宋金翠楊成 劉艷榮

（國家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，山西太原030012）

液質(zhì)聯(lián)用測定氟尼辛葡甲胺的條件優(yōu)化*

宋金翠**楊成 劉艷榮

（國家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，山西太原030012）

建立了液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定氟尼辛葡甲胺含量的方法,對其檢驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。采用Agilent eclipse plus C18色譜柱分離，用體積濃度0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸乙腈溶液作為流動相梯度洗脫，電噴霧正離子（ESI+）模式電離，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式檢測，外標(biāo)法定量。該方法操作靈敏度高，重復(fù)性好。

液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法；電噴霧；氟尼辛葡甲胺；測定

氟尼辛葡甲胺（flunixin meglumine）是一種新型的、非甾體類動物專用的解熱鎮(zhèn)痛藥物。目前非甾體抗炎藥的檢測方法主要有毛細(xì)管電泳法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法。但利用液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS／MS法）測定氟尼辛葡甲胺的分析方法尚未見報(bào)道。

由于氟尼辛葡甲胺的極性較強(qiáng)，采用HPLC分析時(shí)，出峰時(shí)間很短，很難排除樣品基質(zhì)的干擾。因此，本研究采用液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS／MS法）測定氟尼辛葡甲胺，并對色譜條件和質(zhì)譜條件分別進(jìn)行了優(yōu)化，所建立的方法具有靈敏度高，重復(fù)性好的特點(diǎn)，能夠滿足現(xiàn)行獸藥殘留分析的要求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Agilent G6410B液質(zhì)聯(lián)用儀，美國Agilent公司；NM32LA氮?dú)獍l(fā)生器，英國PEAK公司。

1.1.2 試劑

色譜用水，符合GB/T 6682規(guī)定的一級水，其他用水為符合GB/T 6682規(guī)定的三級水；乙腈、甲醇，色譜純，美國DIKMA公司；甲酸，分析純，天津化學(xué)試劑三廠；氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)品，CAS號為42461-84-7，純度≥99.0%，化學(xué)式為C14H11F3N2O2·C7H17NO5，分子量為491.46，購于美國Dr.E公司；微孔濾膜，孔徑0.22 μm，有機(jī)相。

1.2 分析方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent eclipse plusC18柱（2.1 mm× 100 mm，3.5 μm）；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；流動相：A相為體積濃度0.1%甲酸水溶液，B相為0.1%甲酸乙腈溶液；梯度洗脫：0 min，5%B相；2 min，5%B相；8min，50%B相；10 min，95%B相；13 min，95%B相；13 min，5%B相。

1.2.2 質(zhì)譜條件

ESI電噴霧離子源；毛細(xì)管電壓3.0kV；正離子掃描；霧化器壓力：3.1 MPa；Gas Temp：350℃；Gas Flow：10L/min；碎裂電壓：135V；碰撞能量：20eV。

MS1 Heater：100℃；MS2 Heater：100℃；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）;MRM離子對：m/z為297.10/279.10，297.10/264.10。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜柱的選擇

氟尼辛葡甲胺含有羥基和氨基，極性較大，故選用現(xiàn)有的Agilent eclipse plus C18柱（2.1 mm× 100 mm，3.5 μm）能夠更好地達(dá)到分離效果，且利用液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）可以不要求有很高的分離度。

2.1.2 流動相溶劑的選擇

流動相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈等。

一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動性粘度小，價(jià)格低，是反相色譜最常用的流動相。乙腈-水系統(tǒng)，與甲醇相比，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高，且粘度較小。綜合上述條件，乙腈-水系統(tǒng)優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng)。

2.1.3 流動相洗脫條件的優(yōu)化

流動相采用等度洗脫，A相（體積濃度0.1%甲酸水）和B相（體積濃度0.1%甲酸乙腈）的體積比為5∶95時(shí)，出峰時(shí)間太早（約1.372 min），如圖1所示。

圖1 等度洗脫條件下氟尼辛葡甲胺的多反應(yīng)監(jiān)測圖

綜合考慮峰形和基質(zhì)效應(yīng)，流動相采用梯度洗脫（A相和B相作為流動相，乙腈比例在5%～95%范圍內(nèi)）時(shí)，分析結(jié)果如圖2所示。

圖2 梯度洗脫條件下氟尼辛葡甲胺的多反應(yīng)監(jiān)測圖

考慮到實(shí)際檢測樣品時(shí)時(shí)，樣品中可能會含有強(qiáng)保留的干擾物，若使用等度洗脫，出峰時(shí)間太早，目標(biāo)物和干擾物可能會在同一時(shí)間出峰，而達(dá)不到很好的分離效果；而使用梯度洗脫，可以延長出峰時(shí)間，從而能夠使目標(biāo)物和干擾物更好地分離，并且保持色譜及質(zhì)譜系統(tǒng)的干凈。因而本研究選擇了0 min，5%B相；2 min，5%B相；8 min，50%B相；10 min，95%B相；13 min，95%B相；13 min，5%B相梯度洗脫。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.2.1 監(jiān)測模式的選擇

電離模式的選擇主要由待測物的化學(xué)性質(zhì)決定，極性強(qiáng)采用ESI電離方式，極性弱采用APCI電離方式。本研究對氟尼辛葡甲胺選擇ESI電離方式，分別進(jìn)行正、負(fù)離子模式的MS2 Scan掃描，在12.63 min附近出現(xiàn)了特征分子離子峰，且在相同濃度條件下正離子模式的響應(yīng)明顯高于負(fù)離子模式，結(jié)果如圖3所示。

圖3 正離子（A）、負(fù)離子（B）兩種監(jiān)測模式的比較

2.2.2 定量離子、定性離子的選擇

在電噴霧離子源正離子掃描模式下，以流動注射方式對氟尼辛葡甲胺進(jìn)行母離子掃描，再對它的子離子進(jìn)行全掃描，選擇響應(yīng)值高的特征離子對作為定量及定性離子對，母離子m/z為297.10；子離子m/z為279.10、264.10，其中279.10為定量離子，結(jié)果如圖4所示。

圖4 氟尼辛葡甲胺的一級（A）、二級（B）質(zhì)譜圖

2.2.3 碎裂電壓的優(yōu)化

碎裂電壓作用于毛細(xì)管出口，如果碎裂電壓太小，母離子得不到裂解，如果碎裂電壓太大，則造成母離子源內(nèi)裂解。在一定的范圍內(nèi)碎裂電壓越高，碎裂效果越顯著，在50 V～200 V范圍內(nèi)對碎裂電壓進(jìn)行優(yōu)化，母離子響應(yīng)隨著碎裂電壓的不同而改變，當(dāng)碎裂電壓為135 V時(shí)離子強(qiáng)度最大，結(jié)果如圖5所示。

圖5 不同碎裂電壓下母離子響應(yīng)的比較

2.2.4 碰撞能量的優(yōu)化

碰撞能量的大小影響子離子的豐度。試驗(yàn)結(jié)果表明，碰撞能量在10 eV～40 eV的范圍內(nèi)，隨著碰撞能量的增大，母離子豐度逐漸降低，在CE≥30 eV時(shí)母離子消失，在CE=20eV時(shí)，子離子279.10豐度最大，在CE=35eV時(shí)，子離子264.10豐度最大。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確稱取氟尼辛葡甲胺0.01 g，用甲醇溶解定容至100 mL，配制成0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。再用甲醇逐級稀釋成0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣體積為10 μL，按質(zhì)量濃度由低到高進(jìn)行測定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)譜圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線分別見圖6和圖7。

圖6 氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)譜圖

圖7 氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

由標(biāo)準(zhǔn)曲線可以看出，在0.1 ng/mL～50.0 ng/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.999。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過對色譜條件和質(zhì)譜條件的摸索和優(yōu)化，建立了氟尼辛葡甲胺檢測的液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）分析方法，并能夠進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量測定。該方法在0.1 ng/mL～50 ng/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。試驗(yàn)表明，該方法操作靈敏度高，重復(fù)性好，可用于氟尼辛葡甲胺的檢測分析，也可為動物源性食品中氟尼辛葡甲胺殘留量的檢測提供參考。

［1］康永鋒，鄒世文，段吳平，等.鯽魚中4種非甾體抗炎藥殘留的分析研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（1）：286-288.

［2］彭濤，于靜，嚴(yán)矛，等超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定豬肝中非甾體類抗炎藥殘留［J］.分析化學(xué)研究報(bào)告，2009，37（3）：363-368.

［3］李存，江瀟瀟，吳銀良，等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛組織中氨丙啉殘留量［J］.分析化學(xué)研究簡報(bào)，2011，39（4）576-579.

Optimization for determination condition offlunixin meglumine by LC-MS/MS

SONGJin-cui**YANGCheng LIUYan-rong
（National quality supervision and inspection center of subsidiary agricultural products and spirits，F(xiàn)ood qualitysupervision and inspection academy of Shanxi province，Shanxi Taiyuan 030012，China）

The determination method of Flunixin meglumine byLC-MS/MSwas established and the determination condition was optimized.Flunixin meglumine was separated with C18（2.1 mm×100 mm，3.5 μm）column using 0.1% formic acid aqueous solution、0.1%formic acid acetonitrile solution as a gradient elution mobile phase.It was ionized under positive ion pattern by Electrospray Ionization Source（ESI+），detected byMultipleReaction Monitoring（MRM）and quantified byexternal standardmethod.

liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method（LC-MS/MS）；electrospray；flunixin meglumine；determination

TS207.3

A

1673-6044（2014）02-0055-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.02.020

*基本項(xiàng)目：國家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目“食品中氟尼辛葡甲胺的串聯(lián)液質(zhì)色譜方法的研究”（2010QK263）。

**宋金翠，女，1970年出生，2005年畢業(yè)于沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)專業(yè)，碩士，高級工程師。

2014-03-30