黃天衛(wèi)，楊 莉，韋美麗，孫玉琴，2，陳中堅(jiān)，王朝梁，2

（1.文山學(xué)院 文山三七研究院，云南 文山 663000；2. 文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000）

不同激素配比對(duì)誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織影響

黃天衛(wèi)1，楊 莉1，韋美麗1，孫玉琴1，2，陳中堅(jiān)1，王朝梁1，2

（1.文山學(xué)院 文山三七研究院，云南 文山 663000；2. 文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000）

文章研究分析了培養(yǎng)基中附加不同種類及濃度的生長素及細(xì)胞分裂素對(duì)誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織的影響。結(jié)果表明，激素對(duì)提高愈傷組織的誘導(dǎo)率有很大的促進(jìn)作用，2，4-D與6-BA及IAA配合使用對(duì)誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織效果較好。在MS基本培養(yǎng)基中附加2，4-D 1.0 mg/L、BA 1.0 mg/L、IAA 0.5 mg/L，三七花蕾愈傷組織的誘導(dǎo)率最高達(dá)到55.6%，愈傷組織長勢(shì)好。

三七花蕾；愈傷組織誘導(dǎo)；植物激素

三七Panax notoginseng （Burk.）F. H. Chen 是五加科人參屬多年生植物，是我國特有的名貴中藥材，主產(chǎn)于云南文山。［1］近年來由于三七在心腦血管方面的獨(dú)特療效越來越被人們所認(rèn)可，需求量逐年增加，但三七生長對(duì)生態(tài)環(huán)境有特殊要求，導(dǎo)致其適宜栽培區(qū)域很小。開展三七組織培養(yǎng)工作，可以不受時(shí)間地點(diǎn)的限制，在三七倍性育種方面，用秋水仙素處理愈傷組織是一條可以探索的途徑，開展這項(xiàng)工作的前提是誘導(dǎo)出優(yōu)良的愈傷組織。前人在三七的組織培養(yǎng)方面做了很多工作，鄭光植［2-4］的研究重點(diǎn)在植物次級(jí)代謝物細(xì)胞工程即三七的次級(jí)代謝物皂苷的工業(yè)化生產(chǎn)方面。筆者通過大量試驗(yàn)，掌握了誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織的最佳激素配比，對(duì)今后開展組織培養(yǎng)方法誘導(dǎo)三七多倍體植株奠定良好的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)材料來源于文山學(xué)院三七研究院硯山試驗(yàn)場(chǎng)采集的健康幼嫩的三七花蕾。

1.2 方法

先經(jīng)自來水充分洗凈，吸干表面水分，然后浸入70%乙醇溶液中1 min左右，再置于0.1%的升汞溶液中處理10 min。取出后用無菌蒸餾水沖洗4～5次，用無菌濾紙吸去表面水分，切成小塊進(jìn)行接種，每種處理10瓶，每瓶接種5塊。

1.3 激素配比

選擇適宜的外源植物激素是誘導(dǎo)愈傷組織的發(fā)生和生長的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)設(shè)置了14種培養(yǎng)基配方，從中篩選適宜三七花蕾培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方。

1.4 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

誘導(dǎo)三七花蕾的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30 g/L，瓊脂粉為7 g/L，pH值5.8，激素種類及濃度見表1。26 ℃條件下暗培養(yǎng)，每天觀察統(tǒng)計(jì)。

表1 不同激素配比實(shí)驗(yàn)

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素培養(yǎng)基誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織結(jié)果

三七花蕾接種到上述14種培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)，每種處理10瓶，結(jié)果見表2。三七花蕾接種15 d后開始出現(xiàn)膨大，之后花蕾逐漸變?yōu)辄S褐色，培養(yǎng)35 d左右后開始出現(xiàn)愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)，到50 d左右是愈傷組織的出愈高峰。愈傷組織多從花蕾的切口處長出，不同激素配比培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的愈傷組織的色澤有差異，附加不同濃度2，4-D和KT的MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)的愈傷組織形態(tài)相似，顏色較淺，淡黃色，多數(shù)質(zhì)地堅(jiān)實(shí)；附加2，4-D、6-BA和IAA的MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織顏色偏乳白色，新誘導(dǎo)出來的愈傷組織質(zhì)地較緊密，表面有小突起；單獨(dú)使用2，4-D 的MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)率低， 愈傷組織顏色偏淺黃色，部分透明，較松散，容易轉(zhuǎn)為褐色而失去活力。

表2 不同培養(yǎng)基配方對(duì)三七花蕾誘導(dǎo)影響

2.2 外源植物激素對(duì)誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織的影響

三七花蕾在上述1～13號(hào)培養(yǎng)基中均可以誘導(dǎo)出愈傷組織，激素對(duì)誘導(dǎo)三七愈傷組織影響很大，未添加任何激素的培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率為0，加入激素2，4-D后愈傷組織誘導(dǎo)率顯著提高，2，4-D 1.0 mg /L時(shí)誘導(dǎo)率最高。添加KT、6-BA等細(xì)胞分裂素，對(duì)提高愈傷組織的誘導(dǎo)率有一定的促進(jìn)作用，2，4-D與6-BA及IAA配合使用對(duì)誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織效果較好，在MS基本培養(yǎng)基中附加2，4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L +蔗糖30 g/L的條件下三七花蕾愈傷組織的誘導(dǎo)率相對(duì)較高，可以達(dá)到55.6 %，誘導(dǎo)出的愈傷組織見圖1。

圖1 9號(hào)培養(yǎng)基三七花蕾誘導(dǎo)出的愈傷組織

2.3 愈傷組織繼代培養(yǎng)的結(jié)果

三七花蕾愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基2，4-D 1.0 mg/L + 6-BA 1.0 mg/L +IAA 0.5 mg/L + 蔗糖30 g/L中經(jīng)過繼代培養(yǎng)35 d后均能使愈傷組織得到進(jìn)一步增殖，初次繼代培養(yǎng)后，愈傷組織狀態(tài)明顯變好，結(jié)構(gòu)變得致密，顏色為乳白色且更加鮮亮，表面更加干爽，隨著繼代培養(yǎng)次數(shù)的增多，繼代培養(yǎng)超過5次后，質(zhì)地開始變疏松，愈傷組織的活力下降。

3 討論

（1）三七組織培養(yǎng)所需要的外植體均為幼嫩器官，由于三七的植物特性，各種器官?zèng)]有多余的次生生長，所以幼嫩的根、莖、葉片、葉柄等都必須在三七出苗期獲得，此時(shí)三七器官的生物產(chǎn)量很小，取這些幼嫩的外植體必然導(dǎo)致三七植株的死亡，而以幼嫩花蕾作為外植體，對(duì)三七植株本身是安全的，這種無損傷的外植體來源，對(duì)一些稀少的、特殊的優(yōu)良種源極為重要，并且花蕾的生物產(chǎn)量比較高，可以滿足實(shí)驗(yàn)要求。通過試驗(yàn)表明，選擇7月份三七剛剛現(xiàn)蕾時(shí)的幼嫩花蕾，誘導(dǎo)效果較好，這與陳偉榮［5］試驗(yàn)結(jié)果一致。

（2）前人誘導(dǎo)三七愈傷組織所用激素多是2，4-D與KT配合使用［4-5］，筆者認(rèn)為，2，4-D、6-BA及IAA配合使用對(duì)誘導(dǎo)三七花蕾愈傷組織效果更好，誘導(dǎo)率高，且愈傷組織長勢(shì)好，繼代培養(yǎng)的次數(shù)多。

［1］中國科學(xué)院植物研究所. 中國高等植物圖鑒（Ⅱ）［M］.北京:科學(xué)出版社，1983：1024-1025.

［2］鄭光植，梁崢. 三七的組織培養(yǎng)［J］ . 植物學(xué)報(bào)，1978（4）：373-375.

［3］鄭光植，王世林，甘煩遠(yuǎn). 三七組織培養(yǎng)的建立［J］.生物工程學(xué)報(bào)，1989 （1）：64-69.

［4］鄭光植，王世林. 三七愈傷組織的培養(yǎng)［J］. 云南植物研究，1989 （3）：255-262.

［5］陳偉榮，簡(jiǎn)玉瑜. 三七試管苗繁殖技術(shù)的研究［J］. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992 （3）：69-75.

Effect on Callus Induction of Flowers by Different Hormone Matching in P. Notoginseng

HUANG Tian-wei1, YANG Li1, WEI Mei-li1, SUN Yu-qin1，2, CHEN Zhong-jian1, WANG Chao-liang1，2
(1. Notoginseng Institute, Wenshan University , Wenshan, Yunnan, China 663000；2.Wenshan Huaxin Notoginseng Co., Ltd, Wenshan, Yunnan, China 663000)

Studying on callus inductivity of flowers with add different matching of auxin and cytokinins to MS medium. Match usage of 2,4-D , BA and IAA could increase callus inductivity. The callus inducting from flowers was good growth and there was high inducing rate in MS medium with 1.0mg/L 2,4-D, 1.0 mg/L BA and 0.5mg/L IAA.

Flowers of P. notoginseng; callus induction; hormone matching

S567.236

A

1674-9200（2014）03-0005-03

（責(zé)任編輯 張 鐵）

2014-03-12

云南省社會(huì)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目“三七多倍體誘導(dǎo)及鑒定技術(shù)研究”（2009CD144）。

黃天衛(wèi)（1972-），男，云南文山人，文山學(xué)院文山三七研究院助理研究員，主要從事三七栽培研究。