李修明，于 滿，汪 立

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，河北承德 067000)

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C在腎癌中的表達(dá)及意義

李修明，于 滿△，汪 立

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，河北承德 067000)

目的:探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)VEGF-C在腎癌及正常腎組織中的表達(dá)情況。結(jié)果:腎癌組織VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)率(85.0%)顯著高于正常腎組織(P＜0.01)。腎癌組織VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別、分化程度無(wú)關(guān)(P＞0.05)，與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腎癌臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論:VEGF-C可能通過(guò)促進(jìn)淋巴管生成參與腎癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在腎癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

腎癌;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C;免疫組織化學(xué)

腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma，RCC)占成人惡性腫瘤的2%-3%，發(fā)病率居泌尿系統(tǒng)腫瘤的第2位。僅2008年全世界診斷腎癌約2.71萬(wàn)例，因腎癌死亡約1.16萬(wàn)人[1-2]。盡管血行轉(zhuǎn)移是腎癌最重要的轉(zhuǎn)移途徑，但仍有7%-17%的患者存在腎門(mén)或局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。新近研究證明，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)及其受體VEGFR-3信號(hào)通路是淋巴管形成的基礎(chǔ)，并在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型觀察到VEGF-C可誘導(dǎo)腫瘤淋巴管生成并促進(jìn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究通過(guò)檢測(cè)VEGF-C在腎癌中的表達(dá)，探討其在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用及相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 2012年8月-2013年8月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科RCC手術(shù)切除標(biāo)本40例，18例行保留腎單位手術(shù)、22例行根治性腎切除術(shù)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者均行根治性腎切除術(shù)加區(qū)域淋巴結(jié)清掃術(shù)?；颊咧心?5例、女15例，年齡24-65歲(平均51.9歲)。所有病例均經(jīng)病理證實(shí)為RCC，其中透明細(xì)胞癌37例、乳頭狀腺癌1例、嫌色細(xì)胞癌2例，所有患者術(shù)前均未接受放化療及免疫治療。腫瘤分級(jí)按1997年WHO標(biāo)準(zhǔn):高分化20例，中分化11例，低分化或未分化9例。腫瘤分期按2002年AJCC腎癌臨床分期:Ⅰ期22例，Ⅱ期6例，Ⅲ期11例，Ⅳ期1例。其中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例，有腎門(mén)周?chē)馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移者11例。以10例取自根治性腎切除標(biāo)本中距腫瘤最遠(yuǎn)處正常腎臟組織為對(duì)照。

1.2 方法 標(biāo)本常規(guī)4%甲醛固定，石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)VEGF-C的表達(dá)。一抗為兔抗人VEGF-C多克隆抗體(武漢博士德公司，1:100稀釋)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 以腎癌細(xì)胞胞質(zhì)和/或胞膜出現(xiàn)清晰棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)，采用Volm雙評(píng)分法判定結(jié)果[3]。在染色均勻的腫瘤區(qū)，選取5個(gè)高倍鏡視野(×400):①按陽(yáng)性細(xì)胞百分率(A值)評(píng)分:無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞為0分，＜25%為1分，25%-50%為2分，＞50%為3分;③按染色強(qiáng)度(B值)評(píng)分:不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。綜合染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(A值)與染色強(qiáng)度(B值)判斷結(jié)果:陰性(-):0分，弱陽(yáng)性(+):1-2分，中度陽(yáng)性(++):3-4分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++):5-6分。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，行卡方檢驗(yàn)和等級(jí)資料的秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同腎組織VEGF-C的表達(dá)情況 40例RCC組織中，VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)率為85.0%(34/40)，明顯高于正常腎組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 VEGF-C在正常腎組織及腎癌中的表達(dá)情況

2.2 VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)與腎癌病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表2。VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別、分化程度無(wú)關(guān)(P＞0.05)，與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腎癌臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。

表2 VEGF-C表達(dá)與腎癌病理特征的關(guān)系

3 討論

VEGF-C是VEGF家族中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的特異性促進(jìn)淋巴管生成的因子，作為配體與VEGFR-3結(jié)合，通過(guò)激活VEGFR-3誘導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷徙，促進(jìn)淋巴管增生[4]。雖然腫瘤是否能誘導(dǎo)淋巴管生成目前仍有爭(zhēng)議，但已證實(shí)淋巴生成因子如VEGF-C的過(guò)量表達(dá)可促使生成更多的淋巴管，有利于腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。關(guān)于實(shí)驗(yàn)小鼠腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C能夠誘導(dǎo)淋巴管出芽，并能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入毛細(xì)淋巴管[5];Ruddell等[6]研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C能誘導(dǎo)集合淋巴管擴(kuò)張，利于淋巴液流動(dòng)，運(yùn)送大量的腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)積聚，從而有助于腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。并且目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，大多惡性腫瘤，如前列腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌和肺癌等均發(fā)現(xiàn)VEGF-C的表達(dá)明顯高于正常組織。本研究亦證實(shí)了這一點(diǎn)，腎癌組織VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常腎組織;同時(shí)發(fā)現(xiàn)，腎癌VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)與腎癌病理分期和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究亦提示，VEGF-C在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中具有重要作用，淋巴管生成可能是RCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要因素。

近年來(lái)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的研究引起了廣大學(xué)者的高度重視，但腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的具體過(guò)程尚不十分清楚。Wong等[7]的研究證實(shí)，采用穩(wěn)定的短時(shí)間RNA干擾抑制VEGF-C的表達(dá)，腫瘤的淋巴管形成減少達(dá)99%，但不影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;還有研究顯示，雖然新生淋巴管可完全被VEGFR-3抗體抑制，但仍在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)腫瘤。提示腫瘤分泌VEGF-C為新生淋巴管必需，但淋巴管新生不是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移所必需的。可見(jiàn)，腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移取決于淋巴管和腫瘤細(xì)胞遷移雙方面的作用，不能單純將腫瘤淋巴管新生作為判斷腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后的指標(biāo)，但目前以VEGF-C為靶向的抗淋巴管生成研究已經(jīng)開(kāi)展。多項(xiàng)研究均顯示，VEGFR-3抑制性抗體或以VEGF-C為靶向的siRNA能夠降低腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率[8-9];Kimura[10]等發(fā)現(xiàn)，黃芩的提取物黃芩素可通過(guò)抑制VEGF-C誘導(dǎo)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFR-3的磷酸化，抑制腫瘤淋巴管生成，從而抑制腎癌的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移，提示VEGF-C可作為基因治療的靶點(diǎn)。

隨著對(duì)VEGF-C結(jié)構(gòu)、功能以及腎癌淋巴管生成機(jī)制的進(jìn)一步研究，相信在不久的將來(lái)將逐漸闡明腎癌淋巴管生成的機(jī)制及其與腎癌生物學(xué)行為的關(guān)系，因此，針對(duì)腎癌淋巴管新生的靶向治療在臨床中的應(yīng)用也將具有廣闊的前景。

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EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR-C IN RENAL CELL CARCINOMA

LI Xiu-ming, YU Man, WANG Li
(Department of Urology, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the effects of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) in development of renal cell carcinoma.Methods:SP immunohistochemical staining was used to observe the expressions of VEGF-C in renal cell carcinoma and normal renal tissue.Results:The positive rate of VEGF-C in renal cell carcinoma was 85.0%, which was obviously higher than that of normal renal tissue (P＜0.01). In renal cell carcinoma, the positive expression of VEGF-C had no relations with age, sex and differentiation degree (P＞0.05); but was related to lymphatic metastasis and clinical classif i cation of renal cell carcinoma (P＜0.0).Conclusions:VEGF-C may participate in lymph node metastasis of renal cell carcinoma by promoting lymphangiogenesis, so plays important role in carcinogenesis and development of renal cell carcinoma.

Renal cell carcinoma; VEGF-C; Immunohistochemistry

R737.11

A

1004-6879(2014)03-0191-03

2013-11-05)

△ 通訊作者