秦 雪，岳文斌，鄭亞琳，張彩霞，任有蛇，張春香

（山西農業(yè)大學動物科技學院，太谷 030801）

繁殖與生理

母羔自身因素與其超排卵母細胞數(shù)量的相關性分析

秦 雪，岳文斌，鄭亞琳，張彩霞，任有蛇，張春香

（山西農業(yè)大學動物科技學院，太谷 030801）

為討論羔羊自身因素與其超排后卵母細胞數(shù)量的關系，選取6～8周齡的健康杜晉綿羊（杜泊羊×晉中綿羊♀）母羔31只，進行超數(shù)排卵，手術法收集卵母細胞，統(tǒng)計其卵母細胞數(shù)量，分析其與全同胞羔羊數(shù)、初生重、超排時體重的相關性。結果表明：全同胞羔羊數(shù)與卵母細胞數(shù)量呈極顯著負相關（P<0.01），初生重與卵母細胞數(shù)量呈極顯著正相關（P<0.01）；超排時體重與卵母細胞數(shù)量相關不顯著（P>0.05）。全同胞羔羊數(shù)和初生重是羔羊超排卵母細胞數(shù)量的影響因素，但仍需進一步增加羔羊數(shù)量來驗證。

全同胞羔羊數(shù)；初生重；超排時體重；超數(shù)排卵；羔羊

幼畜超數(shù)排卵的研究起始于20世紀50年代［1］。20世紀90年代以后，人們對幼畜卵泡發(fā)育進行了更為深入的研究。羔羊卵母細胞作為體外胚胎生產的試驗材料，也越來越多地得到國內外的廣泛關注。利用羔羊超數(shù)排卵的卵子進行體外授精，大大擴展了體外授精所需卵子的來源；同時與胚胎移植相結合［2］，可以大大縮短世代間隔，產生大量優(yōu)秀后代，加速育種進程，大大縮短育種時間。Galli等［3］研究發(fā)現(xiàn)，將活體采卵技術與超數(shù)排卵相結合，可獲得更多高發(fā)育能力的胚胎，從而產生優(yōu)秀的后代。Ptak等［4］研究表明，1月齡羔羊超排效果最好，3月齡最差。Morton等［5］研究表明，6～7周齡羔羊比3～4周齡卵母細胞體外受精后的囊胚率高。但是目前應用羔羊卵母細胞進行胚胎生產的效率還很低，仍然需要進一步研究。同時，羔羊卵泡發(fā)育效果受許多因素的影響，如羔羊（母性遺傳、營養(yǎng)水平、年齡）、激素處理方法、采卵方法等。但是關于羔羊自身因素（如全同胞羔羊數(shù)、初生重、超排時體重等）與超排卵母細胞數(shù)量的相關性，目前還沒有系統(tǒng)的研究。因此，本試驗選擇6～8周齡的綿羊母羔進行超數(shù)排卵，統(tǒng)計其超排后卵母細胞數(shù)量，并與其自身因素進行相關性分析，為提高綿羊體外胚胎生產效率提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 母羔

母羔選自山西農業(yè)大學牧站實驗基地，品種為杜晉綿羊，年齡6～8周齡，體重相近，營養(yǎng)及健康狀況良好，共31只，其中單羔15只，雙羔10只，三羔6只。

1.2 超數(shù)排卵處理

試驗組2 d共4次注射FSH，注射劑量8 mL，每天分別早晚各注射1次，每次注射量2 mL。第1天為上午10：00和下午5：00，第2天為上午9：00和下午5：00。最后1次注射FSH時同時注射PMSG400 IU。

1.3 測定指標及方法

收集母羔的全同胞羔羊數(shù)，稱取初生重以及超排時體重。羔羊空腹24 h后，用靜松靈以0.02 mg/kg劑量進行麻醉，采用常規(guī)手術方法采卵，外科手術方法打開腹腔，用食指和中指拉出子宮和卵巢，用游標卡尺測量卵巢表面可見的卵泡直徑，記錄兩側卵巢上的可用卵泡數(shù)（直徑大于2 mm），用一次性注射器抽吸直徑大于2 mm卵泡中的卵母細胞。采卵結束后，用37℃生理鹽水沖洗卵巢并滴入適量5%碘甘油以防止粘連。將吸取的卵泡液收集在預先加入撿卵液的培養(yǎng)皿中，在顯微鏡下將收集到的卵母細胞撿出并按形態(tài)學分級法以A、B、C和裸卵進行等級劃分、記數(shù)。

1.4 統(tǒng)計與分析

用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件的Correlation模塊對超排卵母細胞數(shù)與全同胞羔羊數(shù)、初生重以及超排時體重進行相關性分析。

2 結果與分析

2.1 超排卵母細胞數(shù)與全同胞羔羊數(shù)的關系

從圖1的趨勢上可以看出，全同胞羔羊數(shù)與超排卵母細胞數(shù)呈極顯著負相關（P<0.01），其相關系數(shù)-0.526。統(tǒng)計結果顯示，胎產單羔平均收獲卵母細胞66.2個，雙羔平均收獲46.3個，三羔平均收獲14.33個。

圖1 收獲卵母細胞數(shù)與全同胞羔羊數(shù)關系圖

2.2 卵母細胞數(shù)與初生重的關系

從圖2可以看出，超排卵母細胞數(shù)與初生重呈極顯著正相關（P<0.01）。同胞數(shù)為3個的母羔初生重小，超排后收獲的卵母細胞數(shù)量也較少。

圖2 收獲卵母細胞數(shù)與初生重關系

2.3 卵母細胞數(shù)與超排時體重的關系

從圖3可以看出，超排后收獲的卵母細胞數(shù)與超排時體重相關不顯著（P>0.05）。

圖3 收獲卵母細胞數(shù)與超排時體重關系

3 討論

3.1 羔羊年齡

Earl等［6］報道，母羊在妊娠期的135 d開始，胎兒卵巢上才開始出現(xiàn)有腔卵泡，出生時數(shù)量明顯增加。卵泡發(fā)育在羔羊出生后4～8周齡時達到高峰，但隨著青春期

的到來開始減少。本試驗選取的6～8周齡羔羊超排卵母細胞數(shù)達到了預期效果，說明選用6～8周齡的羔羊超排是可行的。

3.2 注射方案

閆文龍等［7］在山羊上研究發(fā)現(xiàn)，采用FSH+LH所產生的超排效果明顯且穩(wěn)定。吳海鳳等［8］用FSH+PMSG和FSH+LH兩種處理對6月齡的甘肅高山細毛羊進行了超數(shù)排卵試驗，結果表明，F(xiàn)SH+PMSG方案獲得發(fā)育卵泡數(shù)顯著高于FSH+LH方案。FSH在體內的半衰期短，需要多次注射；PMSG單獨使用會導致未排卵的卵泡數(shù)量增加，影響效果。所以本試驗采用的FSH+PMSG注射方法效果顯著。這說明在今后對羔羊超排的方案中采用FSH+PMSG注射的方法是可行的，可重復性強，但其作用原理今后仍需進一步深入討論。

3.3 全同胞羔羊數(shù)

本試驗統(tǒng)計了全同胞羔羊數(shù)為單羔、雙羔及三羔的羔羊超排后卵母細胞的數(shù)量，結果發(fā)現(xiàn)全同胞羔羊數(shù)與卵母細胞數(shù)量呈顯著負相關，全同胞羔羊數(shù)為單羔的羔羊超排效果最好，雙羔次之，三羔最差。這說明全同胞羔羊數(shù)對羔羊的超排效果有一定的影響。單羔效果最好，可能是由于單羔在發(fā)育過程中獲得的營養(yǎng)狀況等優(yōu)于雙羔及三羔的平均值，或者是由于母體的遺傳差異造成的，其作用原理還需進一步研究。但是在實際中，為了提高母羊的繁殖率，還是鼓勵多選用產多羔的母羊進行繁育，以提高群體的繁殖率及產羔率，從而提高經(jīng)濟效益。

3.4 羔羊初生重和體重

影響超排效果的動物因素主要包括個體和遺傳的差異、生理和營養(yǎng)狀態(tài)、季節(jié)等。代相鵬等［9］的研究結果表明，體重和超排季節(jié)對供體超排效果沒有顯著影響。劉太宇等［10］的研究結果表明，授精方式、超排季節(jié)、生育狀況等因素對超排效果沒有顯著影響。本研究統(tǒng)計了羔羊的初生重和超排時體重對超排后卵母細胞數(shù)量的影響，結果顯示超排卵母細胞數(shù)與初生重呈極顯著正相關（P<0.01），但其與超排時體重相關不顯著（P>0.05），這說明超排時體重不是影響羔羊超排效果的主要因素。但是在實際生產實踐中，還是應該選擇初生重大及超排時體重良好的羔羊進行超數(shù)排卵，這些羊的體況及營養(yǎng)狀況都能夠達到更好的水平，有助于提高羊群的質量。

［1］MardenWGR.Thehormonecontrolofovulationinthecalf［J］.Agricultural Science，1953，43:381-412.

［2］KellyJ M，David O，Simon K，et al.Enhanced efficiencyin the production of offspring from 4-8-week-old lambs［J］.Theriogenology，2005，63：1876-1890.

［3］Galli C，Crotti G，Notan C，et al.Embryoproduction byovumpick up from lice donors［J］.Theriogenology，2001，55：1341-1357.

［4］Ptak G，Tischner M，Bernabo N，et al.Donor-dependent developmental competence of occytes from lambs subjected to repeated hormonal stimulation［J］.BiologyofReproduction，2003，6：278-285.

［5］Morton K M，Catt S L，Maxwell W M，et al.Effects of lamb age，hormone stimulation and response to hormone stimulation on the yield and in vitro developmental competence ofprepubertal lamb oocytes［J］.Reproduction，F(xiàn)ertilityand Development，2005，17：593-601.

［6］Earl CR，Irvine BJ，Rowe J P，et al.Production of in vitro matured oocytes from 6-week old calves［J］.Proceedings of the Australian Society for Reproduction Biology，1994，26：15-17.

［7］閆文龍，張鎖鏈，王建國.山羊超數(shù)排卵及鮮胚移植研究［J］.河南農業(yè)科學，2003，12：53-55.

［8］吳海鳳，李發(fā)弟，常衛(wèi)華，等.羔羊超數(shù)排卵及體外受精技術研究［J］.甘肅農業(yè)大學學報，2011，12（6）：1-5.

［9］代相鵬，侯戰(zhàn)亮，王鋒，等.體況和季節(jié)等因素對供體波爾山羊超排效果的影響［J］.家畜生態(tài)學報，2006，27（2）：28-33

［10］劉太宇，靳雙星，張桂枝，等.影響山羊超排效果的因素研究［J］.中國農學通報，2006，22（9）：27-30.

過刊征訂

1.《中國草食動物》雜志1999年（1～6期）21元，2000～2002年（1～6期）27元，2003年（2～6期）33元，2004～2008年（1～6期）39元，2009、2010、2011、2012年（1～6期）48元（均含掛號郵資）；

2.有2002、2003、2004、2005、2006和2007年養(yǎng)羊專輯（包括品種、遺傳、繁育、營養(yǎng)、市場等內容），價格分別為31、34、26、58、38、28元，含掛號郵資，數(shù)量有限，欲購從速；

3.請您匯款時務必寫清楚通訊地址、郵政編碼等事宜，以便準確投寄。

《中國草食動物科學》雜志社

Corelation between the Lamb Condition and Its Superovulation Oocyte Number

Qin Xue，Yue Wen-bin，ZhangChun-xiang，et al
（College ofAnimal Sciences and Technology，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801，China）

In order to explore the relation of lamb’s own condition and oocyte number of superovulation，thirty-one Dorper× Jinzhong♀crossbred lambs aged 6-8-week-old were superovulated to collect oocytes，and the correlation between litter size，birth weight，weight of superovulation with oocyte number were analyzed.The results showed that there was significant negative correlation between litter size and oocyte number（P<0.01）；there was significant positive correlation between birth weight and oocyte number（P<0.01）；There wasn′t significant correlation between weight of superovulation and oocyte number（P>0.05）.It suggested that the litter size and birth weight might have effects on oocyte number ofsuperovulation in lambs.

litter size；birth weight；weight ofsuperovulation；oocyte；lamb

S826.3

A

2095-3887（2014）02-0014-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.02.004

2014-01-07

山西省科技攻關計劃項目（20110311029）

秦雪(1988-)，女，碩士研究生。

張春香（1972-），女，副教授，碩士生導師。