)控作用,使其與細胞生成、增殖及腫瘤形成等關系密切[3]。

        1 MCM7的結構及在細胞周期中的定位

        人MCM7蛋白由719個氨基酸殘基組成,相對分子質(zhì)量為80×103,與家族其他成員結構高度相似,中心均有一個保守性區(qū)域,由200個氨基酸殘基組成,即編碼DNA依賴的ATPase模體。該模體由Walker A和Walker B組成,Walker B后緊接R-finger,即精氨酸酯,為另一個短基序,約含70個氨基酸殘基[4]。MCM7的ATPase模體是MCM4/MCM6/MCM7復合體發(fā)揮自身功能的關鍵。MCM7除了共有的中心結構外,還有一個特殊結構——鋅指模體,該模體僅在MCM2/MCM4/MCM6/MCM7復合體中存在,是調(diào)節(jié)解鏈酶的必需結構。

        在細胞周期G1期,由起始點識別復合物、細胞分裂蛋白6(cell division cycle 6,CDC6)、CDC10依賴性轉錄因子1 及MCMs復合體構成復制前復合物(pre-replication complex,pre-RC)而啟動DNA復制[5]。起始點識別復合物首先識別DNA復制起始點并與之結合,隨之CDC6和CDC10依賴性轉錄因子1再與其結合,之后在CDC45的參與下將MCMs復合體整合到DNA起始點上,形成pre-RC,完成DNAS復制的啟動裝備。S期,細胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)和CDC7/DBF4激酶活化pre-RC,在MCM4/MCM6/MCM7的解螺旋作用下DNA解鏈并構成雙向復制叉,同時MCMs復合體從pre-RC游離至胞質(zhì)中,等待參與下一個細胞周期,確保每次細胞周期中DNA僅且復制一次。研究證實,MCM7的mRNA水平與細胞周期有相一致的周期性,其在G1、S期可被顯著檢測出,但在G0期和分化、衰老時,其表達水平逐漸下降甚至不能測出[6]。因此,MCM7可作為細胞增殖的可靠標志物,成為診斷腫瘤的依據(jù)之一。

        2 MCM7與其他腫瘤相關因子

        2.1MCM7與CDC6 MCMs家族由CDC基因編碼,而CDC6從細胞周期G1期到M期均起重要作用,是DNA復制的又一必須因子,與細胞增殖密切相關。G1期,CDC6主要與起始點識別復合物、 CDC10依賴性轉錄因子1、MCMs形成pre-RC復合體;S期,CDK激活pre-RC啟動DNA復制,同時磷酸化CDC6和MCM7,使其游離到胞質(zhì)中,游離的CDC6在泛素化途徑中被降解,MCM7則等待參與下一個細胞周期。因此,MCM7和CDC6共同確保DNA復制僅且復制一次,使細胞正常增殖。另外,CDC6的表達與E2F/Rb復合體對S期的調(diào)控有關。E2F促使轉錄由G1期進入S期,進行DNA復制和細胞增生。當E2F從E2F/Rb中游離后與MCM7上的多個E2F位點結合,上調(diào)CDC6與MCM7的表達,同時游離E2F可解除Rb對細胞增殖的抑制作用,促進細胞從G1期進入S期;M期,CDC6介導S-M期檢查點反應的激活,啟動DNA損傷監(jiān)測系統(tǒng),確保有絲分裂準確有序的進行[7]。

        2.2MCM7與p16 p16基因已是一種被公認的多腫瘤抑制基因,由細胞周期依賴性激酶抑制基因編碼,位于染色體9p21區(qū),通過周期蛋白/CDK的作用維持G1/S期檢測點的完整性,參與E2F轉錄因子的釋放[8]。因其蛋白能與CDK4競爭性結合,抑制周期蛋白/CDK4的活性,參與細胞周期的負調(diào)控及抑制細胞的異常增殖,故亦可稱為CDK4抑制因子[9]。p16蛋白可與CDK4和CDK6競爭性結合,使周期蛋白D/CDK復合體解離,導致細胞周期停滯,抑制細胞生長與分化。解離后的周期蛋白D/CDK4或周期蛋白D/CDK6激酶失活,無法磷酸化Rb,導致低磷酸化的Rb將與E2F不可分離,E2F/Rb途徑被阻斷,DNA轉錄被抑制,控制細胞增殖。p16基因突變或者缺失致使其不能與CDK4/CDK6競爭性結合,導致CDK4/CDK6增加,刺激細胞分裂,細胞增殖失控,導致腫瘤發(fā)生。在細胞周期中,CDK可活躍磷酸化的MCMs,使MCM4/MCM6/MCM7的解螺旋酶作用失活,調(diào)控DNA復制[10]。細胞從G1期進入S期時,MCMs亦能促進CDK啟動同時使自身在解螺旋酶的作用下解離,導致G1期延遲,這一作用與CDK/周期蛋白復合體磷酸化Rb有關[11]。如此在細胞周期中,p16和MCM7通過與CKD的相互間作用共同參與細胞周期調(diào)控,使DNA復制及細胞增殖可以準確有序的進行。

        2.3MCM7與人乳頭瘤病毒 人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一組無包膜的雙鏈環(huán)狀DNA病毒,有8個開放閱讀框架(E1,E2,E4,E5,E6,E7,L1和L2),至少有120多種血清型。根據(jù)其與腫瘤的關系,分為高危型(HPV16,18,31,33,35)和低危型(HPV6,11),而HPV16、18型感染與部分人的惡性腫瘤發(fā)生相關[12]。根據(jù)國內(nèi)外相關研究發(fā)現(xiàn),HPV相關病變多位于鱗柱上皮交界處,如喉的鱗狀上皮和氣管上皮交界處,肺支氣管鱗柱狀上皮的交界處,尤其是在宮頸癌中HPV感染宮頸鱗柱上皮交界處已被公認為是導致腫瘤發(fā)生的關鍵因素[13-15]。當宿主感染HPV后,HPV DNA即可生成大量的E6和E7蛋白,但這兩種蛋白缺乏穩(wěn)定性,易磷酸化,致使構象發(fā)生紊亂,而構象紊亂的E6和E7干擾DNA復制、轉錄等過程,促進腫瘤發(fā)生。HPV的致癌性也與Rb/E2F這一途徑相關。E7蛋白中含有多個Rb結合位,并可與低磷酸化的Rb蛋白優(yōu)先結合,使Rb/E2F復合物中的E2F被游離出來,促使細胞由G1期進入S期,導致細胞周期調(diào)控失控,細胞增殖失調(diào)。MCM7在對細胞周期的調(diào)控中與HPV有共同的Rb/E2F途徑,同時也證明了Rb/E2F途徑是細胞周期調(diào)控中多個作用機制的聚焦點,起著關鍵作用[14-15]。

        2.4MCM7與蛋白激酶C受體1 蛋白激酶C受體1(receptor for activated C kinase 1,RACK1)首先由Mochly-Ros等提出并命名,為活化的蛋白激酶C受體,相對分子質(zhì)量為36×103,由GNB2L1基因編碼的蛋白質(zhì)[16]。RACK1屬于G蛋白B亞基的家族,為一種胞質(zhì)內(nèi)游離的支架蛋白,因其結構中含有7個色氨酸-天冬氨酸(WD)重復序列,即可通過不同的WD40位點與活化的蛋白激酶C結合、轉運到細胞內(nèi)相應的位置,并使其保持活性,以介導下游的反應。RACK1與MCM7共同參與并調(diào)控細胞周期。在MCM7及MCMs復合體中存在多個磷酸化位點,磷酸化的MCM7在DNA復制中有重要作用。研究發(fā)現(xiàn),RACK1能夠促進MCM7中絲/蘇氨酸位點磷酸化,磷酸化MCM7促使細胞由G1期進入S期,促進細胞增殖[17-18]。大量研究資料證明,RACK1在大多數(shù)腫瘤中表達均增加,如在乳腺癌、卵巢癌、肝癌、口腔鱗癌及惡性黑色素瘤中均高表達,促進腫瘤形成。但根據(jù)Mamidipudi等[19]的研究認為,在結腸癌中,RACK1有抑制癌細胞形成與增殖的作用,可能是與其能在G1期及有絲分裂各個調(diào)定點抑制Src活性,卻保持CDK1-cylinB復合體的活性有關,使細胞周期受到阻止,抑制腫瘤細胞的生成及惡性增殖。

        2.5MCM7與表皮生長因子受體 表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是原癌基因c-erbB1的產(chǎn)物,屬于EGFR家族,為酪氨酸激酶型受體,常表達于正常上皮細胞表面,是上皮細胞增殖和信號轉導的受體,但在某些腫瘤細胞中常高表達,成為檢測腫瘤生成的輔助手段,也成為臨床治療腫瘤的一個新靶點[20]。根據(jù)洪明奇教授等在2013年6月10日發(fā)表在《cancer cell》上的研究報道稱[21],EGFR通過Lyn激酶的酪氨酸磷酸化增強MCM7對DNA復制的調(diào)控作用。在探究EGFR和MCMs間的相互作用時發(fā)現(xiàn),MCM7隨著表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)的刺激表達增加,卻因Tyr激酶的抑制作用而降低,提示EGFR和MCM7間的相互作用可能依賴于EGFR激酶活性,MCM7也可能是EGFR激酶的底物或其下游的激酶[21]。研究發(fā)現(xiàn),缺乏EGF時,MCM7將無法酪氨酸磷酸化。為了明確MCM7磷酸化激酶,他們研究了與MCM7相互作用的蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn),Lyn是唯一與之相關的酪氨酸激酶。Lyn能使MCM7酪氨酸磷酸化,MCM7的表達量因EGF的刺激而增加,因Lyn激酶抑制劑pp2的作用而減少,另外,EGF對MCM7磷酸化的刺激作用也因pp2的作用而消失,表明Lyn激酶的活性增強了其與MCM7及EGF間的相互作用。在體外,純化重組的Lyn激酶磷酸化的谷胱甘肽能結合MCM7;而在體內(nèi)用siRNAs干擾阻斷Lyn的表達檢測MCM7酪氨酸磷酸化對EGF的反應時發(fā)現(xiàn),MCM7的酪氨酸磷酸化減少同時被引入一個依賴siRNA的Flag-p56Lyn,也支持了Lyn是MCM7的酪氨酸激酶這一推論[21]。p56Lyn是除了p53Lyn外的Lyn的另一個亞型,兩者雖都與MCM7有相互作用,但研究證實只有p56Lyn對MCM7作用依賴于EGF的刺激[21]??傊?,依賴于EGF刺激作用的Lyn激酶可使MCM7酪氨酸磷酸化,磷酸化的MCM7參與DNA復制過程,共同參與調(diào)控細胞周期及細胞增殖。

        3 展 望

        因MCM7在DNA復制中的作用,使其在調(diào)控細胞周期、細胞增殖及腫瘤形成等過程中均有重要意義,根據(jù)其在細胞周期中的定位,檢測其表達的高低,即可作為細胞增殖、腫瘤形成等判斷的依據(jù)。但目前為止,MCM7與其他蛋白之間及各調(diào)控因子之間的相互作用尚不清楚,有待進一步研究。鑒于MCM7在正常組織和病變組織表達上的差異性是較Ki67、p53等其他腫瘤標志物能更為敏感,能較靈敏地反映細胞異常增殖,對輔助診斷腫瘤形成更可靠,可成為一種新型腫瘤標志物。

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