白 林，范金釗，徐風(fēng)華，王歡歡（.解放軍總醫(yī)院藥品保障中心，北京 00853；.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 33000）

HPLC法測(cè)定復(fù)方樟腦軟膏中樟腦的含量

白 林1，范金釗2，徐風(fēng)華1，王歡歡1（1.解放軍總醫(yī)院藥品保障中心，北京 100853；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 233000）

目的：建立HPLC法測(cè)定復(fù)方樟腦軟膏中樟腦的含量。方法：采用色譜柱Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（15∶45∶40）；檢測(cè)波長(zhǎng)：289 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。結(jié)果：樟腦與其他雜質(zhì)峰分離良好，樟腦在250.00 ～ 2 000.00 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r = 1.000 0），平均回收率為99.68%，RSD為1.21%（n = 9）。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便易行、準(zhǔn)確，可作為復(fù)方樟腦軟膏中樟腦的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法；復(fù)方樟腦軟膏；樟腦；含量測(cè)定

復(fù)方樟腦軟膏收載于《中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》[1]，用于消毒、收斂，輕度凍瘡、手足皸裂等癥。該制劑在臨床應(yīng)用多年，是療效顯著的醫(yī)院制劑。處方中樟腦具有促滲作用，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無樟腦含量測(cè)定方法。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定復(fù)方樟腦軟膏中主要有效成分樟腦的含量，以期為有效控制該制劑的質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（含四元梯度泵、自動(dòng)脫氣機(jī)、VWD檢測(cè)器和化學(xué)工作站，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；UV-2550型紫外分光光度儀（日本島津公司）。

樟腦對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110747-201008）；甲醇、乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；復(fù)方樟腦軟膏（本院自制，每盒20 g，批號(hào)20131212、20131213、20131216）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（15∶45∶40）；檢測(cè)波長(zhǎng)：289 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

1）對(duì)照品溶液：取樟腦對(duì)照品約0.05 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（含樟腦500 μg·mL-1）。2）供試品溶液：取本品約5 g（含樟腦約0.25 g），精密稱定，置100 mL量瓶中，加入80 ℃的無水乙醇約30 mL，置80 ℃水浴加熱振搖使溶化，放冷，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，冰浴中冷卻1 h，濾過。精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。3）陰性對(duì)照溶液：按處方比例取除樟腦以外的其余成分，按復(fù)方樟腦軟膏的制備工藝制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，樟腦色譜峰的保留時(shí)間約為12 min，分離度大于2.0，理論塔板數(shù)以樟腦峰計(jì)算大于3000。詳見圖1。

圖1 復(fù)方樟腦軟膏中樟腦的HPLC色譜圖A – 對(duì)照品，B – 供試品，C – 陰性對(duì)照；1 – 樟腦Fig 1 HPLC chromatograms of camphor in compound camphor ointmentA – reference, B – sample, C – negative reference; 1 – camphor

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取含樟腦分別為250.00、375.00、500.00、750.00、1 000.00、1 250.00、1 500.00、2 000.00 μg·mL-1的對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y = 0.132 2 X + 0.251 9，r = 1.000 0。實(shí)驗(yàn)表明樟腦在250.00 ～ 2 000.00 μg·mL-1的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積值，RSD為0.15%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取復(fù)方樟腦軟膏約5 g（批號(hào)20131216），共6份，精密稱定，分別按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，樟腦含量（標(biāo)示量%）平均值為98.96%，RSD為0.62%（n = 6），表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性考察

取復(fù)方樟腦軟膏（批號(hào)20131216），按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別在0、1、4、6、12、24 h進(jìn)樣，計(jì)算樟腦的峰面積值，RSD為0.19%。結(jié)果表明供試品溶液中樟腦在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取樟腦約0.20、0.25、0.30 g各3份（處方量的80%、100%、120%），分別精密稱定，按處方比例分別加入復(fù)方樟腦軟膏基質(zhì)，按復(fù)方樟腦軟膏的制備工藝制成樣品，按供試品溶液制備方法制成樣品溶液。依照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖及峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果表明本方法回收率良好。樟腦的平均回收率為99.68%，RSD為1.21%，詳見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果. n = 9Tab 1 Results of recovery test. n = 9

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批復(fù)方樟腦軟膏（批號(hào)20131212、20131213、20131216），樟腦平均含量分別為標(biāo)示量的99.62%、98.77%、97.89%。

3 討論

樟腦的含量測(cè)定方法主要有氣相色譜法[2-5]、氣相色譜-質(zhì)譜法[6]、毛細(xì)管- GC法[7-8]、HPLC法[9]、系數(shù)倍率法[10]等。其中，氣相色譜法居多，主要因?yàn)檎聊X具有揮發(fā)性，易溶于有機(jī)溶劑，對(duì)儀器設(shè)備條件要求較高。

樟腦紫外最大吸收峰位為289 nm，由于軟膏基質(zhì)中羊毛脂有紫外吸收，直接采用紫外分光光度法測(cè)定樟腦會(huì)造成干擾。系數(shù)倍率法[10]為計(jì)算分光光度法，誤差較大。

本研究中供試品溶液的制備采用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋并濾過，有效避免軟膏基質(zhì)遇流動(dòng)相析出，對(duì)色譜柱及液相色譜系統(tǒng)均具有較好的保護(hù)作用。

樟腦雖有揮發(fā)性，但本樣品溶液穩(wěn)定，以甲醇-乙腈-水（15∶45∶40）為流動(dòng)相，在柱溫35 ℃[11]，檢測(cè)波長(zhǎng)為289 nm情況下，峰形較好，保留時(shí)間適中，雜質(zhì)峰無干擾。本方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，對(duì)于半固體制劑中樟腦的含量測(cè)定具有較好的參考意義。

[1]中國(guó)人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范[S].北京：人民軍醫(yī)出版社，2003：163-164.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1107-1108.

[3]陳海霞，陳祥勝.GC法測(cè)定凍傷搽劑中樟腦的含量[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，12（2）：35-36.

[4]陳煜，馮軍，黃艷，等.氣相色譜法測(cè)定復(fù)方薄荷乳膏中樟腦和薄荷腦的含量[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，13（2）：45-47.

[5]牛洪輝，周黎明，劉杰.氣相色譜法測(cè)定紅花樟腦酒中樟腦的含量[J].中醫(yī)研究，2010，23（8）：19-21.

[6]顏敏，劉圓圓，易必新.貼敷類醫(yī)療器械中樟腦薄荷腦與冰片的含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31（5）：637-639.

[7]王懷玉，彭銳，王征帆，等.毛細(xì)管GC法測(cè)定不同產(chǎn)地青蒿中樟腦和冰片的含量[J].中國(guó)藥房，2012，23（15）：1395-1396.

[8]霍永昌，黃婉鋒，高衛(wèi)東.毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定獅子油中兩種成分的含量[J].中藥材，2010，33（2）：296-298.

[9]謝友亮.高效液相色譜法測(cè)定樟腦的含量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（3）：231-233.

[10]周曉虹.系數(shù)倍率法測(cè)定樟腦乳膏中樟腦的含量[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17（24）：147-148.

[11]白林，李程程.HPLC法同時(shí)測(cè)定脊痛寧膠囊中葛根素和芍藥苷的含量[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)，2013，10（4）：196-198.

Content determination of camphor in compound camphor ointment by HPLC

BAI Lin1, FAN Jin-zhao2, XU Feng-hua1, WANG Huan-huan1(1. Department of Pharmaceutical Care, PLA General Hospital, Beijing 100853, China; 2. Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China)

Objective:To establish the HPLC method for determining the content of camphor in compound camphor ointment.Methods:The analysis was carried out on a column of Diamonsil C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase consisting of methanol-acetonitrile-water (15∶45∶40), the flow rate was 1.0 mL·min-1, the detection wavelength was 289 nm, column temperature was 35 ℃, the sample injection was 10 μL.Results:The samples were separated well from other substances. The calibration curve of camphor was linear in the range of 250.00 – 2 000.00 μg·mL-1(r = 1.000 0). The average recovery of camphor in the compound camphor ointment was 99.68% with RSD of 1.21% (n = 9).Conclusion:This method is accurate and feasible, which can be applied as the quality control of camphor in the compound camphor ointment.

HPLC; Compound camphor ointment; Camphor; Content determination

R917

A

1672 – 8157(2014)04 – 0212 – 03

2014-01-07

2014-03-06）

半固體制劑標(biāo)準(zhǔn)提高系列研究課題（13ZJZ05）

徐風(fēng)華，女，研究員，主要從事藥物新劑型與新型遞藥系統(tǒng)研究。E-mail：xufh@yahoo.com

白林，女，主任藥師，主要從事藥物分析與藥品質(zhì)量控制工作。E-mail：bailin301@126.com