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（廣州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東廣州 510440）

廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)野鳥(niǎo)和蚊子分布及其西尼羅病毒感染情況調(diào)查

張海冰，段曉冬，沈 丹，鄭麗蘭，楊穗娟，譚 諾，張海明

（廣州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東廣州510440）

[目的] 了解廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)野鳥(niǎo)和蚊子的種類、數(shù)量和分布等情況及其西尼羅病毒感染的情況。[方法] 對(duì)鳥(niǎo)類在沿途設(shè)網(wǎng)抓捕取樣；蚊蟲(chóng)采用紫外燈誘捕和網(wǎng)捕進(jìn)行樣品采集，隨后利用熒光定量RT-PCR方法對(duì)西尼羅病毒進(jìn)行檢測(cè)。[結(jié)果] 2012—2013年該地區(qū)共捕獲鳥(niǎo)類110種381只，隸屬于12目37科76屬；共捕獲蚊蟲(chóng)5種，共計(jì)3048只，其中淡色庫(kù)蚊占50.66%、三帶喙庫(kù)蚊占32.12%、褐尾庫(kù)蚊占12.99%、中華按蚊占3.61%和白紋伊蚊0.62%；對(duì)381份鳥(niǎo)泄殖腔棉拭子和3048份蚊子樣品進(jìn)行了西尼羅病毒的檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。[結(jié)論] 雖然本次調(diào)查未發(fā)現(xiàn)鳥(niǎo)類及蚊子感染西尼羅病毒，但本地區(qū)存在西尼羅病毒引入以及在本地區(qū)傳播的條件，存在西尼羅病毒病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。因此，為繼續(xù)維持廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)的無(wú)疫狀態(tài)，有必要對(duì)媒介鳥(niǎo)類及蚊蟲(chóng)開(kāi)展長(zhǎng)期的調(diào)查和監(jiān)測(cè)。

無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)；西尼羅病毒；野鳥(niǎo)；蚊子；調(diào)查

西尼羅病毒病是由西尼羅病毒（WNV）引起的一種人畜共患的自然疫源性疾病[1]，可以感染鳥(niǎo)、蚊子和馬、人等哺乳動(dòng)物。其中，鳥(niǎo)是WNV的主要攜帶者，而蚊蟲(chóng)則是其主要的傳播媒介[2]。該病于1937年首次被確認(rèn)以來(lái)，近幾年在非洲、南歐、亞洲等地區(qū)以及俄羅斯、中東、印度和澳大利亞等地區(qū)普遍流行。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，在1999—2008年的10年中，美國(guó)共有28961人感染W(wǎng)NV，其中1131人死亡，而到了2012和2013年，2年時(shí)間里就導(dǎo)致了15246人感染和507人死亡，波及全美48個(gè)州[3]。由此可見(jiàn)，西尼羅河病毒病日趨嚴(yán)重，引起了各國(guó)的極大關(guān)注，世界衛(wèi)生組織已將其列為當(dāng)前全球的重大流行病之一。雖然我國(guó)到目前為止尚未有人和動(dòng)物感染該病毒的報(bào)道[4]，但隨著經(jīng)濟(jì)全球化等因素的影響，國(guó)際人員、物資等流動(dòng)加快，感染者、帶毒畜禽和媒介蚊蟲(chóng)傳入我國(guó)的可能性日益增加。

廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)（以下簡(jiǎn)稱從化無(wú)疫區(qū)）所在的廣東省地處熱帶亞熱帶，氣溫適宜、雨量充沛，有豐富的蚊蟲(chóng)種類和野生鳥(niǎo)類資源，非常適合WNV的流行。而從化無(wú)疫區(qū)是我國(guó)內(nèi)地首個(gè)同時(shí)獲得國(guó)家和國(guó)際認(rèn)可的動(dòng)物疫病無(wú)疫區(qū)[5]，保持西尼羅病毒病的無(wú)疫狀態(tài)是從化無(wú)疫區(qū)維護(hù)工作的重中之重。因此，為了解廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)野鳥(niǎo)和蚊子分布及其西尼羅病毒感染情況，我們對(duì)從化無(wú)疫區(qū)的核心區(qū)、監(jiān)控區(qū)和緩沖區(qū)進(jìn)行了為期一年的監(jiān)測(cè)。

1 材料與方法

1.1 試劑

西尼羅病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自廣州市維伯鑫生物科技有限公司，西尼羅病毒陽(yáng)性對(duì)照購(gòu)自美國(guó)NVSL，RNA提取試劑購(gòu)自美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.2 調(diào)查范圍

根據(jù)《廣東省從化馬屬動(dòng)物疫病區(qū)域化管理辦法》的規(guī)定，對(duì)核心區(qū)和監(jiān)控區(qū)（從化市）及緩沖區(qū)（白云區(qū)、花都區(qū)、蘿崗區(qū)、清城區(qū)、增城市、龍門縣、佛岡縣、新豐縣）進(jìn)行調(diào)查。

1.2.1 野鳥(niǎo)調(diào)查采樣點(diǎn)。共選擇14個(gè)采樣點(diǎn)，主要分布于林緣或林間空地附近，并兼顧有灌木叢或小喬木等適合野鳥(niǎo)棲息的環(huán)境。具體野鳥(niǎo)采樣點(diǎn)分布和棲息環(huán)境信息見(jiàn)圖1和表1。

圖 1 野鳥(niǎo)采樣點(diǎn)示意圖

1.2.2 蚊子調(diào)查采樣點(diǎn)。根據(jù)蟲(chóng)媒生物的活動(dòng)特性以及環(huán)境受人為干擾的程度、地形、植被類型豐富度等指標(biāo)，在核心區(qū)和監(jiān)控區(qū)共選擇12個(gè)采樣點(diǎn)（核心區(qū)和監(jiān)控區(qū)分別有7個(gè)和5個(gè)），具體的蚊子采樣點(diǎn)分布見(jiàn)圖2。

圖 2 蚊子采樣點(diǎn)示意圖

1.3 采樣時(shí)間的選擇

對(duì)各個(gè)采樣點(diǎn)分別在4個(gè)季節(jié)進(jìn)行調(diào)查采樣（見(jiàn)表1）。

表 1 調(diào)查日期信息表

1.4 采集方法

1.4.1 鳥(niǎo)類采集方法。通過(guò)線路法和網(wǎng)捕法對(duì)鳥(niǎo)類種類、數(shù)量與分布開(kāi)展調(diào)查，采樣時(shí)間通常選擇在日出后3小時(shí)左右開(kāi)始線路調(diào)查。

1.4.2 蚊蟲(chóng)采集方法。采用紫外燈誘蚊法和網(wǎng)捕法進(jìn)行蚊子的采集，并保存于液氮。

1.5 核酸提取

蚊子樣品用無(wú)菌生理鹽水洗3遍，放入2mL研磨管中，加入1.0mL研磨液，放入羅氏MagNALyser全自動(dòng)組織勻漿儀進(jìn)行研磨取上清液進(jìn)行核酸提取。鳥(niǎo)泄殖腔棉拭子震蕩2分鐘后直接取液體進(jìn)行核酸提取。按照美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司RNA/DNA磁珠提純?cè)噭┖姓f(shuō)明書(shū)逐步進(jìn)行，提取的核酸保存于-80℃。

1.6 西尼羅病毒熒光RT-PCR檢測(cè)

按照廣州市維伯鑫生物科技有限公司西尼羅河病毒核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，對(duì)鳥(niǎo)泄殖腔棉拭子和蚊子進(jìn)行西尼羅病毒熒光RT-PCR檢測(cè)，同時(shí)在每次檢測(cè)時(shí)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照。

2 結(jié)果

2.1 野鳥(niǎo)季節(jié)性消長(zhǎng)規(guī)律

本次調(diào)查鳥(niǎo)類共設(shè)網(wǎng)137張次，有效調(diào)查時(shí)間6108h。各季節(jié)中各調(diào)查位點(diǎn)的采樣數(shù)量見(jiàn)表2。其中，冬季采集的鳥(niǎo)類樣品物種數(shù)量最多，達(dá)28種；秋季采集的鳥(niǎo)類樣品個(gè)體數(shù)量最多，有133只（見(jiàn)圖3）。

表 2 各季節(jié)各位點(diǎn)野鳥(niǎo)采樣地點(diǎn)和季節(jié)分布

圖 3 不同季節(jié)鳥(niǎo)類樣品物種數(shù)及個(gè)體數(shù)分布

2.2 野鳥(niǎo)的種類和數(shù)量

共調(diào)查及記錄鳥(niǎo)類110種，隸屬于12目37科76屬，共381只。對(duì)各目鳥(niǎo)類進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示調(diào)查區(qū)內(nèi)雀形目物種占據(jù)明顯優(yōu)勢(shì)，占總物種數(shù)的73.7%；其次為鵑形目和是佛法僧目（見(jiàn)圖4）。

圖4調(diào)查的野鳥(niǎo)各目物種比例

統(tǒng)計(jì)各科鳥(niǎo)類物種的比例，結(jié)果顯示調(diào)查區(qū)內(nèi)鶇科物種占明顯優(yōu)勢(shì)，共有14種，占總物種數(shù)的12.8%；其次為鵯科和畫(huà)眉科，分別記錄了9種，分別占總物種數(shù)的8.3%；第三的是杜鵑科，記錄了6種，占總物種數(shù)的5.6%。另外，共有12個(gè)科僅記錄到1種鳥(niǎo)，占總科數(shù)的32.4%。具體見(jiàn)表3。

2.3 野鳥(niǎo)各居留型比例

對(duì)調(diào)查記錄的110種鳥(niǎo)類進(jìn)行居留型統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示調(diào)查區(qū)內(nèi)野鳥(niǎo)以留鳥(niǎo)為主，共記錄了74種，占總物種數(shù)的67.3%；其次是冬候鳥(niǎo)，記錄了21種，占總物種數(shù)的19.1%，具體如圖5所示。此外，還分別統(tǒng)計(jì)了四個(gè)季節(jié)中，調(diào)查記錄的各居留型鳥(niǎo)類物種占本季度調(diào)查記錄總物種數(shù)的比例和每個(gè)季節(jié)的平均記錄物種數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4個(gè)季節(jié)記錄的物種以留鳥(niǎo)居多，群落中冬候鳥(niǎo)會(huì)隨季節(jié)的變化，在春秋兩季遷徙和過(guò)境，使本地區(qū)鳥(niǎo)類數(shù)量發(fā)生變化，春末夏初和秋末冬初形成兩個(gè)季節(jié)性高峰；另外，4個(gè)季節(jié)平均野鳥(niǎo)物種數(shù)都維持在一個(gè)較為平穩(wěn)的數(shù)值，在冬季未見(jiàn)有大量鳥(niǎo)類遷飛進(jìn)入研究區(qū)內(nèi)。具體見(jiàn)圖6和圖7。

2.4 蚊蟲(chóng)種類構(gòu)成

表 3 2012—2013年度廣東從化無(wú)疫區(qū)調(diào)查的野鳥(niǎo)各科物種數(shù)量與比例

圖 5 2012—2013年度廣東從化無(wú)疫區(qū)采樣鳥(niǎo)類居留型比例圖

圖 6 2012—2013年度廣東從化無(wú)疫區(qū)不同季度野鳥(niǎo)居留型比分布

圖 7 2012-2013年度廣東從化無(wú)疫區(qū)各季節(jié)野鳥(niǎo)平均記錄物種數(shù)分布

本次調(diào)查共捕獲蚊子5種，共計(jì)3048只，其中淡色庫(kù)蚊和三帶喙庫(kù)蚊為優(yōu)勢(shì)種群，分別占總數(shù)的50.66%和32.12%；其次為褐尾庫(kù)蚊、中華按蚊和白紋伊蚊，分別為12.99%、3.61%和0.62%，各調(diào)查點(diǎn)蚊子捕捉數(shù)量和種類見(jiàn)表4。

2.5 蚊子密度消長(zhǎng)情況

在2012—2013年度各季節(jié)所捕捉到的蚊子的數(shù)量進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)夏季和秋季最多，冬季最少，春季居中，具體見(jiàn)圖8。

圖8 蚊子的季節(jié)動(dòng)態(tài)變化

2.6 WNV檢測(cè)結(jié)果

2012年7—8月、10—11月和2013年1—2月、4—5月，分別對(duì)從化市及白云區(qū)、花都區(qū)、蘿崗區(qū)、清城區(qū)、增城市、龍門縣、佛岡縣和新豐縣的野鳥(niǎo)和蚊子進(jìn)行了西尼羅病毒的檢測(cè)，共檢測(cè)野鳥(niǎo)樣品381份，蚊子樣品3048只，結(jié)果均為陰性。

3 討論

鳥(niǎo)是WNV的自然宿主和擴(kuò)散宿主[6]，目前已在332種鳥(niǎo)體內(nèi)檢測(cè)到西尼羅病毒，其中又以雀形目鳥(niǎo)類為主[7]。而且目前的研究認(rèn)為[8]，一個(gè)地區(qū)鳥(niǎo)群的總數(shù)、密度和種類的多樣性，可能與本地區(qū)人群暴發(fā)西尼羅病毒病有密切的聯(lián)系。本次對(duì)廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)內(nèi)野鳥(niǎo)品種和數(shù)量的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)存在體內(nèi)檢測(cè)到西尼羅病毒的雀形目、雞形目等鳥(niǎo)類[9]，并且雀形目物種在調(diào)查的鳥(niǎo)類物種中占據(jù)明顯優(yōu)勢(shì)，占總物種數(shù)的73.7%，而且本地區(qū)鳥(niǎo)類的種類和數(shù)量均較多，提示一旦西尼羅病毒隨候鳥(niǎo)、寵物鳥(niǎo)、蚊蟲(chóng)等進(jìn)入從化無(wú)疫區(qū)，可能會(huì)在本地區(qū)持續(xù)存在和傳播。另外，一直以來(lái)普遍認(rèn)為，廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫區(qū)所在的廣東省位于我國(guó)三大候鳥(niǎo)遷徙線路之一的線路上，南來(lái)北往的候鳥(niǎo)都會(huì)在該區(qū)域停歇，這也增加了疫源候鳥(niǎo)將WNV等外來(lái)病病原傳入從化無(wú)疫區(qū)的可能性。但我們的調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)野鳥(niǎo)在入冬前飛停本地區(qū)歇息，導(dǎo)致物種數(shù)量有一定程度的上漲 ；進(jìn)入冬季后，歇息的鳥(niǎo)類已飛往越冬場(chǎng)地，而直接導(dǎo)致物種數(shù)量回落；而到春季時(shí)，冬候鳥(niǎo)從越冬場(chǎng)地回遷，又在本地區(qū)停歇，造成物種數(shù)量的升高。這說(shuō)明從化無(wú)疫區(qū)雖然位于冬候鳥(niǎo)鳥(niǎo)類遷飛路線上，但更多是一個(gè)冬候鳥(niǎo)遷飛南方的短暫停歇點(diǎn)，并不是冬候鳥(niǎo)的主要越冬場(chǎng)所，調(diào)查發(fā)現(xiàn)候鳥(niǎo)在本地區(qū)鳥(niǎo)類的物種構(gòu)成中比例相對(duì)較小。從化無(wú)疫區(qū)范圍內(nèi)的鳥(niǎo)類密度呈基本維持平穩(wěn)的狀態(tài)，并沒(méi)有因?yàn)槎竞蝤B(niǎo)的遷飛使得無(wú)疫區(qū)內(nèi)鳥(niǎo)類種群密度發(fā)生突增。從化無(wú)疫區(qū)內(nèi)鳥(niǎo)類也未發(fā)現(xiàn)有明顯的集群現(xiàn)象。因此，再結(jié)合本次調(diào)查采樣的野鳥(niǎo)樣品西尼羅病毒檢測(cè)均為陰性的結(jié)果，我們認(rèn)為從化無(wú)疫區(qū)雖然存在西尼羅病毒隨候鳥(niǎo)傳播進(jìn)入的風(fēng)險(xiǎn)，但風(fēng)險(xiǎn)較低，與彭聰?shù)萚10]的研究結(jié)論基本一致。

蚊蟲(chóng)被認(rèn)為是西尼羅病毒的主要傳播媒介，其中庫(kù)蚊特別是尖音庫(kù)蚊復(fù)合組成員被認(rèn)為是最重要的媒介[2]。本次從化無(wú)疫區(qū)蚊蟲(chóng)調(diào)查結(jié)果顯示，庫(kù)蚊所占比例達(dá)到95%以上，是絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)種類，其中作為尖音庫(kù)蚊復(fù)合組成員之一的淡色庫(kù)蚊在所有調(diào)查的蚊蟲(chóng)數(shù)量中最多，達(dá)到了50.66%，其次為三帶喙庫(kù)蚊（32.12%），這些蚊種均屬于可能在我國(guó)攜帶和傳播WNV的蚊蟲(chóng)[11]。根據(jù)蚊子的生活習(xí)性，一般在每年4月開(kāi)始出現(xiàn)，至8月中下旬達(dá)到活動(dòng)高峰，秋天氣候變冷溫度降到10℃以下時(shí)，蚊子就會(huì)停止繁殖，并出現(xiàn)大量死亡，有極少的蚊子會(huì)存活，而我們的調(diào)查結(jié)果也基本符合以上所描述的蚊子消長(zhǎng)規(guī)律，在夏季達(dá)到了高峰，冬季蚊子數(shù)量極少。雖然目前的研究認(rèn)為，鳥(niǎo)類遷徙是蚊子其感染人和哺乳動(dòng)物的主要傳播媒介[12]，但也有例外，比如美國(guó)WNV的出現(xiàn)就是由于貨物攜帶已感染病毒的蚊蟲(chóng)及感染病毒的旅行者從遙遠(yuǎn)的西亞穿過(guò)大西洋進(jìn)入美國(guó)造成的[13]。因此，從化無(wú)疫區(qū)所在的廣東省作為我國(guó)重要的進(jìn)出口貿(mào)易大省，每年有數(shù)量巨大的物品從西尼羅病毒病疫區(qū)進(jìn)入本地區(qū)，該種傳入的風(fēng)險(xiǎn)也不容忽視。因此，雖然本地區(qū)存在可能傳播WNV的蚊子，而且也可能通過(guò)貿(mào)易等途徑引入病毒，但結(jié)合目前我國(guó)還未發(fā)現(xiàn)西尼羅病毒的情況[12]以及本次調(diào)查對(duì)蚊子進(jìn)行西尼羅病毒檢測(cè)均為陰性的結(jié)果，我們認(rèn)為從化無(wú)疫區(qū)雖然存在西尼羅病毒引入和傳播的風(fēng)險(xiǎn)，但風(fēng)險(xiǎn)較低，與前幾年的研究結(jié)論一致[10，14]。

綜上所述，通過(guò)本次調(diào)查，進(jìn)一步弄清了廣東從化無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)內(nèi)野鳥(niǎo)和蚊子的種類、數(shù)量、分布以及季節(jié)變化等情況，對(duì)其感染西尼羅病毒的情況進(jìn)行了病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果無(wú)論是鳥(niǎo)類還是蚊子，均未感染西尼羅病毒，結(jié)果與國(guó)內(nèi)其他研究[14，15]一致，進(jìn)一步證明了我國(guó)目前還沒(méi)有西尼羅病毒。但是，調(diào)查也發(fā)現(xiàn)本地區(qū)存在一定數(shù)量和種類的可以傳播西尼羅病毒的鳥(niǎo)和蚊子，鑒于目前國(guó)際該病流行范圍越來(lái)越大和本地區(qū)的國(guó)際貿(mào)易、人員交流日益頻繁，本地區(qū)存在一定的輸入該病的風(fēng)險(xiǎn)，為繼續(xù)保持從化無(wú)疫區(qū)的無(wú)疫狀態(tài)，必須繼續(xù)開(kāi)展本地區(qū)的野生動(dòng)物及蟲(chóng)媒的監(jiān)測(cè)和調(diào)查，并進(jìn)一步加強(qiáng)口岸的監(jiān)管與監(jiān)測(cè)，以防該病通過(guò)口岸傳入。

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Investigation on Distribution of Wild Birds and Mosquitoes and West Nile Virus Infection Status in the Specif c Equine Disease-free Zone of Conghua，Guangdong Province

Zhang Haibing，Duan Xiaodong，Shen Dan，Zheng Lilan，Yang Suijuan，Tan Nuo，Zhang Haiming

（Guangzhou Animal Disease prevention and Control Center，Guangdong，Guangzhou，510440）

ObjectiveTo investigate the species，number and distribution of wild birds and mosquitoes and West Nile virus （WNV）the specific equine disease-free zone of Conghua，Guangdong.MethodThe birds were captured on the migration routes with nets，and mosquitoes by Ultraviolet light trapping and nets.The samples were detected with real-time RT-PCR assay for West Nile virus.ResultAll the 381 birds of 110 species and 3048 mosquitoes of 5 species collected were negative for West Nile virus.ConclusionNo WNV-positive birds and mosquitoes were detected in the survey.There were amount of potential vectors of WNV found in the zone.To maintain the disease-free status of the specif c equine disease-free zone of Conghua，further work was needed to monitor the bird and mosquito activities for long time.

West Nile virus；wild bird；mosquito；investigation

R373.3

：A

：1005-944X（2014）11-0076-05

張海明