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        DNA異常甲基化在胃癌中的研究進(jìn)展

        2014-03-06 17:49:33孫婧悅綜述何敬東審校
        醫(yī)學(xué)綜述 2014年23期
        關(guān)鍵詞:胃癌檢測(cè)

        孫婧悅(綜述),何敬東(審校)

        (南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院腫瘤科,江蘇 淮安 223300)

        DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的作用下,以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體,在CpG二核苷酸中將甲基轉(zhuǎn)移到胞嘧啶的第5位碳原子上形成5-甲基胞嘧啶。該過程不涉及核苷酸序列的變化,而屬于表觀遺傳學(xué)改變的范疇,是一種具有可逆性和可遺傳性的基因修飾方式。在整個(gè)人類的基因組中,CpG二核苷酸非均勻分布,并且有兩種存在方式:一種為散在分布且處于甲基化狀態(tài);另一種富含CpG,長(zhǎng)度>200 kb,呈非甲基化狀態(tài),即CpG島[1]。在惡性腫瘤細(xì)胞中,DNA異常甲基化主要表現(xiàn)為廣泛低甲基化和局部CpG島啟動(dòng)子的高甲基化,目前后者的報(bào)道相對(duì)較多[2]。相關(guān)研究表明,廣泛低甲基化會(huì)引起染色質(zhì)缺失及重組,從而導(dǎo)致基因不穩(wěn)定,這種不穩(wěn)定性的累加最終促使腫瘤的發(fā)生[3]。局部高甲基化通常發(fā)生在抑癌基因CpG島的啟動(dòng)子區(qū)域,使抑癌基因表達(dá)沉默,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[4]。胃癌中存在很多基因的異常甲基化,在疾病進(jìn)展的各個(gè)階段均可檢測(cè)到DNA異常甲基化的存在[5]。因此,檢測(cè)胃癌相關(guān)基因的甲基化狀態(tài),可以為胃癌的發(fā)生、發(fā)展、早期診斷、藥物治療及預(yù)后評(píng)價(jià)提供新的思路。

        1 DNA異常甲基化與胃癌的發(fā)生、發(fā)展

        胃癌的發(fā)生、發(fā)展伴隨有許多基因的低甲基化和高甲基化。前者主要涉及原癌基因及廣泛基因組的低甲基化,后者主要指抑癌基因CpG島啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化。目前已有很多文獻(xiàn)報(bào)道與胃癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的甲基化基因,如RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3、人類錯(cuò)配修復(fù)基因1、金屬蛋白酶組織抑制物3、抑癌基因p16等,它們的功能分別是調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、參與DNA修復(fù)、涉及細(xì)胞生長(zhǎng)分化、調(diào)控細(xì)胞周期等多方面[5-8]。上述基因的異常甲基化在腫瘤細(xì)胞形成的各個(gè)階段發(fā)揮不同的作用,下面重點(diǎn)介紹幾個(gè)新近發(fā)現(xiàn)與胃癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因。

        1.1早期B細(xì)胞因子3 早期B細(xì)胞因子3(early B-cell factor-3,EBF3)是一種抑癌基因,位于人類染色體10q26.3區(qū)域,由551個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,相對(duì)分子質(zhì)量約60×103,含有家族性非典型鋅指及螺旋結(jié)構(gòu),其基本功能是調(diào)控細(xì)胞分裂周期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。EBF3啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化導(dǎo)致表達(dá)沉默,被認(rèn)為是胃癌的發(fā)病因素之一,目前已在胃癌組織中得到了證實(shí)。Kim等[9]研究發(fā)現(xiàn),在104例胃癌組織中,有42例檢測(cè)到了EBF3啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化,甲基化率為40.4%,而EBF3在正常的胃黏膜組織中,未發(fā)現(xiàn)異常甲基化。功能分析表明,EBF3抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,促進(jìn)細(xì)胞周期停滯及凋亡。因此,在胃癌組織中高甲基化狀態(tài)的EBF3導(dǎo)致蛋白表達(dá)下調(diào),使腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)不受調(diào)控,從而引起胃癌的發(fā)生與發(fā)展。

        1.2原鈣黏素10 原鈣黏素10(protocadherin 10,PCDH10)是一種重要的抑癌基因,位于人類染色體4q28.3區(qū)域,長(zhǎng)度約42.26 kb,為原鈣黏素細(xì)胞黏附分子家族的成員之一,其基本功能是參與鈣依賴型細(xì)胞間黏附,介導(dǎo)細(xì)胞間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Yu等[10]研究發(fā)現(xiàn),在17種胃癌細(xì)胞系中有16種檢測(cè)到PCDH10表達(dá)沉默或下調(diào)。此外,在104例胃癌患者中,85例存在PCDH10高甲基化,甲基化率為82%,而相對(duì)應(yīng)的104例癌旁組織中,僅有38例檢測(cè)到PCDH10高甲基化,甲基化率為37%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PCDH10重新獲得表達(dá)后,能夠抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,阻止細(xì)胞侵襲生長(zhǎng)。PCDH10不僅參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展,在其他腫瘤的形成中也有作用,已有文獻(xiàn)報(bào)道,PCDH10異常甲基化與結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[11-12]。

        1.3促生長(zhǎng)素抑制素 促生長(zhǎng)素抑制素(somatostatin,SST)為一種腸肽,可以阻止胃癌等多種癌癥中腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),其廣泛分布于胃腸道,在維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定中起重要作用。有研究表明,在人類惡性腫瘤中,SST有抑癌基因的功能,可以通過調(diào)控生長(zhǎng)因子和激素的釋放、減少血管形成等機(jī)制抑制腫瘤的生長(zhǎng)[13]。Shi等[14]研究發(fā)現(xiàn),在51例胃癌組織中,通過定量的甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)SST啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平,發(fā)現(xiàn)23例SST發(fā)生高甲基化,甲基化率為45.1%,而相對(duì)應(yīng)的51例正常胃黏膜組織中,用同樣的方法只檢測(cè)出2例SST高甲基化;此外分別用放射免疫分析法和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)SST蛋白及信使RNA水平,發(fā)現(xiàn)胃癌組織中的SST表達(dá)水平顯著低于正常胃黏膜組織。這一研究提示,在胃癌中基因高甲基化是SST表達(dá)沉默的主要原因,而SST作為抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的因子,其表達(dá)下調(diào)或缺失會(huì)導(dǎo)致胃癌等消化道惡性腫瘤的發(fā)生。

        2 DNA異常甲基化與胃癌的早期診斷

        胃癌在全球具有很高的發(fā)病率和病死率,盡管診斷技術(shù)有所改進(jìn),但仍有很多患者在疾病晚期才能被確診,而這類患者的生存期較短,預(yù)后相對(duì)較差。所以,胃癌的早期診斷顯得尤為重要。目前,很多胃癌相關(guān)基因的異常甲基化已經(jīng)被證實(shí),越來越多的研究表明,在胃癌形成的早期階段,DNA的異常甲基化導(dǎo)致表達(dá)沉默的現(xiàn)象便已出現(xiàn)[15]。因此,通過甲基化特異性實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)、亞硫酸氫鹽測(cè)序法、亞硫酸氫鹽焦磷酸測(cè)序法等技術(shù)測(cè)定相關(guān)基因的甲基化狀態(tài),對(duì)于胃癌的早期診斷有一定的臨床價(jià)值。

        2.1血漿中游離DNA異常甲基化與胃癌早期診斷 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道,在胃癌患者的血漿中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)死亡相關(guān)蛋白激酶K(death-associated protein kinase,DAPK)、上皮鈣黏素、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶P1、抑癌基因p15、p16等基因的異常甲基化,它們是由胃癌細(xì)胞中參與循環(huán)的核酸釋放入血漿,與胃癌組織中的基因異常甲基化密切相關(guān),可以作為一類生物標(biāo)志物,應(yīng)用于胃癌的診斷[16]。Lu等[5]研究發(fā)現(xiàn),血漿中游離RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3的高甲基化在胃癌的早期診斷及術(shù)后評(píng)估中有重要的意義。此外,p16啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化被認(rèn)為是胃癌發(fā)生的早期分子事件,因此在血漿中檢測(cè)p16基因的甲基化水平可以用來診斷早期胃癌[17]。同胃癌組織類似,胃癌患者血漿中也存在多種基因共同發(fā)生異常甲基化[18]。

        2.2胃液中脫落腫瘤細(xì)胞DNA異常甲基化與胃癌早期診斷 由于DNA在胃酸的作用下容易發(fā)生變性,因此胃液脫落細(xì)胞檢查不能作為胃癌診斷的一個(gè)手段。然而胃液中可以找到很多黏膜細(xì)胞,所以在胃液中尋找胃癌脫落細(xì)胞,并檢測(cè)其DNA甲基化狀態(tài),可能成為胃癌早期診斷的一種非侵入性方法。已有文獻(xiàn)報(bào)道,在胃癌患者的胃液中成功檢測(cè)到了MINT25、RORA、膠質(zhì)細(xì)胞源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、整合素-金屬蛋白水解酶23、PRDM5以及髓細(xì)胞白血病因子1基因的異常甲基化,其中MINT25基因的甲基化在胃癌的早期診斷中具有較高的靈敏度(90%)和特異度(96%)[19]。這些研究說明,檢測(cè)胃液中脫落胃癌細(xì)胞的DNA甲基化水平,可以為胃癌早期診斷提供新的選擇。

        3 DNA異常甲基化與胃癌的藥物治療

        DNA異常甲基化是一種可逆的表觀遺傳學(xué)改變,在胃癌細(xì)胞中許多抑癌基因發(fā)生高甲基化及表達(dá)沉默,因此通過去甲基化藥物可以使抑癌基因脫甲基化,重新獲得表達(dá),從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。基因高甲基化是通過DNMT的作用發(fā)生的。研究發(fā)現(xiàn),DNMT的異常表達(dá)在包括胃癌等腫瘤的形成中起著重要作用[20]。因此,DNMT抑制劑被認(rèn)為是治療腫瘤的新型藥物。DNMT抑制劑主要有兩大類,核苷酸類與非核苷酸類[21]。有關(guān)核苷酸類的研究報(bào)道較多,以5-氮雜胞苷(阿扎胞苷)和5-氮雜-2′-脫氧胞苷(地西他濱)為代表,分別于2004年和2006年被美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn),用于骨髓增生異常綜合征和急性粒細(xì)胞白血病的治療[22]。但是,目前尚未開展針對(duì)胃癌藥物治療的臨床試驗(yàn)。非核苷酸類DNMT抑制劑研究較少,其結(jié)構(gòu)多變,根據(jù)抑制機(jī)制的不同而不同,包括生物類黃酮、染料木黃酮等,但是均未進(jìn)入臨床研發(fā)。因此,非核苷酸類DNMT抑制劑應(yīng)用于腫瘤的藥物治療,仍需要進(jìn)一步探索和努力。

        此外,DNA異常甲基化還與胃癌細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性相關(guān)。一些化療藥物通過損傷腫瘤細(xì)胞的DNA從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而,凋亡相關(guān)基因一旦出現(xiàn)異常甲基化,導(dǎo)致凋亡信號(hào)途徑失活,則化療藥物不易引起腫瘤細(xì)胞凋亡,該現(xiàn)象被認(rèn)為與化療耐藥相關(guān)。Sugita等[23]研究報(bào)道,在80例胃癌術(shù)后接受氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的化學(xué)治療患者標(biāo)本中,用甲基化特異性實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2/腺病毒E1B19 kD相互作用蛋白3和DAPK的甲基化狀態(tài),兩者的甲基化率分別為39%、41%,甲基化的Bcl-2/腺病毒E1B19 kD相互作用蛋白3和(或)DAPK對(duì)氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的化療藥物敏感性較未發(fā)生甲基化者差,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示兩者對(duì)氟尿嘧啶類化療藥物耐藥。Ivanova等[24]研究發(fā)現(xiàn),胃癌細(xì)胞中骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平與表達(dá)呈負(fù)相關(guān),其甲基化及表達(dá)狀態(tài)有望成為胃癌細(xì)胞順鉑耐藥的一個(gè)標(biāo)志,針對(duì)BMP4的靶向治療能增加胃癌細(xì)胞的敏感性,并且BMP4的表達(dá)對(duì)奧沙利鉑沒有交叉耐藥現(xiàn)象。該研究提示,BMP4表達(dá)陽(yáng)性的患者臨床上可以使用奧沙利鉑替代順鉑進(jìn)行有效的化學(xué)治療。上述DNA異常甲基化與藥物敏感性研究可以應(yīng)用于臨床指導(dǎo)個(gè)體化用藥,為胃癌患者選擇最有效的化學(xué)治療方案。

        4 DNA異常甲基化與胃癌的預(yù)后評(píng)價(jià)

        胃癌患者的預(yù)后取決于確診時(shí)的臨床分期及有效的治療方式,因此早期診斷及最佳的治療是胃癌患者預(yù)后最好的保證。DNA異常甲基化不僅有助于胃癌早期診斷及化療藥物的個(gè)體化選擇,而且對(duì)患者的預(yù)后有一定的提示作用。Bae等[25]研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)散在核元件1(long interspersed nucleotide element-1,LINE-1)甲基化水平依照腸上皮化生、胃腺瘤、胃癌的發(fā)展順序逐漸下降,并且LINE-1低甲基化與不良的預(yù)后密切相關(guān)。Shigaki等[26]也發(fā)現(xiàn),LINE-1在胃癌組織中甲基化水平較正常胃黏膜組織低,LINE-1低甲基化提示總體生存率較低,預(yù)后不良。2013年,有韓國(guó)學(xué)者報(bào)道,提取53例行胃癌切除術(shù)患者的術(shù)前及術(shù)后10 d血漿DNA,甲基化特異性實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)p16甲基化水平,得出甲基化率分別為79.2%和54.7%,且術(shù)后p16甲基化消失者較術(shù)后未消失者的生存期更長(zhǎng)久[27]說明,p16異常甲基化與患者的預(yù)后有一定的關(guān)聯(lián)性。

        5 小 結(jié)

        DNA異常甲基化在胃癌的發(fā)生和發(fā)展、早期診斷、藥物治療及預(yù)后評(píng)價(jià)中均起到一定的作用,但是仍然存在許多問題。胃癌患者體內(nèi)有多種基因發(fā)生異常甲基化,而目前甲基化檢測(cè)手段很有限,需要進(jìn)一步提高其敏感性和特異性,以便早期診斷胃癌,盡早實(shí)現(xiàn)針對(duì)某一基因的靶向治療,延長(zhǎng)胃癌患者的生存期。另外,基因異常甲基化是一種可逆的表觀遺傳學(xué)改變,可以認(rèn)為DNMT抑制劑治療腫瘤同樣是一個(gè)可逆的過程,經(jīng)治療一段時(shí)間后,基因可能會(huì)恢復(fù)到原來的甲基化狀態(tài),導(dǎo)致治療失敗。同時(shí),藥物治療劑量及不良反應(yīng)有待于進(jìn)一步探究。相信隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展及研究的不斷深入,以上問題將會(huì)得到解決。

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