王 勇，陳昱君，楊建忠，劉云芝，張文斌， 向飛軍

（1.文山學(xué)院 文山三七研究院，云南 文山 663000；2.云南省三七農(nóng)業(yè)工程實驗室， 云南 文山 663000；3.文山苗鄉(xiāng)三七實業(yè)有限公司， 云南 文山 663000；4.文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000；5. 康美藥業(yè)股份有限公司，廣東 普寧 515300）

幾種生物農(nóng)藥對三七黑斑病防效及與三七質(zhì)量關(guān)系研究

王 勇1，2，3，陳昱君1，4，楊建忠1，2，3，劉云芝1，4，張文斌1，2， 向飛軍5

（1.文山學(xué)院 文山三七研究院，云南 文山 663000；2.云南省三七農(nóng)業(yè)工程實驗室， 云南 文山 663000；3.文山苗鄉(xiāng)三七實業(yè)有限公司， 云南 文山 663000；4.文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000；5. 康美藥業(yè)股份有限公司，廣東 普寧 515300）

采用田間接種病原后藥劑噴施的方法，開展了7種生物源農(nóng)藥的田間防效試驗，并采用傳統(tǒng)紫外分光光度法對參試處理樣品的三七總皂苷含量進行了測定。結(jié)果顯示：以3%多抗霉素可濕性粉劑和8%寧南霉素水劑的田間防治效果較好，相對防治效果分別達到74.18%和60.6%。各處理間三七樣品的總皂苷含量與對照比較，除阿利寧和抗霉菌素處理略比對照低外，其余參試藥劑處理均略比對照高。結(jié)合田間防治效果比較和三七皂苷含量比較結(jié)果，認為3%多抗霉素可濕性粉劑和8%寧南霉素水劑可應(yīng)用于三七種植安全生產(chǎn)。

生物農(nóng)藥；控制；三七黑斑??；試驗研究

利用生物農(nóng)藥防治植物病害已有廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)，如王輝［1］報道用2%春雷霉80 mL/667 m2防治水稻葉瘟防效達70.6%、穗頸瘟防效75.2%；魏靖等［2］應(yīng)用1.5%多抗霉素水劑防治黑痘病、穗軸褐枯病、灰霉病，均取得較好的控制效果，且對作物安全，但利用生物農(nóng)藥防治三七病害少有報道［3］。三七黑斑病是三七種植區(qū)的一種主要病害，常年發(fā)病率5%～20%，嚴重時高達60%以上［4-5］，生產(chǎn)上通常采用化學(xué)藥劑進行防治［6-7］?；瘜W(xué)農(nóng)藥的經(jīng)常使用易導(dǎo)致病原產(chǎn)生抗藥性［8］，同時也對環(huán)境造成污染，影響產(chǎn)品質(zhì)量［9］。試驗通過生物農(nóng)藥對三七黑斑病的防治研究，篩選出安全有效的生物農(nóng)藥供生產(chǎn)應(yīng)用，以減少化學(xué)藥劑的使用。

1 材料和方法

1.1 田間藥劑篩選試驗

1.1.1 供試藥劑

選擇在蔬菜、糧食作物上已得到推廣使用的生物殺菌劑，即：A. 3%多抗霉素可濕性粉劑（延邊春雷生物藥業(yè)有限公司）500倍液；B. 8%寧南霉素水劑（黑龍江強爾生化開發(fā)有限公司）800倍液；C. 4%春雷霉素可濕性粉劑（延邊春雷生物藥業(yè)有限公司）1000倍液；D. 4%農(nóng)抗120水劑（綠盾生物制品有限責(zé)任公司）1200倍液；E. 阿利寧可濕性粉劑（黑龍江強爾生化開發(fā)有限公司）500倍液；F. 60000單位抗霉菌素水劑（陜西綠盾生物制品有限責(zé)任公司）2000倍液；G. 0.3%灰霜特水劑（河北保定亞達化工有限公司）1200倍液；設(shè)噴清水為對照。藥劑濃度均為廠商推薦使用量。

1.1.2 試驗地點

試驗點設(shè)于硯山縣郊址村民委本院實驗場七園內(nèi)，海拔1530 m，土壤為紅壤土，蔭棚材料為傳統(tǒng)杉樹葉，蔭棚透光率為17.5%。試驗用三七為生長均勻一致、無感病癥狀的三年生三七。試驗采取隨機區(qū)組設(shè)計，每處理重復(fù)4次，共計28個小區(qū)，小區(qū)面積3.24 m2。

1.1.3 試驗方法

1.1.3.1 菌液制備

采集田間自然發(fā)病的三七黑斑病病葉，放入研缽搗細后用無菌水稀釋，經(jīng)單層沙布過濾，即得人參鏈格孢（Alternaria panax Whetz.） 分生孢子懸浮液，經(jīng)鏡檢，孢子懸浮液濃度為4.16×104個/mL。

1.1.3.2 接種及防治

試驗采用田間噴霧接種法。即用當(dāng)天配制的人參鏈格孢分生孢子懸浮液對植株葉面進行均勻噴霧接種，每小區(qū)接種孢子懸浮液250 mL。接種后48 h進行第一次噴藥防治，以后每隔7 d噴施一次，共噴施3次。

1.1.4 田間調(diào)查及記錄

施藥前調(diào)查一次三七黑斑病病情，施藥后于15 d、30 d和45 d分別調(diào)查各處理的發(fā)病株數(shù)及病級，計算病情指數(shù)、相對防治效果。三七黑斑病病害分級見表1。

表1 三七黑斑病病情分級表

1.2 三七總皂苷檢測

1.2.1 預(yù)處理

將經(jīng)過生物農(nóng)藥防治黑斑病后的三七塊根用清水洗凈，自然晾干后用小型中藥材粉碎機打成粉狀備用。

1.2.2 三七總皂苷的提取

稱取2.0 g的上述各處理三七粉，置于磨口錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50 mL甲醇后超聲震蕩30 min，冷卻靜置12 h。用小燒杯取上清液10 mL于60 ℃水浴中揮干，再用10 mL蒸餾水溶解已提取的粗總皂苷進行柱層析。以D101大孔吸附樹脂柱進行層析分離，用上述處理好的溶解液上柱，再用三分之二的蒸餾水沖洗除去糖分等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液再用20 mL 70%的乙醇洗脫總皂苷，用小燒杯收集洗脫液于60 ℃水浴上揮干，即為總皂苷待測物。

1.2.3 測定方法

稱取標(biāo)準(zhǔn)品人參二醇Rg1（中國藥品生物制品檢定所提供）3.1 mg，用甲醇定容10 mL，取該液10、20、40、60、80、100、120 μL置于20 mL的比色管中60 ℃干燥箱中烘干溶劑，取出加新配置的5%香草醛冰乙酸0.2 mL，高氯酸0.8 mL，置于60℃水浴上加熱15 min顯色后，立即取出用流水冷卻，加5 mL冰乙酸，搖勻。于紫外光光度計560 nm處測定吸光度，以吸光度對標(biāo)準(zhǔn)人參二醇的加入量作回歸處理，測得方程為：y=0.61104x+0.09336，r值為0.99856。用10 mL的甲醇溶解總皂苷，取該液30 μL同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法進行檢測。

2 試驗結(jié)果

2.1 幾種生物農(nóng)藥田間試驗情況比較

2.1.1 存苗數(shù)差異性比較

由表2可看出，各參試處理小區(qū)平均存苗率均高于對照，說明生物農(nóng)藥在一定程度上可增強植株抗逆性和抗病性，提高三七存活力。其中3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液處理的存苗數(shù)達114棵，居第一位，與對照相比，達極顯著水平。說明3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液處理保苗效果優(yōu)于其它處理。

表2 幾種生物農(nóng)藥存苗數(shù)比較

2.1.2 幾種生物農(nóng)藥防效比較

由表3看出，3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液防治效果居第一位，為74.18%；其次是8%寧南霉素水劑800倍液處理，防效為60.60%。阿利寧500倍液防效為58.01%，居第三位。其余處理對三七黑斑病均有一定的防治效果，但防效不高。

表3 幾種生物農(nóng)藥田間防治效果

2.1.3 幾種生物農(nóng)藥產(chǎn)量比較

如表4所示，參試各處理小區(qū)產(chǎn)量均高于對照，其中3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液、8%寧南霉素水劑800倍液、4%春雷霉素可濕性粉劑1000倍液與0.3%霜特水劑1200倍液及對照相比，達極顯著水平。小區(qū)產(chǎn)量以3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液處理最高，平均單產(chǎn)達339.52 kg；其次是8%寧南霉素水劑800倍液處理，平均單產(chǎn)為329.23 kg；4%春雷霉素可濕性粉劑1000倍液處理位居第三，平均單產(chǎn)為325.12 kg。其余處理產(chǎn)量也比不施藥對照高40 kg以上，顯示了一定的控病保產(chǎn)效果。

表4 幾種生物農(nóng)藥小區(qū)產(chǎn)量比較

2.2 幾種生物農(nóng)藥處理三七總皂苷含量

由表5看出幾種生物農(nóng)藥處理后，三七總皂苷含量以8%寧南霉素800倍液處理的三七最高，平均達7.16%，其次是3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液處理，平均7.10%；4%春雷霉素可濕性粉劑1000倍液處理居第三位，為7.08%；其余處理與對照相同或略低于對照。研究結(jié)果表明寧南霉素、多抗霉素對提高三七質(zhì)量具有比較明顯的促進作用。

表5 幾種生物農(nóng)藥施用后三七總皂苷含量比較

3 結(jié)果討論

（1）生物農(nóng)藥具有選擇性強、對人畜安全、不污染自然生態(tài)環(huán)境等優(yōu)點，在三七病蟲害防治上有必要作為一個重要的應(yīng)用途徑進行探索和研究。

（2）通過對現(xiàn)有商品化生物農(nóng)藥的田間試驗研究表明，多數(shù)生物農(nóng)藥可增強植株抗逆性，提高三七存活力；使用后對三七質(zhì)量無不良影響，其中寧南霉素、多抗霉素對提高三七質(zhì)量還具有一定的促進作用。3.3%多抗霉素可濕性粉劑500倍液處理后的三七具有較好的保苗、增產(chǎn)效果，建議生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，以減少化學(xué)藥劑的使用。

［1］王輝.水稻稻瘟病化學(xué)防治藥劑對比試驗［J］.中國農(nóng)村小康科技，2008 （11）：49-50.

［2］魏靖，張建華，惠祥海.多抗霉素防治葡萄常見病害藥效試驗［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2010 （2）：183-184.

［3］陳昱君，王勇，劉蕓芝，朱有勇，劉云龍.生物菌劑控制三七根腐病的初步研究［J］.中國中藥雜志，2004（11）：1102-1103.

［4］陳昱君，王勇.三七病蟲害防治［M］.昆明：云南科技出版社，2006：40-48.

［5］王淑琴，于洪軍，官廷荊.中國三七［M］.昆明：云南民族出版社，1993：428-472.

［6］王淑琴，于洪軍，陳先華.三七黑斑病的綜合防治研究［J］.植物病理學(xué)報，1981 （22）：47-54.

［7］馮光泉，李忠義，王勇.腐霉利、菌絕王對三七黑斑病的防治效果［J］.人參研究，2000 （1）：46-48.

［8］袁明山.淺談馬玲薯晚疫病化學(xué)藥劑防治的抗藥性［J］.馬玲薯雜志，1999 （4）：249-250.

［9］劉勤生.化學(xué)農(nóng)藥的使用對農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和環(huán)境污染的影響及防范對策［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（12）：153.

Control Effects of Several Biological Pesticides on Black Spot Disease and Its Relationship with Quality of Notoginseng

WANG Yong1,2,3, CHEN Yu-jun1,2,4, YANG Jian-zhong1,2,3, LIU Yun-zhi1,2,4, ZHANG Wen-bin1,2, XIANG Fei-jun5
(1. Research Institute of Notoginseng, Wenshan University, Wenshan 663000, China; 2. Notoginseng Agricultural Engineering Laboratory, Wenshan, 663000, China; 3. Notoginseng Industrial Co., Ltd of Miaoxiang, Wenshan 663000, China; 4. Huaxin Notoginseng Co., Ltd, Wenshan 663000, China; 5. Kangmei Pharmaceutical Co., Ltd. Puning 515300, China)

PNS content of tested samples is determined through seven kinds of biological pesticides field efficacy trials adopting spraying agent after a field inoculation of pathogen and traditional ultraviolet spectrophotometry. The results show that field control effect with 3% polymyxin WP and 8% aqueous Ningnanmycin is better and their relative control effect reached 74.18% and 60.6%. Compared with the control sample, PNS content under anti-fungal and Alining treatment is slightly lower than that of the control treatment and PNS content of other participants is slightly higher than the control. 3% polymyxin and 8% WP Ningnanmycin agent can be used in notoginseng planting safely in production referring to comparison result of field control effect and PNS content.

Biological pesticides; control; Sanqi ( notoginseng); black spot disease; research

S567.236

A

1674-9200（2014）03-0001-04

（責(zé)任編輯 張 鐵）

2014-06-09

國家科技支撐計劃項目“三七黑斑病防治技術(shù)研究”（2006BAI09B04-03）。

王 勇（1974-），男，云南硯山人，文山學(xué)院文山三七研究院副研究員，碩士，主要從事中藥材栽培和病蟲害研究。

陳昱君（1960-），女，河南濟源人，文山學(xué)院文山三七研究院研究員，主要從事植物保護研究，E-mail：yncyj@vip.sina.com。