，，，，

（1.安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230061；2.哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江哈爾濱 150001）

2013年安徽省中小規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病群流行率及風(fēng)險(xiǎn)因素橫斷面研究

劉 華1，占松鶴1，王靖飛2，何長(zhǎng)生1，朱良強(qiáng)1

（1.安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230061；2.哈爾濱獸醫(yī)研究所，黑龍江哈爾濱 150001）

[目的]了解安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒（PRV）的感染情況。[方法] 2013年8月至11月，開展了中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病群流行率和風(fēng)險(xiǎn)因素的橫斷面研究。通過簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方法，選取了380個(gè)中等規(guī)模種豬場(chǎng)；用發(fā)現(xiàn)疫病的抽樣策略，在每個(gè)種豬場(chǎng)采集了5份母豬血清，使用IDEXX公司豬偽狂犬病病毒gE-ELISA試劑盒進(jìn)行了抗體檢測(cè)。同時(shí)開展了問卷調(diào)查，并對(duì)種豬場(chǎng)之間PR傳播潛在的29個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。[結(jié)果] 2013年安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病的群流行率為34.1%（95%置信區(qū)間29.3%～38.9%）；沒有滅鼠措施（OR=2.5，95%置信區(qū)間：1.4～3.7，P<0.001）、購(gòu)入種豬未經(jīng)檢測(cè)（OR=2.2，95%置信區(qū)間：1.1～4. 2，P=0.024）、未免疫含PR 6種以上豬病（OR=2.0，95%置信區(qū)間：1.2～3.1，P=0.004）是2013年安徽省中小規(guī)模種豬場(chǎng)感染PRV的風(fēng)險(xiǎn)因素。Logistic 回歸擬合度較好（P>0.05），ROC曲線下面積為0.68（95%置信區(qū)間：0.62-0.73）。[結(jié)論]安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)場(chǎng)間PR流行率較高，建議購(gòu)入種豬前需進(jìn)行檢測(cè)，免疫含PR等6種以上豬病疫苗并定期滅鼠。

豬偽狂犬?。恢械纫?guī)模種豬場(chǎng)；流行率；風(fēng)險(xiǎn)因素

偽狂犬?。╬seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的多種家畜和野生動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為主要癥狀的一種重要傳染病[1]。我國(guó)自1947年首先發(fā)現(xiàn)本病以來(lái)，相繼已有30多個(gè)省報(bào)道了PR的發(fā)病流行[2-5]。本病以豬的發(fā)病多見，成為重要的病毒貯存宿主和傳染源。妊娠母豬，部分由于胎兒在子宮內(nèi)感染死亡，出現(xiàn)流產(chǎn)或產(chǎn)出死胎[1]。PR對(duì)許多國(guó)家的畜牧業(yè)特別是養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，因此引起世界各國(guó)獸醫(yī)工作者的高度重視[6]。2012年，我國(guó)將PR列為優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病病種之一[7]。近年來(lái)，安徽省養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展迅速，但PR作為仔豬死亡、母豬繁殖障礙的主要原因之一，嚴(yán)重影響了我省養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。為了解安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)PR的感染情況，對(duì)安徽省380個(gè)中等規(guī)模種豬場(chǎng)開展PR群流行率及風(fēng)險(xiǎn)因素分析，為控制該病的場(chǎng)間傳播提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 目標(biāo)群與研究單元

將安徽省使用PRV gE基因缺失疫苗的種豬場(chǎng)作為研究的目標(biāo)群，研究單元是母豬存欄量在100至500頭的中等規(guī)模種豬場(chǎng)。

1.2 抽樣策略與樣本量計(jì)算

1.2.1 群體水平：用WinEpi軟件（http：//www. winepi.net/uk/index.htm），設(shè)預(yù)期場(chǎng)間流行率為50%，置信區(qū)間為95%，可接受誤差為5%，全省這類中等規(guī)模種豬場(chǎng)13000個(gè)，至少需要374個(gè)豬場(chǎng)。通過在線隨機(jī)數(shù)字發(fā)生器（http：//www. randomizer.org/），抽取了380個(gè)。

1.2.2 個(gè)體水平 ：用發(fā)現(xiàn)疫病的抽樣策略抽取個(gè)體，即在抽樣前，采樣人員通過查看生產(chǎn)記錄或詢問獸醫(yī)技術(shù)人員，選取近一個(gè)月內(nèi)有流產(chǎn)癥狀或其所生小豬有典型PR癥狀的母豬。使用WinEpi軟件，設(shè)群大小為500頭，置信水平95%，試驗(yàn)敏感性98%，特異性99%[8]，場(chǎng)內(nèi)預(yù)期流行率為45%，每個(gè)場(chǎng)抽5頭。

1.3 采樣檢測(cè)與問卷調(diào)查

問卷設(shè)計(jì)考慮到與PR場(chǎng)群間傳播的所有因素，包括外周環(huán)境、飼養(yǎng)管理、消毒、引種和補(bǔ)欄、繁殖和免疫等7方面共29個(gè)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素。省級(jí)動(dòng)物疫控中心召集被選豬場(chǎng)所在縣的縣級(jí)疫控中心相關(guān)技術(shù)人員開展采樣和問卷填寫培訓(xùn)?？h級(jí)疫控中心負(fù)責(zé)血清采集和現(xiàn)場(chǎng)問卷。省疫控中心負(fù)責(zé)樣品檢測(cè)和問卷信息錄入及數(shù)據(jù)分析。PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒為美國(guó)IDEXX 公司產(chǎn)品（批號(hào)：99-09836）。任何一個(gè)樣品檢測(cè)為陽(yáng)性，其所在場(chǎng)即定義為PR陽(yáng)性場(chǎng)。

1.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

1.4.1 流行率估計(jì)

群體水平表面流行率（HAP）為檢測(cè)陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)占抽樣總場(chǎng)數(shù)的百分比。群體水平真實(shí)流行率（HTP）結(jié)合群敏感性（HSe）、群特異性（HSp）計(jì)算，公式：

真實(shí)流行率的95%置信區(qū)間計(jì)算公式為：

其中N為群體水平抽樣數(shù)量，n為個(gè)體水平抽樣數(shù)量。

1.4.2 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

用Epi InfoTM7軟件進(jìn)行相關(guān)因素的單因素回歸分析；保留P<0.2的風(fēng)險(xiǎn)因素，用IBM SPSS 20統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，結(jié)合生物學(xué)知識(shí)剔除相關(guān)系數(shù)大于0.4的因素；用Epi InfoTM7對(duì)保留的風(fēng)險(xiǎn)因子進(jìn)行多因素logistic回歸分析，得到回歸模型；用IBM SPSS 20 做Hosmer-Lemeshow檢驗(yàn)和ROC曲線評(píng)估模型擬合優(yōu)度。

2 結(jié)果

2.1 群流行率

對(duì)1900份來(lái)自全省380個(gè)中小規(guī)模種豬場(chǎng)的母豬血清進(jìn)行g(shù)E抗體ELISA檢測(cè)（有流產(chǎn)史的為982頭），其中抗體陽(yáng)性331頭，分布于124個(gè)場(chǎng)，群表觀流行率為32.6%（124/380）。由公式2和3計(jì)算得HSe=86.1%，HSp=95.0%，由公式1和4計(jì)算得真實(shí)流行率為34.1%（95%置信區(qū)間29.3%～38.9%）。

2.2 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

2.2.1 單因素分析

對(duì)問卷中的29個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行單因素分析，結(jié)果見表1。

2.2.2 多因素logistic 回歸

篩選出單因素分析結(jié)果P<0.2的14個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素，帶入SPSS進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)合生物學(xué)有關(guān)知識(shí)，剔除“沒有規(guī)范免疫程序”這個(gè)與其他因素具有較強(qiáng)相關(guān)性的因素（相關(guān)系數(shù)>0.4）后，將剩下的13個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素帶入EPI INFO軟件中進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，用倒退法選擇變量。結(jié)果表明，沒有滅鼠措施（X1）、購(gòu)入種豬未經(jīng)檢測(cè)（X2）和未免疫含PR 6種以上豬?。╔3）是安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)之間傳播PR的風(fēng)險(xiǎn)因素，結(jié)果見表2。

模型的回歸方程如下：

Log （odds） =-1.61+0.86X1 +0.77X2+0.67X3

經(jīng)Hosmer-Lemeshow檢驗(yàn)，該模型擬合較好（P>0.05）。模型的ROC曲線（見圖1）下面積0.68（95%置信區(qū)間：0.62-0.73）。

3 討論

3.1 PR群流行率

偽狂犬病是目前危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一，從全國(guó)其他省份PR血清學(xué)調(diào)查情況看，規(guī)模豬場(chǎng)感染PRV相當(dāng)普遍，尤其是中小型豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染陽(yáng)性率較高[9-11]。安徽省是養(yǎng)豬大省，飼養(yǎng)量排全國(guó)第8位[12]。2012年生豬年出欄3085萬(wàn)頭，存欄1701萬(wàn)頭。PR給安徽省養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[12]。陳艷紅等[13]2004年12月至2005年11月對(duì)安徽等省的53個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行了PRV gE-ELISA檢測(cè)，群陽(yáng)性率為85%。吳指揮等[14]2008年對(duì)華東地區(qū)4省份進(jìn)行PRV野毒PCR檢測(cè)，結(jié)果安徽省豬場(chǎng)的陽(yáng)性率最高（44.11%）；詹松鶴[12]2009年對(duì)安徽省73個(gè)不同規(guī)模種豬場(chǎng)的PRV采集的病料進(jìn)行了PCR檢測(cè)，場(chǎng)陽(yáng)性率約為80%；對(duì)2010年99個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了PRV gE-ELISA檢測(cè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為67%，種豬群規(guī)模在200頭以下的豬場(chǎng)PRVgE抗體陽(yáng)性率較高。筆者認(rèn)為本次調(diào)查首次通過簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣的方法對(duì)安徽省PRV在中等規(guī)模種豬場(chǎng)的群流行率進(jìn)行了流行病學(xué)估計(jì)，方法更科學(xué)，結(jié)果更接近研究時(shí)段內(nèi)安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)的PR流行的真實(shí)情況。

表 1 2013年安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)場(chǎng)間傳播豬偽狂犬病風(fēng)險(xiǎn)因子單因素分析結(jié)果

表 2 2013年安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)場(chǎng)間傳播豬偽狂犬病多因素Logistic回歸分析結(jié)果

圖 1 回歸模型的ROC曲線

本次調(diào)查所得PR血清流行率還是比較高的，但較上述研究低，可能有以下幾方面原因：一是，本次調(diào)查抽取了380個(gè)豬場(chǎng)，抽樣數(shù)量較大，減少了隨機(jī)誤差，提高了結(jié)果的精確性；二是，檢測(cè)方法不同。本研究使用ELISA法檢測(cè)血清中的PRV野毒感染抗體，如母豬處于感染初期則可能不易被檢測(cè)出陽(yáng)性；三是，研究時(shí)段不同。

3.2 場(chǎng)間PR傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素

本研究通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示購(gòu)入種豬不經(jīng)檢測(cè)、未免疫含PR 6種以上豬病、沒有滅鼠措施是2013年8月至11月安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)PR場(chǎng)間傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素。Jorge C Rodriguez-Buenfl[15]、Anderson P L[16]、Morrison RB[17]等開展的相關(guān)研究結(jié)果也都顯示購(gòu)入種豬不經(jīng)檢測(cè)或檢疫隔離的豬場(chǎng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高。另有資料顯示，帶毒鼠是PR的重要傳染源[18]。筆者認(rèn)為由于帶毒鼠在豬場(chǎng)間的流動(dòng)，可能會(huì)通過帶毒鼠的飛沫、用被帶毒鼠啃食的或糞尿污染的飼料喂豬等方式造成PR場(chǎng)間的傳播，但需要進(jìn)一步研究證實(shí)。此外，國(guó)際上很多國(guó)家應(yīng)用PRgE基因缺失疫苗加撲殺相結(jié)合的方式進(jìn)行PR控制和凈化。免疫PR gE基因缺失疫苗是最初采取的主要措施[19-21]。此外，做好其他疫病的免疫如豬瘟、豬藍(lán)耳病、細(xì)小病毒病、圓環(huán)病毒病、氣喘病等，可以降低免疫抑制發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，增強(qiáng)抗感染的能力。筆者認(rèn)為PR感染和場(chǎng)間傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素眾多，而且各因素之間存在協(xié)同作用，并且不同時(shí)間、不同地域、不同的飼養(yǎng)模式豬場(chǎng)間傳播PR的風(fēng)險(xiǎn)因素可能都不盡相同。因此，應(yīng)因地制宜開展進(jìn)一步連續(xù)系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)和研究，才能提出針對(duì)性更強(qiáng)的防控措施。

3.3 偏倚控制及局限性

3.3.1 選擇性偏倚

根據(jù)安徽省2009年至2012年P(guān)R流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，PR在安徽省規(guī)?；i場(chǎng)中，特別是中等規(guī)模種豬場(chǎng)中感染較為普遍；此外，種豬作為疫病傳播的源頭，是控制偽狂犬病等垂直傳播疫病的突破口。這是在中等規(guī)模種豬場(chǎng)開展流行病學(xué)研究的原因。因此本研究將中等規(guī)模種豬場(chǎng)作為目標(biāo)群，符合安徽省PR防控工作實(shí)際。在個(gè)體選擇方面，主要是種母豬，未選擇后備母豬、種公豬、仔豬及育肥豬。從血清流行病學(xué)調(diào)查的角度而言，種豬的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果更為準(zhǔn)確。一是，因?yàn)樽胸i體內(nèi)的gE抗體可能由于PRV野毒感染所致，也可能是來(lái)源于母源抗體；120日齡及以下的豬通過檢測(cè) gE抗體陽(yáng)性與否來(lái)診斷PR，還應(yīng)考慮其抗體水平的高低，很容易造成主觀判定錯(cuò)誤[22]；二是，對(duì)于后備母豬、種公豬不易發(fā)現(xiàn)臨床癥狀，不宜用發(fā)現(xiàn)疫病的策略抽樣。三是，感染PRV的妊娠母豬有流產(chǎn)等臨床癥狀或所產(chǎn)仔豬有木乃伊胎、死胎臨床癥狀[23-24]，可便捷發(fā)現(xiàn)PR陽(yáng)性場(chǎng)，對(duì)場(chǎng)間流行率的評(píng)估更接近真實(shí)值。本研究由于使用的發(fā)現(xiàn)疫病的方法，無(wú)法估計(jì)個(gè)體流行率。在個(gè)體樣本計(jì)算時(shí)，為節(jié)約成本，將預(yù)期流行率設(shè)置偏高，導(dǎo)致群敏感性偏低。此外，未考慮地區(qū)差異、存欄量、母豬胎次等對(duì)風(fēng)險(xiǎn)因子分析結(jié)果的影響。

3.3.2 信息偏倚

第一，選擇敏感性和特異性都比較高的檢測(cè)方法，是控制信息偏倚的手段之一。使用PRV gE基因缺失苗的豬感染野毒后，會(huì)產(chǎn)生針對(duì)PRV所有蛋白的抗體[25]，PRV gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒可以有效區(qū)分免疫豬與野毒感染豬。雖然PCR法具有快速、特異的優(yōu)點(diǎn)，但需采集活體組織，操作性差，且價(jià)格昂貴，相比之下，ELISA試劑盒更適合基層大批量檢測(cè)PRV野毒感染情況[26]。陳偉杰[22]（2009）比較了 3種豬偽狂犬病g E抗體ELISA檢測(cè)試劑盒的效果，認(rèn)為IDEXX公司產(chǎn)品更適合用于了解豬群PR野毒感染程度。資料顯示，該產(chǎn)品的敏感性和特異性都較高，完全能滿足需要。第二，PR患病豬、隱性感染豬、帶毒鼠類的飛沫、呼吸道分泌物、糞尿、乳汁、精液及其尸體、內(nèi)臟、血液中均含有 PRV，可經(jīng)消化道、呼吸道、皮膚傷口、自然交配、宮內(nèi)感染及污染的環(huán)境等多種途徑傳播，也可通過人員或運(yùn)輸工具的流動(dòng)擴(kuò)散[12]。無(wú)計(jì)劃和盲目地從疫區(qū)引進(jìn)種豬，防病意識(shí)薄弱，消毒、滅源工作流于形式，免疫程序不健全，飼養(yǎng)管理粗放等是引起豬偽狂犬病野毒感染和擴(kuò)散的主要因素[27-28]。在設(shè)計(jì)問卷時(shí)，充分考慮了這些因素，并結(jié)合安徽省實(shí)際，幾經(jīng)研討修改。在填寫問卷之前，對(duì)調(diào)查人員進(jìn)行培訓(xùn)，以求得到最真實(shí)的信息。對(duì)信息缺少的或明顯不準(zhǔn)確的，通過電話回訪進(jìn)行補(bǔ)充。收集的問卷應(yīng)答率為99%，信息有效率95%以上。不足之處是由于縣級(jí)調(diào)查人員和豬場(chǎng)技術(shù)人員的水平參差不齊，可能對(duì)本病的了解、問卷的填寫、采血對(duì)象的選擇等方面存在一定的偏差。

4 結(jié)論

通過簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方法，對(duì)安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病野毒感染情況進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果證實(shí)2013年8月至11月期間安徽省中等規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病的群流行率較高，為34.1%（95%置信區(qū)間29.3%～38.9%）。綜合問卷調(diào)查和風(fēng)險(xiǎn)因素分析結(jié)果，建議購(gòu)入種豬前需進(jìn)行檢測(cè)，免疫含PR等6種以上豬病疫苗并定期滅鼠。

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A Cross-sectional Study of Prevalence and Risk Factors of Pseudorabies Virus in middle-scale Pig Farms in Anhui Province 2013

Liu Hua1，Zhan Songhe1，Wang Jingfei2，He Changshen1，Zhu Liangqiang1

（1.Anhui Center for Animal Disease Prevention and Control，NO.3355 Dongtinghu Road，Hefei，Anhui，230061；
2. Harbin Veterinary Research Institution，NO.427 Maduan Road，Harbin，Heilongjiang，150001）

To get a better understanding of the infection status of pseudorabies virus （PRV） in middle-scale pig farms in Anhui province，a cross-sectional study was conducted from August to November 2013 to estimate the prevalence and identify risk factors of PRV infection in middle-scale pig farms in Anhui province. 380 farms were selected randomly in the study. Sample size was determined using a risk-based sampling strategy for the detection of virus，and all the samples were tested using gE-ELISA kits for antibodies to PRV gE protein. Questionnaires were f lled out during the process of sampling for the purpose of risk factor identif cation using multiple regression analysis. The results showed that farm prevalence of PRV was 34.1%（95%CI:29.3%～38.9%）in middle-scale pig farms in Anhui province. Three risk factors （no mouse-proof measure （OR=2.5，95%CI: 1.4～3.7，P<0.001），no PRV test in introduction of pigs （OR=2.2，95%CI: 1.1～4.2，P=0.024） and no vaccinations against the six major pig diseases in farm （OR=2.0，95%CI: 1.2～3.1，P=0.004）），were identified by multiple regression analysis. The ROC curve （0.68，95% CI: 0.62～0.73） indicated that the study had a relative high capcity for predicting the true positive value. It was conclued that the seroprevalence of PRV in middle-scale pig farms was high and more specif c control measures should be taken in the future，such as enhancing quarantine for PRV during the introduction of breeding pigs，optimizing the vaccinaiton protocols against the six major pig diseases and installing mouse-proof facilities on the farm.

Pseudorabies；middle-scale pig farm；Prevalence；Risk factor；Anhui

S858.28

：A

：1005-944X（2014）11-0016-06

朱良強(qiáng)