張峰峰 謝鳳行 周 可 孫海波 李亞玲 趙玉潔

(天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心，天津，300192)

鹽漬土是地球陸地上分布廣泛的一類(lèi)土壤，目前全世界約有9.54 億hm2，我國(guó)約有9 913 萬(wàn)hm2［1］，并且有逐年增加的趨勢(shì)，土壤鹽漬化已成為影響農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)和植物分布的重要因素。如何采取措施降低鹽分對(duì)植物的脅迫或提高植物的耐鹽能力，是鹽漬土生物改良的核心問(wèn)題。近年來(lái)，通過(guò)生物改良技術(shù)提高植物耐鹽性的思想已被人們所接受。外生菌根真菌是與植物根系共生的土壤真菌，其宿主植物主要是被子植物和裸子植物中的喬木，具有較高的生產(chǎn)力。大量研究表明，外生菌根真菌可擴(kuò)大宿主根系的吸收面積，提高宿主植物吸收營(yíng)養(yǎng)和水分的能力，減少鹽離子對(duì)宿主的毒害等，從而具有提高植物的耐鹽性［2－4］、促進(jìn)宿主植物在干旱鹽堿環(huán)境生長(zhǎng)的作用，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的恢復(fù)和重建具有十分重要的意義。天津?yàn)I海新區(qū)作為我國(guó)三大經(jīng)濟(jì)特區(qū)之一，在開(kāi)發(fā)的過(guò)程中，面臨著鹽堿地綠化難的問(wèn)題。本研究選用紅絨蓋牛肝菌(Xerocomus chrysenteron)、灰環(huán)粘蓋牛肝菌(Suillus laricinus)、灰鵝膏菌(Amanita vaginata)3 種外生菌根真菌在培養(yǎng)基上進(jìn)行耐鹽性試驗(yàn)，通過(guò)分析鹽脅迫對(duì)3 種外生菌根真菌生長(zhǎng)的影響，研究外生菌根真菌的抗鹽性，為其在鹽堿地區(qū)的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種和培養(yǎng)基

紅絨蓋牛肝菌、灰環(huán)粘蓋牛肝菌、灰鵝膏菌為天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心微生物實(shí)驗(yàn)室保藏菌種。采用PDA 培養(yǎng)基和MMN 培養(yǎng)液。

1.2 鹽脅迫對(duì)菌根真菌菌絲生長(zhǎng)速度的測(cè)定

在pH=7.0 的PDA 培養(yǎng)基中，分別加入0.2、0.4、0.6、0.8 mol·L－1的NaCl，以不加NaCl 為對(duì)照。將培養(yǎng)基經(jīng)高壓濕熱滅菌(121 ℃，20 min)，取20 mL 傾入直徑為90 mm 的培養(yǎng)皿內(nèi)。在PDA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d 的菌根真菌上，取菌落邊緣直徑為6 mm 的菌餅，分別接種于不同濃度NaCl 的培養(yǎng)皿中，置于恒溫箱內(nèi)25 ℃培養(yǎng)。每個(gè)菌種重復(fù)4 次，處理數(shù)為3×5×4。每天按垂直方向測(cè)量菌落直徑，直到菌落長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿為止。在pH=7.0 的PDA 培養(yǎng)基中，分別加入0.1、0.2、0.3、0.4 mol·L－1Na2SO4，以不加Na2SO4為對(duì)照。滅菌接種，測(cè)量方法同NaCl 處理。

1.3 鹽脅迫對(duì)菌根真菌菌絲生物量的測(cè)定

在pH=7.0 的MMN 培養(yǎng)液中，分別加入0.2、0.4、0.6、0.8 mol·L－1NaCl，以不加NaCl 為對(duì)照。分裝250 mL 的三角瓶?jī)?nèi)(100 mL·瓶－1)，高壓濕熱滅菌(121 ℃，20 min)。在PDA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的菌根真菌上，取菌落邊緣直徑為6 mm 的菌餅，分別接種于不同濃度NaCl 的培養(yǎng)液中，置于恒溫?fù)u床上25 ℃培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為100 r·min－1。每個(gè)菌種重復(fù)3 次，處理數(shù)為3×9×3。10 d 后將培養(yǎng)液中的菌絲體過(guò)濾，用去離子水沖洗，置于烘箱內(nèi)105 ℃烘至恒質(zhì)量，干燥器內(nèi)冷卻后，用AL204 型電子天平稱(chēng)菌絲體干質(zhì)量。在pH=7.0 的MMN 培養(yǎng)液中，分別加入0.1、0.2、0.3、0.4 mol·L－1Na2SO4，以不加Na2SO4為對(duì)照。滅菌接種，測(cè)量方法同NaCl 處理。

1.4 菌絲體Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定

將稱(chēng)質(zhì)量后的菌絲體置于50 mL 的燒杯中，向燒杯中滴加5 mL HNO3溶液，在電熱板上300 ℃加熱消解15 min，然后逐滴滴加H2O2，直到溶液中的菌絲體殘留物全部消解，繼續(xù)加熱15 min，使剩余酸溶液揮發(fā)，冷卻后將菌絲體消化液定容至50 mL。用6400A 型火焰光度計(jì)測(cè)定菌絲體消化液中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)［3］。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 15.0 軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽脅迫對(duì)外生菌根真菌菌絲生長(zhǎng)的影響

2.1.1 紅絨蓋牛肝菌

由圖1可知，紅絨蓋牛肝菌的菌絲生長(zhǎng)較為緩慢。在不同濃度的NaCl 處理下接菌14 d 后(圖1A)，其菌落直徑最高僅為33.7 mm。不同濃度NaCl 處理并未影響菌絲的生長(zhǎng)，各個(gè)濃度下，第14 d 的菌落直徑無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在不同濃度Na2SO4處理下，接菌14 d 后，其菌落直徑最大僅為47 cm(圖1B)，各濃度Na2SO4處理間的菌落直徑無(wú)顯著差異(P＞0.05)?？傊?，紅絨蓋牛肝菌的菌絲生長(zhǎng)較為緩慢，不同濃度不同種類(lèi)的鹽分脅迫并未影響其生長(zhǎng)。

圖1 不同鹽濃度脅迫下紅絨蓋牛肝菌的菌落直徑增長(zhǎng)曲線(xiàn)

2.1.2 灰環(huán)粘蓋牛肝菌

灰環(huán)粘蓋牛肝菌在對(duì)照中，生長(zhǎng)14 d 后其菌落直徑為52.5 cm，而在加入不同濃度NaCl 后，其生長(zhǎng)受到顯著抑制。在低濃度(0.2 mol·L－1)NaCl 脅迫下，接種14 d 后，其菌落直徑均低于對(duì)照的50%，說(shuō)明該菌種對(duì)NaCl 的脅迫較為敏感(圖2A)。在0.6～0.8 mol·L－1NaCl 脅迫下，灰環(huán)粘蓋牛肝菌生長(zhǎng)量均較小，因此，其最大的NaCl 耐受濃度應(yīng)為0.6 mol·L－1。在各濃度Na2SO4脅迫下，灰環(huán)粘蓋牛肝菌受到的抑制較大(圖2B)。與對(duì)照相比，Na2SO4和NaCl 脅迫類(lèi)似，也嚴(yán)重影響了灰環(huán)粘蓋牛肝菌菌絲的生長(zhǎng)，說(shuō)明此菌種對(duì)Na+比較敏感，低濃度的鹽脅迫(0.2 mol·L－1)就可顯著抑制其菌絲的生長(zhǎng)。

2.1.3 灰鵝膏菌

灰鵝膏菌在NaCl 脅迫下(圖3A)，對(duì)照接種11 d 后長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿，生長(zhǎng)速度較快。隨著NaCl 濃度的增加，其生長(zhǎng)受到抑制。在0.8 mol·L－1NaCl處理下生長(zhǎng)完全受到抑制，在0.6 mol·L－1NaCl 脅迫下生長(zhǎng)量也較少(圖3A)?；淫Z膏菌在不同濃度Na2SO4脅迫下(圖3B)，對(duì)照在接種12 d 后長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿，隨著Na2SO4濃度的增加，其生長(zhǎng)也受到抑制，在設(shè)定的最大Na2SO4濃度0.4 mol·L－1條件下，其生長(zhǎng)雖然受到抑制，但生長(zhǎng)量較其在0.8 mol·L－1NaCl 處理下高，說(shuō)明該菌在加入NaCl 和Na2SO4鈉離子濃度相同的情況下，生長(zhǎng)受到NaCl 的抑制更大，說(shuō)明NaCl 中的Cl－也對(duì)該菌的生長(zhǎng)具有很強(qiáng)的抑制作用。

2.2 鹽脅迫對(duì)外生菌根真菌日平均擴(kuò)展速度的影響

由表1可見(jiàn)，紅絨蓋牛肝菌在0.2、0.4、0.6 mol·L－1NaCl脅迫下，其生長(zhǎng)速度顯著高于對(duì)照(P ＜0.05)，說(shuō)明NaCl 脅迫并未抑制該菌株的生長(zhǎng)，反而有很大的促進(jìn)作用。灰環(huán)粘蓋牛肝菌在不同濃度NaCl 脅迫下菌絲生長(zhǎng)速度均顯著低于對(duì)照(P ＜0.05)，低濃度的NaCl 脅迫(0.2 mol·L－1)即可顯著抑制其生長(zhǎng)速度，說(shuō)明該菌株對(duì)NaCl 的存在較為敏感?；淫Z膏菌則隨著NaCl 濃度的逐漸增大其生長(zhǎng)速度逐漸降低，在高濃度(0.8 mol·L－1)脅迫下則不生長(zhǎng)，各個(gè)處理間差異顯著(P＜0.05)。比較同濃度下不同菌株的生長(zhǎng)速度，發(fā)現(xiàn)在0、0.2、0.4 mol·L－1NaCl 脅迫下，灰鵝膏菌的生長(zhǎng)速度均高于其他2 種菌株，而在0.6、0.8 mol·L－1NaCl 脅迫下，紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)速度則高于其他2 種菌株。說(shuō)明在低濃度NaCl 脅迫下，灰鵝膏菌的生長(zhǎng)速度較快，而在高濃度NaCl 脅迫下，紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)速度較快。

圖2 不同鹽濃度脅迫下灰環(huán)粘蓋牛肝菌的菌落直徑增長(zhǎng)曲線(xiàn)

圖3 不同鹽濃度脅迫下灰鵝膏菌的菌落直徑增長(zhǎng)曲線(xiàn)

表1 鹽脅迫對(duì)3 種外生真菌日平均擴(kuò)展速度的影響

對(duì)不同濃度Na2SO4處理下，同一菌株的生長(zhǎng)速度進(jìn)行比較(表1)。結(jié)果表明:紅絨蓋牛肝菌在0.1、0.2、0.3 mol·L－1Na2SO4脅迫下，其生長(zhǎng)速度和對(duì)照相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)，而在0.4 mol·L－1Na2SO4脅迫下，其生長(zhǎng)速度顯著低于對(duì)照(P＜0.05)。說(shuō)明低濃度Na2SO4并未抑制其生長(zhǎng)?；噎h(huán)粘蓋牛肝菌在Na2SO4脅迫的條件下，菌絲生長(zhǎng)速度均顯著低于對(duì)照(P＜0.05)，低濃度(0.1 mol·L－1)的Na2SO4脅迫都可顯著抑制其生長(zhǎng)速度，說(shuō)明該菌株對(duì)Na2SO4的存在較為敏感?；淫Z膏菌的生長(zhǎng)速度則隨著Na2SO4濃度增大逐漸降低。比較同濃度下不同菌株的生長(zhǎng)速度，發(fā)現(xiàn)在0.1、0.2、0.3 mol·L－1Na2SO4脅迫下，灰鵝膏菌的生長(zhǎng)速度均高于其他2 種菌株，而在0.4 mol·L－1Na2SO4脅迫下，紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)速度則高于其他2 種菌株。說(shuō)明在低濃度Na2SO4脅迫下，灰鵝膏菌的生長(zhǎng)速度較快，而在高濃度Na2SO4脅迫下，紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)速度較快，這和NaCl 脅迫下的結(jié)果類(lèi)似。

相同鹽濃度脅迫下，Na2SO4處理的生長(zhǎng)速度均高于NaCl處理，以灰鵝膏菌為例:同為C(Na+)=0.8 mol/L 的條件下，在Na2SO4脅迫下生長(zhǎng)速度可達(dá)到1.43 mm·d－1，而在NaCl 脅迫下則不生長(zhǎng)。這可能由于NaCl 中的Cl－也對(duì)菌株的生長(zhǎng)具有很強(qiáng)的抑制作用。

2.3 鹽脅迫對(duì)外生菌根真菌菌絲生物量的影響

不同濃度NaCl 脅迫對(duì)3 種外生菌根真菌的生物量都有不同程度的影響(表2)。對(duì)不同濃度NaCl 處理下同一菌株的生物量比較可知，紅絨蓋牛肝菌對(duì)照菌株的生物量最高，達(dá)0.273 g，低濃度的(0.2 mol·L－1)NaCl 并未影響其生物量，與對(duì)照差異不顯著(P ＞0.05)，而中高濃度(0.4 ～0.8 mol·L－1)NaCl 脅迫下該菌株的生物量，顯著低于對(duì)照(P＜0.05)。對(duì)灰環(huán)粘蓋牛肝菌而言，中低濃度的(0.2～0.4 mol·L－1)NaCl 并未影響其生物量，與對(duì)照差異不顯著(P ＞0.05)，而高濃度(0.6 ～0.8 mol·L－1)NaCl脅迫下，該菌株的生物量顯著低于對(duì)照(P ＜0.05)?；淫Z膏菌的生物量則隨著NaCl 濃度的增加而逐漸減少，各個(gè)濃度NaCl 脅迫下的生物量，均顯著低于對(duì)照(P＜0.05)。同濃度NaCl 脅迫下不同菌株的生物量由大到小依次為紅絨蓋牛肝菌、灰環(huán)粘蓋牛肝菌、灰鵝膏菌。

表2 鹽脅迫對(duì)3 種外生真菌的生物量的影響

不同濃度的Na2SO4對(duì)3 種外生菌根真菌的生物量都有不同程度的影響(表2)。紅絨蓋牛肝菌的生物量受到Na2SO4的影響并不大，在0.1、0.2、0.3 mol·L－1Na2SO4脅迫下，其生物量和對(duì)照相比，無(wú)顯著差異(P＞0.05);而在0.4 mol·L－1Na2SO4脅迫下，其生物量和對(duì)照差異顯著(P＜0.05)。這和其在固體平板上的生長(zhǎng)速度差異相似。說(shuō)明Na2SO4對(duì)其在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，但是其抑制作用并不強(qiáng)?；噎h(huán)粘蓋牛肝菌并未受到Na2SO4脅迫的影響，在不同濃度下，其生物量并未明顯的變化，對(duì)照與各個(gè)鹽濃度下的生物量并無(wú)顯著差異(P＞0.05)，說(shuō)明Na2SO4的存在并未影響其在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)?；淫Z膏菌的生物量隨著Na2SO4濃度的升高，存在明顯的降低趨勢(shì)，雖然在0.1 mol·L－1的情況下其生物量與對(duì)照無(wú)顯著差異，但其在0.3、0.4 mol·L－1的情況下，其生長(zhǎng)受到了明顯地抑制，說(shuō)明其不適宜在高濃度的Na2SO4環(huán)境中生存。比較同濃度Na2SO4脅迫下不同菌株的生物量，發(fā)現(xiàn)紅絨蓋牛肝菌均高于其他2 種菌株，這和NaCl 脅迫下不同菌株的生物量情況相似，說(shuō)明紅絨蓋牛肝菌生物量在鹽脅迫下均較高。

對(duì)同種菌株在同種鹽分不同濃度下的生長(zhǎng)速度和生物量進(jìn)行相關(guān)性分析(表3)，發(fā)現(xiàn)灰鵝膏菌生長(zhǎng)速度和生物量顯著相關(guān)(P＜0.05)，紅絨蓋牛肝菌和灰環(huán)粘蓋牛肝菌的生長(zhǎng)速度和生物量無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05)，可能和菌株菌絲的密度有較大的關(guān)系，生長(zhǎng)較快的菌株其菌絲密度不一定較高，其生物量也無(wú)相應(yīng)的增加;也有可能是菌株在固體液體培養(yǎng)基上的表現(xiàn)不同所致，固體培養(yǎng)基氧氣供應(yīng)量較多，適合部分菌株生長(zhǎng)，故生長(zhǎng)速度較快，而液體培養(yǎng)基提供氧氣較少，故部分菌株生物量較少。

表3 同種鹽分不同濃度下的生長(zhǎng)速度和生物量相關(guān)性

2.4 鹽脅迫對(duì)外生菌根真菌菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

不同濃度NaCl 對(duì)3 種外生菌根真菌菌絲體內(nèi)Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)都有不同程度的影響(表4)。紅絨蓋牛肝菌菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，0.2 mol·L－1NaCl 脅迫條件下，其菌絲體的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.90 mg·g－1，和對(duì)照菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)無(wú)顯著差異(P＞0.05)，而在0.4、0.6、0.8 mol·L－1NaCl 濃度下，其菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均超過(guò)4 mg·g－1，顯著高于對(duì)照(P＜0.05)?；噎h(huán)粘蓋牛肝菌菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，隨著NaCl 濃度的增加而逐漸增多，其菌絲體的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照(P＜0.05)，且在0.6 mol·L－1NaCl 濃度下，達(dá)到最高，為42.23 mg·g－1?；淫Z膏菌菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，且隨著NaCl 濃度的增加逐漸增多，在NaCl 各濃度脅迫下，其菌絲體的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著高于對(duì)照(P＜0.05)，且在0.6、0.8 mol·L－1NaCl 濃度下，達(dá)到30 mg·g－1以上。同種菌株在中高濃度(0.4、0.6、0.8 mol·L－1)NaCl 培養(yǎng)基中的菌絲的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)并無(wú)明顯差異，并未隨著鹽濃度的升高而升高，可能是由于在高濃度下菌絲對(duì)Na+吸收也具有飽和性，達(dá)到一定含量就不會(huì)吸收;另一方面可能由于高濃度下菌絲生長(zhǎng)量較少，其對(duì)Na+也減少了吸收。比較不同菌株在同一NaCl 濃度下菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)，基本呈現(xiàn)出灰環(huán)粘蓋牛肝菌＞灰鵝膏菌＞紅絨蓋牛肝菌的情況，可能是由于紅絨蓋牛肝菌的生物量較大，降低了菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

由表4可知，不同濃度Na2SO4對(duì)3 種外生菌根真菌菌絲體內(nèi)Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)影響較大，但和NaCl 脅迫下的表現(xiàn)不同，對(duì)同一菌株菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨Na2SO4濃度的升高而逐漸增加，且均顯著高于對(duì)照(P＜0.05)，在0.4 mol·L－1Na2SO4濃度下，菌株菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均達(dá)到最高。比較不同菌株在同一Na2SO4濃度下菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)，也基本呈現(xiàn)出灰環(huán)粘蓋牛肝菌＞灰鵝膏菌＞紅絨蓋牛肝菌的情況，和NaCl 脅迫下的表現(xiàn)相似。說(shuō)明這3 種菌株對(duì)Na+的吸收能力和菌株本身的生長(zhǎng)情況有關(guān)，而與何種鹽分脅迫無(wú)關(guān)。

表4 鹽脅迫對(duì)3 種外生真菌菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

對(duì)不同鹽濃度和對(duì)應(yīng)的菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行相關(guān)性分析(表5)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中的NaCl 濃度和對(duì)應(yīng)的3 個(gè)菌株菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著相關(guān)(P＜0.05);培養(yǎng)液中的Na2SO4濃度和對(duì)應(yīng)的3 個(gè)菌株菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為極顯著相關(guān)(P＜0.01)。

表5 不同種類(lèi)鹽濃度和菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)相關(guān)性

3 結(jié)論與討論

土壤鹽漬化是當(dāng)前農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)中不可忽視的問(wèn)題。土壤鹽分含量過(guò)高破壞了植物體內(nèi)的離子平衡，減少了植物對(duì)水分的吸收，抑制了植物的生長(zhǎng)甚至導(dǎo)致死亡［5－7］。近年來(lái)，利用外生菌根真菌提高樹(shù)木耐鹽性的報(bào)道較多。Muhsin 等［8］研究表明，在鹽分脅迫下，外生菌根真菌能明顯降低植物的鹽分吸收，提高植物營(yíng)養(yǎng)吸收和蒸騰作用。Bois 等［9］將3 種外生菌根真菌接種于北美云杉(Picea glauca)和北美短葉松(Pinus banksiana)的實(shí)生苗上，發(fā)現(xiàn)外生菌根真菌提高了植物在鹽脅迫土壤上的存活率和生長(zhǎng)量。范克勝等［10］在鹽脅迫條件下將3 種微生物接種于美洲黑楊，發(fā)現(xiàn)接菌可改善葉片葉綠素?zé)晒夂凸夂蠀?shù)、光響應(yīng)參數(shù)，減輕鹽脅迫對(duì)宿主造成的傷害，提高楊樹(shù)的耐鹽能力?？傊?，外生菌根真菌接種植物可以顯著提高植物的耐鹽性。

在含鹽培養(yǎng)基上對(duì)外生菌根真菌的生長(zhǎng)情況進(jìn)行研究是初步鑒定菌株耐鹽性的較為有效的方法。Dixon 等［11］在離體培養(yǎng)的條件下，研究6 種外生菌根真菌對(duì)NaCl、Na2SO4、Na3C6H5O7的耐受性，發(fā)現(xiàn)Pisolithus tinctorius 和 Suillus luteus 對(duì) NaCl 和Na2SO4的耐受性較高。黃藝等［12］對(duì)3 種外生菌根真菌在含有不同種類(lèi)鈉鹽(NaCl，Na2SO4)的Kottke培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)研究，發(fā)現(xiàn)2 種鹽分的脅迫并未影響B(tài). edulis 的生物量，其菌絲中Na+積累量最高，耐鹽性較強(qiáng)。在本研究中，2 種鹽分脅迫并未影響紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)，其各鹽濃度間差異較小;而低濃度的鹽脅迫卻嚴(yán)重抑制了灰環(huán)粘蓋牛肝菌生長(zhǎng);灰鵝膏菌的生長(zhǎng)狀況隨著鹽濃度的升高而逐漸受到抑制。比較3 種菌株的生長(zhǎng)速度，在中低濃度鹽脅迫下，灰鵝膏菌的生長(zhǎng)速度最快，而在高濃度鹽脅迫下，紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)速度最快。比較3 種菌株的生物量，發(fā)現(xiàn)在2 種鹽分條件下均呈現(xiàn)紅絨蓋牛肝菌＞灰環(huán)粘蓋牛肝菌＞灰鵝膏菌的趨勢(shì)。比較3種菌株菌絲體中Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)，灰環(huán)粘蓋牛肝菌＞灰鵝膏菌＞紅絨蓋牛肝菌，可能是由于紅絨蓋牛肝菌的生物量較大，降低了菌絲體中的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)。比較相同濃度不同鹽分對(duì)外生菌根真菌的影響，發(fā)現(xiàn)，Na2SO4處理的生長(zhǎng)速度、生物量均高于NaCl 處理，特別是高鹽濃度(C(Na+)= 0.6 ～0.8 mol/L)下，其表現(xiàn)尤為明顯，可能由于NaCl 脅迫下的Cl－也對(duì)菌株的生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用。總之，鹽分的存在并沒(méi)有影響紅絨蓋牛肝菌的生長(zhǎng)，其在高鹽濃度下的生長(zhǎng)速度和生物量均最高，其菌絲體內(nèi)的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，說(shuō)明該菌株在鹽脅迫的條件下，生長(zhǎng)良好，是較為理想的耐鹽菌株?；噎h(huán)粘蓋牛肝菌對(duì)鹽脅迫較為敏感，較低濃度的鹽脅迫即可降低其生長(zhǎng)速度，其菌絲體內(nèi)Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)也較高?；淫Z膏菌的耐鹽性居中，隨著鹽濃度的增加，其生長(zhǎng)速度和生物量逐漸降低。

有研究表明，外生菌根真菌對(duì)鹽脅迫的抗性，不僅體現(xiàn)在菌根菌的生長(zhǎng)和生物量上，還體現(xiàn)在其營(yíng)養(yǎng)菌絲對(duì)離子的吸收和積累以及平衡調(diào)節(jié)的能力上。具有良好耐鹽堿性的外生菌根真菌可分為2 種類(lèi)型。一種為吸鹽型，即菌根真菌侵染植物后，可吸收大量的離子并儲(chǔ)存在菌絲中，以減輕對(duì)植物的毒害作用，提高植物對(duì)鹽脅迫的抗性［13］。Langenfeld等［14］的研究表明菌根菌Paxillus involutus 并非以天然屏障的作用來(lái)耐鹽堿。另一種為拒鹽型，即菌根真菌的菌絲抑制毒害離子的吸收，減少有毒離子進(jìn)入植物體內(nèi)，以減輕對(duì)植物的危害。Muhsin 等［8］研究發(fā)現(xiàn)Hebeloma crustuliniforme 能阻止植物吸收過(guò)多的鹽分，從而使得植物具有耐鹽性。在本試驗(yàn)中，紅絨蓋牛肝菌則屬于后者，在高濃度鹽分脅迫下，其菌絲體內(nèi)的Na+質(zhì)量分?jǐn)?shù)均低于其他2 種菌株，說(shuō)明其對(duì)Na+的吸收作用較弱，可阻止Na+向植物的轉(zhuǎn)運(yùn)。還有研究表明，外生菌根真菌菌絲體的生長(zhǎng)受培養(yǎng)基成分影響較大［15］。本試驗(yàn)中的紅絨蓋牛肝菌和黃藝等［12］研究的該菌種耐鹽性表現(xiàn)出較大差異，并且各菌種在純培養(yǎng)條件下與接種后的反映不同。雖然可以通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基上菌種的耐鹽性測(cè)試來(lái)推測(cè)接種植物后的響應(yīng)，但接種的植物種類(lèi)和環(huán)境因子等原因也影響了菌株作用的發(fā)揮，具體的接種效應(yīng)還需進(jìn)一步的試驗(yàn)探討。

［1］ 王遵親，祝壽泉，俞仁培.中國(guó)鹽漬土［M］.北京:科學(xué)出版社，1993.

［2］ 范克勝，吳小芹.3 種外生菌根真菌在楊樹(shù)栽植區(qū)鹽堿土壤中的適應(yīng)性分析［J］.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2009，33(4):53－56.

［3］ Ishida T A，Nara K，Ma Shurong. et al. Ectomycorrhizal fungal community in alkaline-saline soil in northeastern China［J］. Mycorrhiza，2009，19(5):329－335.

［4］ Bandou E，Lebailly F，Muller F，et al. The ectomycorrhizal fungus Scleroderma bermudense alleviates salt stress in seagrape (Coccoloba uvifera L.)seedlings［J］. Mycorrhiza，2006，16(8):559－565.

［5］ Tester M，Davenport R. Na+tolerance and Na+transport in higher plants［J］. Annals of Botany，2003，91(5):503－527.

［6］ Zhu J K. Plant salt tolerance［J］. Trends Plant Science，2001，6(2):66－71.

［7］ Munns R. Genes and salt tolerance:bringing them together［J］.New Phytologist，2005，167(3):645－663.

［8］ Muhsin T M，Zwiazek J J. Colonization with Hebeloma crustuliniforme increases water conductance and limits shoot sodium up take in white spruce (Picea glauca)seedlings［J］. Plant and Soil，2002，238(2):217－225.

［9］ Bois G，Bigras F J，Bertrand A，et al. Ectomycorrhizal fungi affect the physiological responses of Picea glauca and Pinus banksiana seedlings exposed to an NaCl gradient［J］. Tree Physiology，2006，26(9):1185－1196.

［10］ 范克勝，吳小芹，任嘉紅，等.鹽脅迫下外生菌根真菌與根際有益細(xì)菌互作對(duì)楊樹(shù)光合特性的影響［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2011，31(6):1216－1222.

［11］ Dixon R K，Rao M V，Garg V K. Salt stress affects in vitro growth and in situ symbioses of ectomycorrhizal fungi［J］. Mycorrhiza，1993，3(2):63－68.

［12］ 黃藝，姜學(xué)艷，季海波，等.過(guò)量鈉鹽脅迫對(duì)3 種外生菌根真菌生長(zhǎng)和鈉元素積累的影響［J］.微生物學(xué)通報(bào)，2004，31(3):45－49.

［13］ Zhong Hua，Li Jing，Chen Shaoliang，et al. Effect of NaCl on growth and ion relation in two salt-tolerant strains of Paxillus involutus［J］. For Stud China，2008，10(2):95－100.

［14］ Langenfeld-Heyser R，Gao J，Ducic T，et al. Paxillus involutus mycorrhiza attenuate NaCl－stress responses in the salt-sensitive hybrid poplar Populus×canescens［J］. Mycorrhiza，2007，17(2):121－131.

［15］ Pfyffer G E，Rast D M. The polyol pattern of fungi as influenced by the carbohydrate nutrient source［J］.New Phytologist，1988，109(3):321－326.