肖 琳 李代強(qiáng) 趙 帥

1.湘雅二醫(yī)院病理科，湖南長沙 410011；2.長沙市三醫(yī)院病理科，湖南長沙 410015

表皮生長因子受體突變在晚期非小細(xì)胞肺癌靶向治療中的臨床價(jià)值研究

肖 琳1李代強(qiáng)1趙 帥2

1.湘雅二醫(yī)院病理科，湖南長沙 410011；2.長沙市三醫(yī)院病理科，湖南長沙 410015

目的探討以表皮生長因子受體 （EGFR）酪氨酸激酶抑制劑getfinibi為代表的靶向治療晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的可行性。方法選取2011年3月—2013年10月32例經(jīng)鉑類治療方案失敗的晚期 NSCLC患者應(yīng)用getfinibi 250 mg/d治療，采用RECIST標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)療效，并對接受getfinibi治療的患者的腫瘤組織進(jìn)行EGFR酪氨酸激酶域基因突變檢測。結(jié)果32例標(biāo)本中共檢測出12例基因突變。4例為19號染色體缺失突變。8例為21號染色體錯(cuò)義突變，均為L858R變異（T＞G）。經(jīng)getfinibi治療后EGFR基因突變組的客觀有效率達(dá)58.33%，疾病控制率達(dá)100.0%，均高于無EGFR基因突變組（分別為10.00%、20.00%）（P＜0.05）。結(jié)論getfinibi靶向治療晚期 NSCLC療效明顯，getfinibi治療效果明顯的患者中EGFR基因突變的發(fā)生率高，因此，EGFR酪氨酸激酶域突變檢測可作為患者應(yīng)用getfinibi療效的一個(gè)預(yù)測指標(biāo)。

表皮生長因子受體突變；晚期非小細(xì)胞肺癌；靶向治療

肺癌作為嚴(yán)重的惡性腫瘤，發(fā)病率和致死率最高，對人類的生命健康造成了嚴(yán)重的威脅。肺癌中大約80%為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，采取化療或放療治療NSCLC，其效果不明顯，必須采取手術(shù)治療，才能取到治愈效果。但只有30%NSCLC患者的手術(shù)切除。晚期NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)一線治療是全身化療，可延長生存時(shí)間、改善生活質(zhì)量。盡管新的化療藥物不斷涌現(xiàn)，但無手術(shù)機(jī)會的晚期NSCLC預(yù)后仍然很差[1]。以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療總體有效率為20%～40%，中位生存期(MST)僅8～11個(gè)月，1年存活率30%～40%。因此，對于NSCLC的治療迫切需要新的方案。為探討以表皮生長因子受體 （EGFR）酪氨酸激酶抑制劑getfinibi為代表的靶向治療晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的可行性，選取2011年3月—2013年10月32例經(jīng)鉑類治療方案失敗的晚期 NSCLC患者，進(jìn)行酪氨酸激酶抑制劑為代表的靶向治療，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取32例經(jīng)鉑類治療方案失敗的晚期NSCLC患者，入選對象均知情同意。在32例晚期 NSCLC患者中，男20例，女12例，年齡在45～72歲之間，平均年齡為(63.16±5.81)歲。所有患者經(jīng)組織學(xué)檢查均診斷為局部晚期NSCLC或轉(zhuǎn)移NSCLC，均無法進(jìn)行手術(shù)治療。入選標(biāo)準(zhǔn)：①參考RECIST標(biāo)準(zhǔn)，患者≥1個(gè)可測量病灶；②預(yù)計(jì)生存期超過3個(gè)月者；③在1個(gè)月內(nèi)未接受抗腫瘤治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心、肝、腎功能不全者；②骨髓造血功能缺損者。

1.2 方法

患者口服getfinibi 250 mg/片，1次/d。根據(jù)患者病情變化，適當(dāng)調(diào)整劑量，直到患者出現(xiàn)不能耐受的毒性。

1.3 EGFR酪氨酸激酶域基因突變檢測

1.3.1 儀器與試劑 儀器為TGL-16G低溫高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)）與ERICOMP公司生產(chǎn)的PCR儀。試劑為EGFR、APES（美國SIGMA公司生產(chǎn)）、細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒（上海生物工程股份有限公司提供）、TaqDNApolymerase（大連寶生物工程有限公司提供）、DNA凝膠回收試劑盒 （廣州博亞公司提供）。

表1 12例EGFR酪氨酸激酶域基因突變檢測結(jié)果

表2 EGFR基因突變與未突變組近期客觀療效評價(jià)

1.3.2 基因組DNA提取 標(biāo)本采用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋與連續(xù)性切片時(shí)，每換一個(gè)石蠟塊時(shí)均要徹底清潔切片機(jī)。標(biāo)本切8～10張，切片厚度為10 μm，分別裝在2個(gè)消毒的l.5 mL EP管中。然后置于組織的EP管離心5 s，加入l mL二甲苯，振蕩30 min，以速率為12 000 r/min離心5 min，去上清，重復(fù)3～5步。然后加入1 mL 100%乙醇，混勻，以速率為12 000 r/min離心5 min，將乙醇吸出，自然風(fēng)干，最后采用細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。

將200 μL TE與400 μL消化緩沖液加到干燥后的標(biāo)本中，混勻，然后加入蛋白酶K 6～12 μL。以速率為12 000 r/min離心5 min，去上清，并在上清中加入260 μL無水乙醇混勻，然后將液體轉(zhuǎn)移到UNIQ-10柱，以速率為8 000 r/min離心30 s，然后加入50 μL沖洗緩沖液，再離心30 s。將離心管的沖洗緩沖液取出后，離心30 s，轉(zhuǎn)移到新的離心管中。然后在UNIQ-10柱DNA吸附膜中加入50 μL洗脫緩沖液，以速率為12 000 r/min離心5 min，以提取出基因組DNA。

1.4 觀察指標(biāo)

實(shí)體瘤近期客觀療效評定標(biāo)準(zhǔn)[2]，近期療效包括：完全緩解（CR）、部分緩解 （PR）、穩(wěn)定 （SD）和進(jìn)展 （PD），以CR+PR計(jì)算有效率，以CR+PR+SD計(jì)算疾病控制率。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

資料均用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 EGFR酪氨酸激酶域基因突變檢測結(jié)果

32例標(biāo)本中共檢測出 12例基因突變。4例為 19號染色體缺失突變。8例為21號染色體錯(cuò)義突變，均為 L858R變異（T＞G）。經(jīng) getfinibi治療后 EGFR基因突變組的客觀有效率達(dá)58.33%，高于無 EGFR基因突變組的10.00%；疾病控制率達(dá)100.00%，高于無 EGFR基因突變組的20.00%（P＜0.05），如表1所示。

2.2 EGFR基因突變及末突變組近期客觀療效

EGFR突變組有效率為58.33%，明顯高于無EGFR突變組的10.00%；疾病控制率為100.0%，明顯高于無EGFR突變組的20.00%（P＜0.05），見表2。

3 討論

腫瘤靶向治療過程中，需要遵循腫瘤進(jìn)展過程，細(xì)胞表面生長因子受體、細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路中重要酶、蛋白質(zhì)均可以成為作用靶點(diǎn)[3]。腫瘤細(xì)胞分化、周期、凋亡、遷移、浸潤、淋巴轉(zhuǎn)移和全身轉(zhuǎn)移等過程的從DNA到蛋白水平的任何亞細(xì)胞分子可作為廣義的分子靶點(diǎn)。隨著特異性靶向治療的出現(xiàn)，腫瘤的治療應(yīng)用方法越來越多，其治療效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)化療[4]。目前非小細(xì)胞肺癌領(lǐng)域中靶向治療研究比較多的是表皮生長因子受體(epiderma1 growth factor receptor，EGFR)阻斷劑和血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR)阻斷劑。

EGFR作為一種糖蛋白受體，大多存儲于哺乳動物的上皮細(xì)胞膜。在信號作用控制下，將難以控制細(xì)胞的生長。EGFR酪氨酸激酶具有復(fù)發(fā)率高、存活期短特征，作為腫瘤治療的重要靶分子。相關(guān)研究表明[5]，選擇性酶抑制劑可進(jìn)行阻斷酪氨酸激酶活化，抑制表皮生長因子受體激活、細(xì)胞凋亡。

在INTACTl中，共1 093例初治晚期NSCLC患者隨機(jī)進(jìn)入健擇/順鉑(GP)方案+getfinibi 250 mg/d或+getfinibi 500 mg/d或+安慰劑3組治療。在INTAC他中，共1 037例初治晚期NSCLC患者隨機(jī)人組，化療方案為紫杉醇+卡鉑 (TP)[6]。研究顯示，getfinibi聯(lián)合 GP/TP方案化療未見療效提高或生存期延長。Getfinibi聯(lián)合化療組皮疹、腹瀉不良反應(yīng)高于安慰劑聯(lián)合化療組，其他化療常見不良反應(yīng)3組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ⅲ期多中心臨床研究中，在美國以外的國家進(jìn)行的TALENT研究中，共1 172例未接受過化療的晚期NSCLC患者，隨機(jī)應(yīng)用順鉑/健擇方案聯(lián)合getfinibi 150 mg/d或安慰劑治療[7]。edotinib聯(lián)合化療組中位OS、PFS及1年生存率分別為301 d(95%CI：274～315)、167 d (95%CI：146-183)和41%，安慰劑聯(lián)合化療組分別為309 d(95% cI：282～343)、179 d(95%cI：154～202)和42%。getfinibi組與對照組對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在該次研究中的32例標(biāo)本，基因突變的檢出率為37.50（12/32），EGFR基因突變組的疾病控制率與客觀有效率分別為100.00%、58.33%，明顯高于無 EGFR基因突變組的20.00%、10.00%，與劉紅梅等人[8]的報(bào)道相符。由此可見對晚期NSCLC采用getfinibi靶向治療，治療效果顯著。因此，對于EGFR酪氨酸激酶域突變的檢測可以作為患者接受getfinibi治療效果的預(yù)測指標(biāo)。

[1]趙子影，彭六保，李健和，等.吉非替尼在表皮生長因子受體突變的晚期非小細(xì)胞肺癌患者一線化療中的成本-效果性分析 [J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2013，22(12)：183-184.

[2]侯曉瑋，莊興俊，宋謙，等.CT引導(dǎo)經(jīng)皮肺穿刺活檢檢測晚期非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體基因突變[J].介入放射學(xué)雜志，2013，2(8)： 125-128.

[3]仇曉軍，姚登福，季斌，等.非小細(xì)胞肺癌58例表皮生長因子受體突變狀態(tài)[J].江蘇醫(yī)藥，2013，7(11)：804-806.

[4]孫曉軍，李杰.非小細(xì)胞肺癌患者血漿表皮生長因子受體基因突變檢測及其臨床意義[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2013，7(9)：2833-2837.

[5]杜艷萍,江興堂,尹小文,等.表皮生長因子受體基因突變在晚期非小細(xì)胞肺癌維持治療中的作用[J].中國新藥雜志,2010（17）:1580-1584.

[6]Govindan R,Page N,Morgensztern D,et al.Changing epidemiology of small-cell lung cancer in the United States over the last 30 years:analysis of the surveillance,epidemiologic,and end results database.Journal of Clinical Oncology，2012，20：631-632.

[7]杜艷萍,江興堂,尹小文,等.表皮生長因子受體基因突變在晚期非小細(xì)胞肺癌維持治療中的作用[J].中國新藥雜志,2010,17(22):1580-1584.

[8]劉紅梅.表皮生長因子受體基因突變與晚期非小細(xì)胞肺癌的分子靶向治療[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(11):2273-2275.

Study on the Clinical Value of Epidermal Growth Factor Receptor Mutations in the Targeted Therapy for Advanced Non-small Cell Lung Cancer

XIAO Lin1LI Daiqiang1ZHAO Shuai2
1.Department of Pathology,The Second Xiangya Hospital,Changsha,Hunan Province,410011,China;
2.Department of Pathology,The Third Hospital of Changsha,Changsha,Hunan Province,410015,China

ObjectiveTo discuss the feasibility of targeted therapy represented by epidermal growth factor receptor(EGFR)tyrosine kinase inhibitor getfinibi for advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).Methods32 cases with advanced NSCLC failed the previous platinum based chemotherapy from March 2011 to October 2013 were selected and treated by getfinibi 250 mg/d. RECIST criteria were used to evaluate the curative effect.And the EGFR tyrosine kinase domain gene mutation in the tumor tissue of the patients with getfinibi treatment was detected.ResultsOf the 32 cases of specimens,there were 12 cases were detected with gene mutations,including 4 cases with chromosome 19 deletion mutation,8 cases with missense mutation of chromosome 21,all were L858R mutations(T＞G).After treatment with getfinibi,the objective response rate of the EGFR gene mutation group reached 58.33%,the disease control rate reached 100.0%,higher than 10.00%,20.00%of the non-EGFR gene mutation group,respectively(P＜0.05).ConclusionThe curative effect of getfinibi targeted therapy on advanced NSCLC is significant.And patients treated by getfinibi with a good effect have high incidence of EGFR gene mutation.Therefore,the EGFR tyrosine kinase domain gene mutation detection can be used as a predictive index for evaluating the curative effect of getfinibi.

Epidermal growth factor receptor mutation;Advanced non-small cell lung cancer;Targeted therapy

R734.2

A

1674-0742（2014）08（b）－0050-03

2014-05-04）

肖琳（1979.9-），女，本科，主治醫(yī)師，研究方向：活體組織檢查和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的診斷。