劉 波，黃世峰，袁 虹

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院：1．燒傷科／醫(yī)療美容科；2．檢驗(yàn)科；3．婦產(chǎn)科 400016）

宮頸癌是女性主要惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在發(fā)達(dá)國(guó)家位于惡性婦科腫瘤第3位，在中國(guó)則位于第2位［1］。每年全世界50余萬(wàn)新發(fā)病例中大約1／3來(lái)自中國(guó)。人乳頭瘤病毒（HPV）感染在宮頸癌發(fā)病中起重要作用，是宮頸癌的重要危險(xiǎn)因素［2-3］，但單純HPV感染并不足以引起宮頸上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化［4］和宮頸癌的發(fā)生［5］。因此，推測(cè)在宮頸組織低級(jí)別病變，即宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）向侵襲性宮頸癌轉(zhuǎn)化的過(guò)程中必定涉及其他影響癌基因、抑癌基因或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的細(xì)胞遺傳學(xué)改變。

FOXM1轉(zhuǎn)錄因子是FOX基因家族中的一個(gè)重要成員，僅特異性表達(dá)于增殖期細(xì)胞中，在細(xì)胞增殖、分化和凋亡過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用［6］。FOXM1與胚胎發(fā)育、衰老、再生和腫瘤等許多病理生理過(guò)程均有密切關(guān)系，可通過(guò)對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)因子的調(diào)控而促進(jìn)細(xì)胞周期G1期向S期、G2期向M期過(guò)渡，并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生有絲分裂［7］。新近的研究證實(shí)，F(xiàn)OXM1異常表達(dá)與多種人類惡性腫瘤包括肝癌［8］、乳腺癌［9］、肺癌［10］和膀胱癌［11］等的發(fā)生和發(fā)展均有密切關(guān)系，是腫瘤增殖所必需的轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)水平常與腫瘤的惡性進(jìn)展程度相關(guān)，已成為臨床腫瘤治療的一個(gè)新靶點(diǎn)［12］。然而，F(xiàn)OXM1在宮頸癌組織中的表達(dá)情況及其在宮頸癌發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中的臨床意義尚未見報(bào)道。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)宮頸CIN和鱗狀細(xì)胞癌組織中FOXM1表達(dá)情況，評(píng)估FOXM1與宮頸癌臨床病理學(xué)參數(shù)間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集2013年1～6月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科進(jìn)行宮頸活檢或手術(shù)治療、且未經(jīng)放化療的初診住院患者組織標(biāo)本77例，包括17例正常宮頸組織、22例CIN標(biāo)本、38例宮頸癌標(biāo)本，標(biāo)本類別均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。所有患者臨床資料完整，年齡25～71歲，平均47．6歲。

1．2 FOXM1和Ki-67免疫組織化學(xué)染色檢測(cè) 小鼠抗人FOXM1單克隆抗體和小鼠抗人Ki-67單克隆抗體均購(gòu)自Santa Cr uz公司，S-P免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色操作。

參照參考文獻(xiàn)［10］將FOXM1染色結(jié)果計(jì)為0～3分。0分：細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均未染色（-）；1分：細(xì)胞質(zhì)染色為主（＋）；2分：異質(zhì)性染色即細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核混合染色（＋＋）；3分：連續(xù)的細(xì)胞核染色（＋＋＋）。0分判為FOXM1表達(dá)陰性，1～3分者均判為陽(yáng)性表達(dá)。Ki-67抗原均定位于細(xì)胞核，以細(xì)胞核呈清晰棕黃色染色為陽(yáng)性。按切片中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的比例劃分染色等級(jí)：無(wú)明確陽(yáng)性細(xì)胞為（-）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%為弱陽(yáng)性；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于10%為強(qiáng)陽(yáng)性。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 FOXM1與臨床病理學(xué)參數(shù)的相關(guān)性分析采用SPSS13．0軟件進(jìn)行分析處理。分類數(shù)據(jù)采用Pearson′s χ2檢驗(yàn)或Fisher′s精確概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 正常宮頸組織、CIN組織和宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中FOXM1表達(dá)情況比較 采用免疫組織化學(xué)染色方法對(duì)正常宮頸組織、CIN組織和宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本中FOXM1表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，F(xiàn)OXM1在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的異常表達(dá)率分別為5．88%、63．6%和92．1%（表1）。正常宮頸上皮組織中FOXM1染色均為陰性或弱陽(yáng)性，陽(yáng)性染色僅見于基底膜下層和中間層宮頸組織中（圖1A）；而宮頸癌組織細(xì)胞核內(nèi)FOXM1出現(xiàn)高表達(dá)（圖1C）；CIN組織中FOXM1表達(dá)程度介于正常組織和宮頸癌組織之間（圖1B），且CIN組織內(nèi)FOXM1表達(dá)水平呈現(xiàn)從CINⅠ向CINⅢ逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)（圖2），提示FOXM1表達(dá)僅局限于增殖性宮頸上皮細(xì)胞中，且其表達(dá)水平與宮頸癌的惡性進(jìn)展顯著相關(guān)。

表1 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中FOXM1和Ki-67 表達(dá)結(jié)果分析［n（%）］

圖1 正常宮頸、CIN和宮頸癌組織FOXM1免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果（×200）

圖2 不同病變級(jí)別CIN組織中FOXM1免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果（×200）

2．2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中FOXM1表達(dá)水平與Ki-67表達(dá)水平的相關(guān)性分析 Ki-67是一種常用于對(duì)包括宮頸癌在內(nèi)的惡性腫瘤病變的增殖情況進(jìn)行評(píng)估的標(biāo)記物。為進(jìn)一步研究FOXM1在宮頸癌進(jìn)展中的作用，本研究進(jìn)一步通過(guò)免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)了Ki-67在以上各種宮頸組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。研究結(jié)果顯示，與FOXM1表達(dá)情況類似，絕大多數(shù)正常宮頸上皮組織中Ki-67表達(dá)為陰性或僅見微弱表達(dá)（表1）。使用10%作為臨界值時(shí)發(fā)現(xiàn)36例（94．8%）宮頸癌組織標(biāo)本中Ki-67為強(qiáng)表達(dá)，而僅2例（5．2%）為Ki-67低表達(dá)（表1）。通過(guò)對(duì)FOXM1和Ki-67的表達(dá)類型進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在所有宮頸癌組織中FOXM1染色增強(qiáng)與Ki-67陽(yáng)性增殖細(xì)胞比例呈強(qiáng)相關(guān)性（圖3），即FOXM1表達(dá)與宮頸癌組織中較高的Ki-67陽(yáng)性增殖分?jǐn)?shù)相關(guān)（表2）。以上結(jié)果提示FOXM1過(guò)表達(dá)于高度增殖的人宮頸癌組織中。

2．3 FOXM1表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)間的相關(guān)性分析 臨床病理學(xué)相關(guān)性分析顯示，宮頸癌組織中FOXM1陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤較晚的分期、較低的病理分化程度和術(shù)后復(fù)發(fā)均顯著相關(guān)，但與患者年齡、放療敏感性以及HPV感染等均無(wú)顯著相關(guān)性（表2）。

圖3 同一張宮頸癌病理組織切片中FOXM1和Ki-67免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

表2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中FOXM1表達(dá)情況及其與 患者臨床病理學(xué)參數(shù)相關(guān)性分析

3 討 論

FOXM1是一種典型的增殖相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞增殖、分化和凋亡過(guò)程中起重要作用。FOXM1在不同組織起源的多種人類腫瘤，如肝細(xì)胞肝癌［8］、乳腺癌［9］、肺癌［10］、膀胱癌［11］等惡性腫瘤中均普遍上調(diào)，并與腫瘤的發(fā)生和惡性進(jìn)展顯著相關(guān)。宮頸鱗狀細(xì)胞癌源于宮頸上皮細(xì)胞，通過(guò)系列增殖性改變由CIN病變進(jìn)展所致。

本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了正常宮頸上皮組織、CIN組織和鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本中FOXM1的表達(dá)情況，并結(jié)合患者臨床病理學(xué)資料對(duì)FOXM1在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的臨床意義進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果顯示，正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中FOXM1的檢出率分別為5．88%、63．6%和92．1%。FOXM1在正常宮頸上皮組織中不表達(dá)或僅微弱表達(dá)，而在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸鱗狀細(xì)胞癌等組織中，其表達(dá)水平隨著細(xì)胞增殖程度的增加及細(xì)胞惡性程度的進(jìn)展而逐漸增強(qiáng)；FOXM1異常表達(dá)與宮頸癌惡性病變?cè)鲋承詷?biāo)記物Ki-67的表達(dá)水平高度相關(guān)。此外，F(xiàn)OXM1的表達(dá)水平與宮頸癌的病理分化程度、臨床分期和術(shù)后復(fù)發(fā)等病理學(xué)參數(shù)亦顯著相關(guān)。以上研究結(jié)果提示FOXM1在宮頸癌的發(fā)生和進(jìn)組按每一髖作為單元統(tǒng)計(jì)手術(shù)時(shí)間為展中起重要作用，可能成為一個(gè)與Ki-67類似的宮頸癌預(yù)后標(biāo)記物。FOXM1已被證實(shí)與各種腫瘤的多種臨床病理學(xué)參數(shù)顯著相關(guān)。Calvisi等［13］研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠和人肝癌形成過(guò)程中出現(xiàn)FOXM1過(guò)表達(dá)，且FOXM1表達(dá)水平與肝癌細(xì)胞的增殖指數(shù)呈正相關(guān)；在肺鱗狀細(xì)胞癌中，F(xiàn)OXM1過(guò)表達(dá)被證實(shí)與腫瘤細(xì)胞的分化程度和患者預(yù)后等均顯著相關(guān)［10］。Huang等［14］研究證實(shí)，胰腺癌中FOXM1過(guò)表達(dá)可促進(jìn)腫瘤發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵襲和轉(zhuǎn)移；在大腸癌中，F(xiàn)OXM1信號(hào)通路活化可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移［15］。本研究則進(jìn)一步證實(shí)FOXM1表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌病理學(xué)分化程度及臨床分期均顯著相關(guān)，F(xiàn)OXM1檢測(cè)有助于對(duì)宮頸癌患者預(yù)后進(jìn)行早期預(yù)測(cè)。

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