汪云偉 鐘 戀 焦小珂 蘭 杰 艾 莉▲

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都 611137；2.四川新中方醫(yī)藥科技股份有限公司，四川廣元 628000；3.四川廣元蓉成制藥有限公司，四川廣元 628000

益母草為唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的新鮮或干燥地上部分，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其主要功效為活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，益母草還具有治療前列腺增生[1]以及美容的功效[2]。目前，以益母草為原料的現(xiàn)代制劑主要有注射液、片劑、顆粒劑、合劑、膠囊、軟膠囊、膏劑以及滴丸等多種劑型，主要用于婦科疾病。

益母草的化學(xué)成分主要有生物堿類、黃酮類、脂肪酸類以及揮發(fā)油類等，其中的生物堿是目前研究最為透徹的指標(biāo)性成分，2010年版《中國藥典》對其藥材及其制劑的鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿進行了測定并規(guī)定了限度?，F(xiàn)將益母草及其制劑的質(zhì)量控制研究概況綜述如下：

1 益母草藥材及其制劑的質(zhì)量控制研究

益母草的應(yīng)用非常廣泛，以益母草為主藥的制劑也很多，如復(fù)方益母草合劑、抗宮炎片、坤寧顆粒、益母草注射劑等，在質(zhì)量控制方面多選用益母草或益母草里的指標(biāo)性成分作為其主藥的質(zhì)量控制標(biāo)準之一?，F(xiàn)有的技術(shù)手段主要包括薄層色譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳、指紋圖譜等。

1.1 薄層色譜法

益母草的鑒別多以其指標(biāo)成分鹽酸水蘇堿為主，也有以阿魏酸為鑒別成分的，都采用益母草對照藥材作為對照標(biāo)準。因為鹽酸水蘇堿易溶于醇和水，所以大多采取醇水提取。陳士翠等[3]對活血養(yǎng)陰顆粒質(zhì)量標(biāo)準研究，采用薄層色譜對葛根與益母草進行定性鑒別，藥材用乙醇提取并用1%的鹽酸甲醇定容，與鹽酸水蘇堿對照品溶液點于同一硅膠 G 板上，以氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下（365 nm）檢視。金鳳珠等[4]在復(fù)方益母草合劑的質(zhì)量標(biāo)準研究中，對益母草、當(dāng)歸以及川芎進行薄層色譜鑒別，作為該制劑的質(zhì)量控制手段。益母草的薄層鑒別為水提醇沉液與對照藥材溶液以及陰性對照液同點于一硅膠 G 板上，以苯-氯仿-冰醋酸（6∶5∶1）為展開劑，置紫外光燈下（365 nm）檢視。女金丸[5]由當(dāng)歸、白芍、肉桂、益母草、牡丹皮、延胡索、黃芩、陳皮等二十三味中藥制成，益母草的鑒別為其水提液經(jīng)過濾、過交換樹脂以及洗脫等過程制得的甲醇溶液與鹽酸水蘇堿的甲醇溶液點于同一以羧甲基纖維素鈉制成的硅膠G板上，以正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯（8∶3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，并噴以稀碘化必鉀，日光下檢視。羅毅等[6]用益母草提取液與阿魏酸對照品溶液點于同一硅膠 G板上，以苯∶冰醋酸∶甲醇=30∶1∶3為展開劑展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。另外，以苯∶甲酸乙酯∶甲酸=6∶3.5∶0.5；三氯甲烷∶甲醇∶冰醋酸=9∶1∶0.1； 正己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=8∶2∶0.5 為展開劑也可以得到與以上相同的結(jié)果。

薄層色譜法多作為定性鑒別用，也有的文獻采用薄層掃描法定量。如2005年版 《中國藥典》采用薄層掃描法（TLCS）測定益母草中鹽酸水蘇堿的含量。產(chǎn)婦定膠囊主要由益母草、當(dāng)歸、川芎、甘草、紅花等中藥組成，傅勇等[7]以君藥益母草中的鹽酸水蘇堿為指標(biāo)成分，采用薄層掃描法對其進行定性鑒別以及含量測定，從而控制其質(zhì)量。婦月康膠囊是由當(dāng)歸、川芎、甘草、益母草、紅花等8味中藥組成，具有活血、祛瘀、止痛的作用，裴香萍等[8]以鹽酸水蘇堿為指標(biāo)，建立薄層掃描法，并建立了方法學(xué)考察，測定結(jié)果穩(wěn)定。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法以其分離度好、靈敏度高、分析速度快等特點被廣泛用于中藥的含量測定中。陳碧蓮等[9]采用親水作用色譜-蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用測定益母草中鹽酸水蘇堿含量，方法為 HILIC 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-0.2%冰醋酸溶液（80∶20）為流動相；Alltech 2000 蒸發(fā)光散射檢測器：漂移管溫度 80℃，氣體流速 2.0 L/min；流速0.5 L/min。該方法可以替代薄層掃描法用于鹽酸水蘇堿的含量測定。張玉萌等[10]采用高效液相色譜法對益母草飲片中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿的含量進行測定，色譜柱：SCX 強陽離子柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.5 mol磷酸二氫鉀-三乙胺（1000∶1.5）（磷酸調(diào) pH 值 2.25～2.3）檢測波長：192 nm；流速 1.0 mL/min；柱溫：25℃。該方法可以用于益母草飲片的質(zhì)量控制。彭麗麗等[11]對益母草滴丸中水蘇堿進行了含量測定，方法為Waters Spherisorb SCX陽離子交換樹脂柱（416 mm×250 mm，5 μm ）；流動相：15 mmol/L磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱溫：室溫；檢測波長：192 nm。此方法簡便，可以用于益母草滴丸的質(zhì)量控制。李政海等[12]采用反相高效液相色譜法，以Ultimate Column XB-NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，乙腈-水（90∶10）為流動相，檢測波長為 192 nm，流速為1.0 mL/min，建立了益母草顆粒（無蔗糖型）中鹽酸水蘇堿的含量測定方法。復(fù)方益母草膠囊是由益母草、熟地黃、當(dāng)歸3種中藥制成，具有調(diào)經(jīng)活血、祛瘀生新的功效。鐘穎[13]采用RP-HPLC-ELSD法同時測定復(fù)方益母草膠囊中阿魏酸、鹽酸水蘇堿、梓醇、麥角甾苷的含量，豐富了復(fù)方益母草膠囊的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1.3 毛細管電泳法

毛細管電泳在藥物分析中的應(yīng)用越來越多，在益母草的質(zhì)量控制中也有應(yīng)用。羅毅等[14]采用HPCE法測定了益母草總堿中的鹽酸水蘇堿，水蘇堿在0.164～1.97 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為96.52%，該方法簡便、快速、準確，可作為益母草總堿提取物定量控制的方法。徐兩軍[15]采用毛細管電泳-紫外檢測法測定了益母草中的4種黃酮類化合物（山奈酚、蘆丁、金絲桃苷以及槲皮素），山奈酚、蘆丁、金絲桃苷和槲皮素的檢測限分別為0.07、0.08、0.23和0.44 μg/mL，該方法可以用于益母草黃酮類化合物的測定。吳婷等[16]采用毛細管電泳-電化學(xué)法（CE-ED）測定了益母草及其沖劑中的黃酮類化合物，根皮苷、橙皮素、蘆丁、山奈酚、洋芹素、槲皮素在 5.00×10-7～1.00×10-4g/mL范圍內(nèi)均與其相應(yīng)的峰電流呈線性關(guān)系，其檢出限（S/N=3） 分別為 4.68×10-7、2.03×10-7、4.68×10-7、2.68×10-7、4.81×10-7、3.61×10-7g/mL，該方法可以用于實際樣品的分析。

1.4 指紋圖譜

指紋圖譜已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效的手段[17]。朱海云等[18]采用“H2SO4-KBrO3-Mn-SO4-丙酮”振蕩器，添加一定量的益母草，得到其振蕩指紋圖譜，同時研究了振蕩體系中丙酮、Mn2+、H+和 BrO3的濃度變化對振蕩波形的影響，并分析了振蕩周期、振幅和振蕩壽命隨底物益母草用量的變化規(guī)律，以期為益母草的臨床用藥提供基礎(chǔ)。益母草制劑的指紋圖譜研究較其藥材廣泛，如賀亞玲等[19]應(yīng)用反相離子對色譜法對16批益母草注射劑進行了指紋圖譜研究，采用Aichrom Bond-AQ-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱，流動相為 0.1 mol/L的磷酸二氫鈉溶液，流速為1.0 mL/min，檢測波長為242 nm，共確定了9個共有峰，一定程度上說明了益母草注射液指紋圖譜的專屬性以及特征性。苗文娟等[20]以水蘇堿峰為參照物峰，采用毛細管區(qū)帶電泳法建立益母草注射液指紋圖譜，標(biāo)示出益母草注射液中12個主要共有峰，該法具有良好的重現(xiàn)性及分離度，可為益母草注射液的質(zhì)量提供依據(jù)。

近年來，DNA指紋圖譜由于其具有高度的個體特異性而被廣泛應(yīng)用于中藥的鑒別中。中藥成分復(fù)雜，不同植物來源的同一種中藥，其有效成分的含量也有很大差異。如益母草屬植物在我國有12個種，2個變種，由于功效相似，常被混用。因此，從分子水平上對益母草藥材進行鑒別，保證藥材質(zhì)量，是很有必要的。余琪等[21]采用擴增片段長度多態(tài)性（AFLP）標(biāo)記，在DNA水平上對益母草種質(zhì)資源進行遺傳多樣性研究，構(gòu)建了益母草AFLP指紋圖譜，為益母草種質(zhì)資源的分析、評價以及品種選育提供了理論依據(jù)。張國梅等[22]用RAPD法對幾種來源于益母草屬植物的生藥進行鑒別，采用CTAB法提取材料基因組DNA，選取50種隨機引物，進行聚合酶鏈式反應(yīng)，所得結(jié)果比較穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好，該方法可以用于益母草屬植物的鑒別。陳麗雅等[23]用ISSR分子標(biāo)記研究來自益母草主要分布區(qū)19個種源樣本，通過遺傳距離聚類分析，可將19個益母草種源聚為3類，其遺傳變異與地理位置以及形態(tài)特征存在顯著相關(guān)性，這為益母草新品種的選育和人工栽培提供了理論基礎(chǔ)。

2 小結(jié)與展望

中藥的復(fù)雜性在于其內(nèi)在成分的多樣性，其藥效不是來自于單一活性成分，而是來自于多種成分，如大分子物質(zhì)（蛋白質(zhì)、多糖等）以及常規(guī)小分子物質(zhì)（生物堿、黃酮、皂苷等）之間的協(xié)同或拮抗作用。因此，任何一種單一活性成分都不能代表藥材及其制劑的功效，也不能全面反映其內(nèi)在質(zhì)量的優(yōu)劣。目前，對于益母草藥材及其復(fù)方制劑的質(zhì)量控制主要集中在單一活性化學(xué)成分上，主要以鹽酸水蘇堿以及鹽酸益母草堿作為鑒別和含量測定，也有的測定阿魏酸、黃酮以及多糖的含量。關(guān)于益母草的質(zhì)量評價中，文獻中所測定的鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿含量差異很大，有的甚至低于藥典規(guī)定指標(biāo)，所測定的黃酮、多糖也不能客觀反映益母草藥材的全貌，所以對益母草藥材及其制劑采用綜合分析成為其質(zhì)量控制的必然趨勢。

在藥材的傳統(tǒng)質(zhì)量評價體系中，氣味是十分重要的一個評價指標(biāo)[24]。電子鼻、電子舌技術(shù)是近年來迅速發(fā)展起來的新型的檢測和識別復(fù)雜氣味及味道的分析系統(tǒng)。它的原理是模仿生物的嗅覺以及味覺機能檢測樣品的整體信息，適于中藥復(fù)雜氣味的分析。2010年版《中國藥典》在性狀項下描述益母草為氣微、味微苦，模糊的術(shù)語導(dǎo)致很難從氣味上對其藥材進行鑒別以及質(zhì)量控制。但是，電子鼻、電子舌在中藥“氣味、味道”的整體把握上顯示出了優(yōu)越性，能對樣品“氣味、味道”特征進行特異性識別，可以作為一種有效的輔助手段，結(jié)合藥典規(guī)定指標(biāo)共同對益母草質(zhì)量進行控制，從而保證益母草及其制劑用藥的安全、有效和可控。

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