黃冬維，陳 勝，趙小偉，程廣龍，楊永新，王小飛，趙輝玲

（安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，合肥 230031）

繁殖與生理

不同采毛方式對長毛兔血清蛋白及含氮代謝物水平的影響

黃冬維，陳 勝，趙小偉，程廣龍，楊永新，王小飛，趙輝玲

（安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，合肥 230031）

文章分析了3種方式（剪毛、直接拔毛和藥物拔毛）對皖系長毛兔采毛前、采毛后0、4、8、24、48 h血清蛋白及含氮代謝物變化規(guī)律的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：3種采毛方式均顯著上調(diào)血清總蛋白和肌酐水平，而血清白蛋白僅受藥物拔毛影響而顯著上調(diào)；藥物拔毛顯著上調(diào)血清總膽紅素和直接膽紅素水平，同時直接膽紅素還受其他兩種采毛方式影響而顯著下調(diào)；兩種拔毛方式（直接拔毛和藥物拔毛）顯著上調(diào)血清尿素和尿酸水平，但剪毛對這兩個指標(biāo)沒有影響。長毛兔在采毛后48 h內(nèi)，多數(shù)血清指標(biāo)可恢復(fù)到采毛前水平，或呈恢復(fù)趨勢；該研究篩選獲得采毛應(yīng)激指標(biāo)血清總蛋白和肌酐，拔毛應(yīng)激指標(biāo)尿素和尿酸，同時發(fā)現(xiàn)肌酐、白蛋白和膽紅素受地塞米松的顯著影響。該研究結(jié)果可為初步揭示不同采毛方式應(yīng)激生化機制提供參考。

采毛方式；長毛兔；血清生化指標(biāo)；應(yīng)激

我國長毛兔養(yǎng)殖業(yè)居于世界首位，長毛兔常年存欄4 000萬只左右，年均產(chǎn)兔毛9 000～9 500 t，長毛兔養(yǎng)殖數(shù)量和兔毛產(chǎn)品貿(mào)易均占世界總量90%以上［1］。長毛兔養(yǎng)殖業(yè)“投資少、周轉(zhuǎn)快、效益高”，而且節(jié)糧環(huán)保，出口創(chuàng)匯能力強，是我國畜牧業(yè)的重要組成部分和農(nóng)村新的經(jīng)濟增長點［2］。采毛是兔毛生產(chǎn)中的重要技術(shù)環(huán)節(jié)，目前主要采用剪毛和藥物脫毛等方式［3］。兔毛采集因為涉及到保定兔體和接觸皮膚，可能對兔體造成應(yīng)激，甚至傷害，一定程度上影響長毛兔正常生產(chǎn)［4］。因而，研究采毛方式應(yīng)激機制對減少采毛應(yīng)激和損失，提高動物福利和生產(chǎn)效益有重要意義。另外，2013年下半年，“活拔兔”視頻網(wǎng)絡(luò)瘋傳的事件，對我國兔毛出口產(chǎn)生很大沖擊，兔毛產(chǎn)品出口訂單大幅減少，采毛方式及其影響的相關(guān)研究迫在眉睫［5］。血液生化指標(biāo)可有效反映動物的健康水平。本研究將通過設(shè)計不同采毛方式進(jìn)行采毛，然后對采毛前、后不同時間點長毛兔血清蛋白、含氮代謝物水平變化規(guī)律及不同采毛方式間差異進(jìn)行了研究，旨在分析采毛方式對機體蛋白代謝的影響，篩選獲得不同采毛方式應(yīng)激的生化指標(biāo)，進(jìn)一步完善前期研究［6］，從而為初步揭示采毛應(yīng)激生化機制打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與樣品采集

在安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所實驗兔場選用年齡相似、體重相近、健康的皖系長毛兔成年母兔30只，隨機分為3個處理組，每組10只；預(yù)飼1周，養(yǎng)毛期結(jié)束后3個處理組分別采用剪毛（A組）、直接拔毛（B組）和藥物拔毛（C組）3種不同方式進(jìn)行采毛；A組兔毛全部剪光，B和C組采用分期拔毛方式（留背毛、頭毛、腿毛）采毛，C組拔毛前12 h口服地塞米松0.75 mg。3組試驗兔飼養(yǎng)管理條件和飼料營養(yǎng)水平均相同，每只試驗兔均單籠飼養(yǎng)，定時定量采食，自由飲水。

在試驗兔采毛前、采毛后0、4、8、24、48 h分別用不含抗凝劑的真空采血管進(jìn)行耳緣靜脈采血，每次每只兔采血約5 mL，血液4℃冷藏過夜后2 500 r/min離心10 min，并小心吸取上層血清分裝到1.5 mL滅菌離心管，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

1.2.1 生化指標(biāo)測定 選用的7個血液生化指標(biāo)及其測定方法分別如下：總蛋白（TP）采用雙縮脲法，白蛋白（ALB）采用溴甲酚綠法，肌酐（Crea）采用苦味酸法，總膽紅素（TBILI）和直接膽紅素（DBILI）采用釩酸鹽法，尿酸（UA）采用尿酸酶-過氧化物酶偶聯(lián)法，尿素（urea）采用酶學(xué)速率法。指標(biāo)測定使用D240型全自動生化分析儀（神州英諾華，南京），具體操作方法按神州英諾華配套試劑盒說明進(jìn)行，測定前使用level 2質(zhì)控血清（RANDOX，UK）對儀器和指標(biāo)分別進(jìn)行質(zhì)控和定標(biāo)，每份樣品均重復(fù)測定3次。

1.2.2 統(tǒng)計方法 用EXCEL2010對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理，然后用SAS9.1對整理后數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，多重比較采用Duncan法，統(tǒng)計結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05作為差異顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清總蛋白和白蛋白變化

血清蛋白變化如表1，對于TP，剪毛組采毛后8 h顯著高于采毛前（P＜0.05），24 h恢復(fù)到采毛前水平，而48 h又顯著上升，高于采毛前（P＜0.05）；直接拔毛組僅采毛后急速上升，而采毛后4 h即恢復(fù)到采毛前水平；藥物拔毛組采毛后TP即慢慢上升，8 h達(dá)峰值，而后下降，但直到48 h，其TP值還顯著高于采毛前（P＜0.05）。采毛前3組間無差異（P＞0.05），采毛后4 h剪毛組和藥物拔毛組顯著高于直接拔毛組（P＜0.05），采毛后24 h藥物拔毛組顯著高于直接拔毛組（P＜0.05），而剪毛組48 h又顯著高于直接拔毛組（P＜0.05），其他時期各組無差異（P＞0.05）。

對于ALB，剪毛組在采毛前后無變化；直接拔毛組雖然采毛后ALB有升有降，但與采毛前均無顯著變化（P＞0.05）；藥物拔毛組在采毛后8～48 h ALB相對采毛前顯著升高（P＜0.05）。采毛前和采毛后0 h 3組ALB濃度無差異（P＞0.05）；而采毛后4～48 h，直接拔毛組ALB均低于喂藥拔毛組和剪毛組（其中8、24 h與剪毛組差異不顯著（P＞0.05），其他均差異顯著（P＜0.05）），剪毛組和藥物拔毛組各時期均無差異（P＞0.05）。

表1 不同采毛方式對血清蛋白的影響g/L

2.2 血清非蛋白含氮代謝物變化

血清非蛋白氮代謝物變化結(jié)果見表2。

對于Crea，剪毛組采毛后顯著上升，4 h恢復(fù)采毛前水平，但8 h又上升，而后下降到顯著低于采毛前水平（P＜0.05）；直接拔毛組采毛后急劇上升，而后下降，24 h后恢復(fù)到采毛前水平；藥物拔毛組采毛后Crea即顯著上升，但4 h則恢復(fù)到采毛前水平。采毛前，喂藥拔毛組顯著低于剪毛組（P＜0.05）和直接拔毛組（P＜0.05），采毛后也均低于后兩組，但24h后3組間差異均不顯著（P＞0.05）。

對于TBILI，采毛前、后剪毛和直接拔毛組都無變化，且兩組間無顯著差異（P＞0.05）；采毛前，藥物拔毛組TBILI與其他兩組無差異（P＞0.05），但采毛后即顯著上升，8 h達(dá)峰值，而后下降，到48 h仍顯著高于采毛前（P＜0.05），且采毛后 0～48 h都顯著高于其他兩組（P＜0.05）。

對于DBILI，剪毛組采毛后即顯著降低，直到48 h才恢復(fù)采毛前水平；直接拔毛組采毛后先降低后升高，8 h時顯著低于采毛前水平（P＜0.05），其他時刻與采毛前無顯著差異（P＞0.05）；藥物拔毛組則相反，采毛后先上升后下降，8 h和24 h顯著高于采毛前（P＜0.05），48 h時恢復(fù)到采毛前水平。3組間采毛前DBILI水平無顯著差異（P＞0.05），而采毛后0～24 h藥物拔毛組均顯著高于其他兩組（P＜0.05），48 h時3組均恢復(fù)采毛前水平且組間無差異（P＞0.05）。

對于UA，剪毛組采毛前、后無明顯變化；直接拔毛組拔毛后則顯著升高達(dá)峰值，而后下降，24 h恢復(fù)到采毛前水平；藥物拔毛組采毛后即顯著上升，8 h達(dá)峰值，后下降，48 h恢復(fù)采毛前水平。3組采毛前無差異（P＞0.05），采毛后0～4 h拔毛兩組均顯著高于剪毛組（P＜0.05），但48 h 3組無明顯差異（P＞0.05）。

對于urea，剪毛組采毛前后無明顯變化；直接拔毛組和藥物拔毛組采毛前、后urea水平變化趨勢相似，采毛后均上升，4 h即達(dá)峰值，而后下降，并分別在24 h和48 h恢復(fù)到采毛前水平，其中藥物拔毛組變化幅度稍大。采毛前3組urea水平無差異（P＞0.05），采毛后4～8 h拔毛兩組均顯著高于剪毛組（P＜0.05），4 h藥物拔毛組又顯著高于直接拔毛組（P＜0.05），其他時期3組間無差異（P＞0.05）。

表2 不同采毛方式對血清非蛋白氮代謝物的影響 μmol/L

3 討論

3.1 采毛應(yīng)激對血清蛋白的影響

血清總蛋白包括血清白蛋白和球蛋白。血清白蛋白由肝臟實質(zhì)細(xì)胞合成分泌，它具有維持血漿膠體滲透壓、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)運輸和提供蛋白質(zhì)來源等廣泛生理功能；血清總蛋白和白蛋白水平變化反映了機體肝臟功能狀況和機體免疫狀態(tài)。巨向紅等［7］發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激對巴馬香豬總蛋白、白蛋白沒有顯著影響。汪海波［8］研究復(fù)合慢性應(yīng)激對家兔生化指標(biāo)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)總蛋白、球蛋白和白蛋白均無明顯變化。趙宗勝等［9］研究發(fā)現(xiàn)，荷斯坦奶牛血液蛋白水平雖有低溫耐受性，卻因熱應(yīng)激影響而顯著上升。國外研究發(fā)現(xiàn)，剪毛應(yīng)激可能造成卡拉庫爾母羊血清總蛋白水平升高［10］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3種采毛方式均刺激總蛋白的顯著上調(diào)，也可以引起白蛋白水平上升，其中藥物拔毛組在采毛后8～48 h顯著高于采毛前，這與運輸應(yīng)激對仔豬和夏南牛血清蛋白影響結(jié)果相似［11-12］。其原因可能是長毛兔到采毛期末需要生理性的脫毛，人工采毛有助長毛兔換毛并刺激了血清蛋白水平上升，有利兔體康復(fù)并為進(jìn)入下一次兔毛生長做準(zhǔn)備［13］。綿羊妊娠后期營養(yǎng)限飼影響胎兒發(fā)育因而補償提高了胎兒總蛋白水平（P＞0.05）［14］。李振［15］研究表明，復(fù)合中藥方可改善獺兔熱應(yīng)激條件下采食量、生長速度，增加皮張面積和被毛密度，同時提高了總蛋白、白蛋白免疫球蛋白和甲狀腺素水平?？梢娧蹇偟鞍缀桶椎鞍姿降纳仙殡S著家兔生產(chǎn)性狀良好表現(xiàn)，因而有益毛發(fā)再生。

3.2 采毛應(yīng)激對非蛋白氮代謝物的影響

血清肌酐反映了腎臟腎小球的濾過能力，當(dāng)腎臟損傷厲害時，血清肌酐明顯上升。本研究發(fā)現(xiàn)，長毛兔采毛后，肌酐急性上升，但均較快恢復(fù)，可能采毛應(yīng)激只是對長毛兔腎臟等產(chǎn)生急性可恢復(fù)性影響；然而藥物拔毛組采毛前肌酐水平即低于其他兩組，可能受到地塞米松抑制作用。早期已有研究發(fā)現(xiàn)，地塞米松可抑制下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)活動8～14 h，但不超過24 h［16］。總膽紅素包括直接膽紅素和間接膽紅素，主要為紅細(xì)胞血紅蛋白代謝產(chǎn)物，血清中三者水平變化反映了動物肝臟和膽道的病變狀況和黃疸類型。白衛(wèi)兵等［17］利用地塞米松模擬對日本大白兔應(yīng)激，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高劑量地塞米松可導(dǎo)致TBILI上升，應(yīng)用14 d和21 d其含量明顯升高，也顯著高于對照組，同時其肝重量和肝重比大幅提高。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于TBILI，只有藥物拔毛組在采毛后明顯上升，采毛后48 h也沒有恢復(fù)，而且采毛應(yīng)激后顯著高于其他兩組；對于DBILI，藥物拔毛組先上升后下降，而且在采毛后24 h內(nèi)均顯著高于其他兩組，其他兩組均先下降后升高，表明拔毛和剪毛主要對直接膽紅素產(chǎn)生影響，而且地塞米松對總膽紅素和直接膽紅素均有影響，并且可能與拔毛應(yīng)激有聯(lián)合效應(yīng)。根據(jù)前期兔場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，如果地塞米松的應(yīng)用時間較長或量較大時，家兔常出現(xiàn)腹瀉、抗病力下降現(xiàn)象，因而在長毛兔生產(chǎn)中應(yīng)慎重使用，或應(yīng)用其他脫毛劑［3，18］。尿素是動物體內(nèi)蛋白氮代謝主要終產(chǎn)物，尿酸是嘌呤、核酸及核蛋白代謝產(chǎn)物，兩者是體內(nèi)蛋白代謝較為準(zhǔn)確的反映指標(biāo)。Amici等［19］研究發(fā)現(xiàn)，短時熱應(yīng)激使得新西蘭白兔血漿尿素水平0.5 h內(nèi)上升，而30 h后又顯著下降。與之相似，本研究拔毛應(yīng)激可導(dǎo)致尿素水平急性上升而后下降恢復(fù)到采毛前水平，而剪毛對尿素水平影響不大。谷子林［20］研究發(fā)現(xiàn)，多種飼料因素可導(dǎo)致腸道應(yīng)激而發(fā)生腹瀉，其血液尿素氮等顯著升高，飼喂低纖維日糧（7%～9%）的試驗兔尿素氮的水平略高于高纖維日糧（12%～14%）的試驗兔，可能是腹瀉應(yīng)激引起蛋白質(zhì)分解的增加。但巨向紅等［7］研究發(fā)現(xiàn)，巴馬香豬熱應(yīng)激時血尿素氮（BUN）呈下降趨勢（P＞0.05），可能不同應(yīng)激或物種存在差異。而本研究采毛應(yīng)激類似于外傷應(yīng)激加束縛應(yīng)激，與環(huán)境溫度應(yīng)激機制可能相異［21-22］。本研究還發(fā)現(xiàn)，拔毛可顯著增加采毛當(dāng)天血清尿酸水平，而不受剪毛影響。目前，應(yīng)激對哺乳動物血清尿酸水平影響研究少見，可能是因為它主要為鳥類代謝物，難受關(guān)注。王玉愛［23］研究發(fā)現(xiàn)，骨折外傷應(yīng)激可導(dǎo)致人體血液尿酸水平顯著下降，與本研究結(jié)果相反，其原因可能為腎臟重吸收功能障礙，有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究分析了不同采毛方式對長毛兔血清蛋白和含氮代謝物的影響，篩選獲得采毛應(yīng)激指標(biāo)血清總蛋白和肌酐，拔毛應(yīng)激指標(biāo)尿素和尿酸，地塞米松影響指標(biāo)肌酐、白蛋白、總膽紅素和直接膽紅素。本研究可為闡明動物采毛方式應(yīng)激機制奠定基礎(chǔ)，為減少和提前預(yù)防采毛方式應(yīng)激提供參考。當(dāng)然，本文結(jié)果只是初步的，需要其他研究相互佐證，再者研究還可以進(jìn)一步拓展，第一，雖然本研究中大部分指標(biāo)在48 h內(nèi)恢復(fù)了正常水平，但試驗時間也可以更長一點，以便觀察采毛應(yīng)激影響持續(xù)時間，不過需注意減少采血密度和強度本身對血液指標(biāo)的影響。第二，針對公兔或公母兔同時進(jìn)行研究。因為性別對生化指標(biāo)影響有不同的研究結(jié)果［24-25］。第三，對膽紅素研究可以進(jìn)一步驗證。本研究結(jié)果表明，采毛前總膽紅素與直接膽紅素數(shù)量關(guān)系存在一定出入，可能與動物健康狀態(tài)下膽紅素較難檢測有關(guān)，有待進(jìn)一步證實，結(jié)果僅供參考。第四，地塞米松對長毛兔機體健康存在一定影響，生產(chǎn)中應(yīng)謹(jǐn)慎使用，并希望通過科研人員努力研制出更為安全綠色的助脫毛產(chǎn)品，以減少采毛應(yīng)激，提高動物福利，保持兔體健康。

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Effects of Different Wool Harvest Ways on Serum Protein and Some Metabolites in Angora Rabbits

HuangDongwei，ChengSheng，ZhaoHuiling，et al
（Institute ofAnimal Husbandryand VeterinaryMedicine，Anhui AcademyofAgricultural Sciences，Hefei 230031，China）

In the present study,the changes of7 serumbiochemical indicators（TP，ALB，Crea，TBILI，DBILI，UAand urea）before and after（at 0，4，8，24 and 48 hours）wool harvest by3 ways（shearing，direct pullingand pullingwith medicine）in Wan Strain Angora Rabbits were analyzed.The results showed that the content ofserum TP and Crea increased significantlyin all ofthe three harvest ways，while the ALB was just promoted in the way of pulling with medicine.Pulling with medicine promoted serum TBILI and DBILI level,while the latter was down-regulated in the other two ways.Serum UA and urea increased obviously under the condition of wool pullings except shearing.Most of biochemical indicators could return to or approach their normal levels in 48 hours after wool harvest.Consequently，serumTP and Crea can be used as indicators for wool harvest stress，while urea and UAfor wool pulling stress，and serum urea，ALB and bilirubin could be affected by dexamethasone significantly.The results could be used as a reference for revealingthe mechanismofwool harvest stress on serumbiochemical indicators.

wool harvest way；Angora rabbit；blood biochemical indicator；stress

S829.1

A

2095-3887（2014）06-0015-05

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.06.004

2014-09-26

國家兔產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-44-A-3）；安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長青年創(chuàng)新基金面上項目（14B0426）；安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高層次人才培養(yǎng)及引進(jìn)項目

黃冬維（1981-），男，助理研究員，博士。

趙輝玲（1965-），女，研究員，主要從事草食動物育種與生產(chǎn)研究。