史 良，李慶慶

（成都市公安局 四川成都 610000)

擦拭類痕跡脫落細(xì)胞提取方法的比較實驗

史 良，李慶慶

（成都市公安局 四川成都 610000)

目的:通過三種不同提取方法對同一非滲透性客體上的接觸類生物檢材進行提取，分析三種提取方法對DNA檢出率的影響差異。方法:分別采用紗布擦拭法、棉簽二步法和脫落細(xì)胞粘取器提取20處赤手桌面擦拭痕跡，進行DNA檢測。 結(jié)果:紗布擦拭法提取均未檢出完整STR分型，其中25%檢出部分STR分型及混合STR分型，其余75%為無效圖譜或未檢出；棉簽二步法提取有10%檢出完整STR分型，60%檢出部分STR分型及混合STR分型，30%為無效圖譜或未檢出；脫落細(xì)胞粘取器法有10%檢出完整STR分型，20%檢出部分STR分型及混合STR分型，70%為無效圖譜或未檢出。三組結(jié)果間具有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異（P=0.009），其中棉簽二步法結(jié)果最好，脫落細(xì)胞粘取器次之，紗布擦拭法效果最差。結(jié)論:對于非滲透性客體上的接觸類生物檢材的提取，使用棉簽二步法的效果相對比較理想。

脫落細(xì)胞；擦拭痕跡；DNA檢驗

擦拭類物證是接觸類生物物證中的一種，由于其微量性以及遺留的普遍性，容易被犯罪嫌疑人所忽視，這類物證在現(xiàn)場勘查中的發(fā)現(xiàn)及正確提取，能夠較大程度提高現(xiàn)場勘查的質(zhì)量。本次研究以現(xiàn)場勘查中最常見的手指擦拭痕跡為研究對象，以光滑非滲透性客體為承痕客體，采用紗布擦拭法[1]、棉簽二步法[2,3]和脫落細(xì)胞提取器法[4,5]提取，比較三種提取方法在接觸類生物檢材提取效果上的優(yōu)劣。

一、材料與方法

（一）樣本制作。

赤手擦拭痕跡60處。承痕客體均選擇光滑非滲透性客體（辦公桌桌面），每次制樣前均使用一次性毛巾將表面反復(fù)擦拭干凈。所有樣本的制樣人為同一人，一處擦拭痕跡由制樣人的一只手指在客體上擦拭，每處痕跡均反復(fù)擦拭四次。每20處擦拭痕跡為一組，每組用一種方法提取。所有參與實驗人員均佩戴手套、口罩、頭套等防護用具。

（二）取樣。

1．紗布擦拭法。用潔凈剪刀剪取0.3cm×0.3cm面積大小潔凈紗布，鑷子夾住蘸取少量純凈水，用定性濾紙吸附掉多余水分，使紗布具有粘附力。用該紗布在遺留有擦拭痕跡處反復(fù)擦拭后裝入1.5ml離心管內(nèi)備檢。

2．棉簽二步提取法。將一支干凈棉簽用純凈水浸潤，用鑷子夾取棉簽上少量棉紗，采用另一支干燥、潔凈的棉簽上吸附掉多余水分，使棉紗具有粘附力。用該棉紗在遺留有擦拭痕跡處反復(fù)擦拭，放入1.5ml離心管內(nèi)。再用鑷子夾取少量干燥棉紗，在已經(jīng)擦拭過的地方再次進行反復(fù)擦拭，再將該棉紗放入同一離心管內(nèi)備檢。

3．脫落細(xì)胞提取器提取。打開提取器的蓋子，小心揭開粘面保護層，用粘面在有擦拭痕跡處反復(fù)粘取多次，封存?zhèn)錂z。

（三）DNA的提取及檢測。

1．DNA的提取。采用CheleX-100進行DNA提取。將擦拭物置于1.5ml離心管中，加入5% CheleX-100 60μl和10g/L蛋白酶K 5μl，加樣槍頭混勻，置于56℃1h，期間震蕩1次；100℃放置10min，10000g離心3min，上清4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2．PCR擴增。采用對PowerPlex16 HS(Promega公司)試劑盒進行PCR擴增。擴增反應(yīng)體系為10μl體系 （Sample 4μl、Master Mix 2μl、Primer Pair Mix 1μl、H2O 3μl）。采用GeneAmp?PCR System 9700熱循環(huán)儀進行PCR擴增，共32個循環(huán)。擴增產(chǎn)物4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3．電泳。取擴增產(chǎn)物1μl，采用ABI 3130XL型遺傳分析儀進行電泳檢測，GeneMapper ID-X軟件進行分析。

（四）統(tǒng)計學(xué)方法。

采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，Kruskal-Wallis秩和檢驗進行多組間非參數(shù)比較。

二、結(jié) 果

辦公桌桌面上擦拭性生物檢材三種提取方法DNA檢測結(jié)果主要表現(xiàn)為出現(xiàn)完整DNA分型、部分STR分型、混合STR分型以及無效圖譜幾種類型（圖1-3）。

圖1 完整STR分型圖譜

圖2 混合STR分型圖譜

圖3 無效DNA分型圖譜

kruskal-Wallis秩和檢驗顯示三種提取方法具有顯著性差異（P=0.009），棉簽二步法效果最好。三種提取方法的結(jié)果見表1。

表1 三種提取方法結(jié)果比較

三、討 論

隨著DNA技術(shù)的不斷完善，生物物證在刑偵破案中認(rèn)定犯罪、分析作案過程、指明偵查方向和劃定偵查范圍等方面的作用越來越顯得重要。在現(xiàn)場勘查中，指紋、足跡等傳統(tǒng)痕跡物證已經(jīng)越來越不容易提取到，并且隨著犯罪分子對DNA檢驗技術(shù)有了一定了解，一些肉眼可見的血跡、煙頭等物證可能會被破壞。

在案件的現(xiàn)場勘查中，常常會發(fā)現(xiàn)犯罪嫌疑人遺留下一些攀爬、擦劃、擦拭等痕跡，在這些痕跡中往往都會含有犯罪分子的脫落細(xì)胞，成功提取這些痕跡里的犯罪分子脫落細(xì)胞可以為提高現(xiàn)場勘查質(zhì)量以及為偵查、破案增添一個重要途徑。此類物證的特點是：1．承痕客體往往較大或比較固定，難以直接原物提取到實驗室進行檢驗；2．受現(xiàn)場條件和現(xiàn)場保護措施等因素制約，檢材容易受到污染；3．受犯罪分子觸碰時間、接觸力度和皮膚特質(zhì)等因素影響，物證中含有DNA物質(zhì)的數(shù)量差別也會很大；4．時間越長，接觸類痕跡中的DNA物質(zhì)會部分降解導(dǎo)致提取量減少。

所以，如何在現(xiàn)場勘查過程中，第一時間對承痕客體上的DNA物質(zhì)進行最大限度的有效富集并獲得有價值的DNA圖譜，是接觸類生物物證在案偵工作中發(fā)揮作用的關(guān)鍵所在。

本實驗中接觸性生物檢材經(jīng)過三種不同的提取方法提取，在檢出完整STR分型方面，使用棉簽二步法和脫落細(xì)胞提取器的檢驗效果優(yōu)于紗布擦拭法；在檢出部分STR分型及混合STR分型方面，使用棉簽二步法的效果明顯優(yōu)于其他兩種方法。在實際案偵工作中，能夠檢出部分STR分型及混合STR分型，也能為偵查破案，特別是劃定或縮小偵查范圍提供很大的支撐。

在本次實驗中，使用棉簽二步法在第一次擦拭后，在短暫的時間范圍內(nèi)（約10秒），肉眼可見承痕客體表面仍舊殘留有液體，此時客體表面仍殘留有生物物證沒有被提取到，棉簽二步法的第二次提取可以將該殘留物質(zhì)粘附提取。而使用脫落細(xì)胞提取器，由于本次實驗采用的擦拭痕跡面積比提取儀的粘面面積大，在粘取多次以后，膠面不再具有粘性，影響了提取檢驗的效果。但是，如果膠面恰好粘附到比較集中的DNA物質(zhì)，則在檢驗效果上有非常好的表現(xiàn)。使用脫落細(xì)胞提取儀的優(yōu)點在于提取材料規(guī)范成熟，操作簡單易學(xué)，提取后保護到位，缺點是使用成本較高，提取范圍較小。

在本次實驗中，針對光滑非滲透性客體上的接觸類生物物證，使用棉簽二步法提取優(yōu)勢比較明顯。該方法的優(yōu)點在于提取材料容易獲得，成本低，選擇提取的范圍容易掌握，操作步驟比較簡單，檢出率較高。但該法對操作手法有一定要求，如棉紗量、沾水量以及擦拭時的力量大小等。鑒于本次實驗樣本量的限制，對于實驗的結(jié)論還需要在以后實踐工作中進一步印證。

1.張曉楠，吳元明，候 穎，等.從梳子上提取DNA檢驗1例[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2007（28）：23

2.袁則平.棉簽二次轉(zhuǎn)移法有效提取現(xiàn)場手套印脫落DNA[J].刑事技術(shù)，2013（5）：232.

3.Sweet D,Lore te M,Lore te JA,et al.A improved method to recover saliva from human skin:the double swab techique[J],J Fore sic Sci,1997(42):320-322.

4.趙春鶴，郭業(yè)明，陳紅英，等.利用脫落細(xì)胞粘取器提取接觸類檢材DNA的方法[J].廣東公安科技，2013（4）：54-55.

5.陳殿宇，郝金萍，張忠祥，等.生物脫落細(xì)胞提取儀在案件檢驗中的應(yīng)用[J].刑事技術(shù)，2008，（2）：58.

（責(zé)任編輯:吳良培）

D919.2

A

1674-5612（2014）05-0052-04

2014-06-06

史 良，（1976-），男，四川成都人，成都市公安局刑事偵查局，研究方向：刑事科學(xué)技術(shù)。