汪云偉 鐘 戀 焦小珂 蘭 杰 艾 莉▲

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都 611137；2.四川新中方醫(yī)藥科技股份有限公司，四川廣元 628000；3.四川廣元蓉成制藥有限公司，四川廣元 628000

益母草為唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的新鮮或干燥地上部分，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其主要功效為活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，益母草還具有治療前列腺增生[1]以及美容的功效[2]。目前，以益母草為原料的現(xiàn)代制劑主要有注射液、片劑、顆粒劑、合劑、膠囊、軟膠囊、膏劑以及滴丸等多種劑型，主要用于婦科疾病。

益母草的化學(xué)成分主要有生物堿類、黃酮類、脂肪酸類以及揮發(fā)油類等，其中的生物堿是目前研究最為透徹的指標(biāo)性成分，2010年版《中國(guó)藥典》對(duì)其藥材及其制劑的鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿進(jìn)行了測(cè)定并規(guī)定了限度。現(xiàn)將益母草及其制劑的質(zhì)量控制研究概況綜述如下：

1 益母草藥材及其制劑的質(zhì)量控制研究

益母草的應(yīng)用非常廣泛，以益母草為主藥的制劑也很多，如復(fù)方益母草合劑、抗宮炎片、坤寧顆粒、益母草注射劑等，在質(zhì)量控制方面多選用益母草或益母草里的指標(biāo)性成分作為其主藥的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)之一?，F(xiàn)有的技術(shù)手段主要包括薄層色譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳、指紋圖譜等。

1.1 薄層色譜法

益母草的鑒別多以其指標(biāo)成分鹽酸水蘇堿為主，也有以阿魏酸為鑒別成分的，都采用益母草對(duì)照藥材作為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)辂}酸水蘇堿易溶于醇和水，所以大多采取醇水提取。陳士翠等[3]對(duì)活血養(yǎng)陰顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用薄層色譜對(duì)葛根與益母草進(jìn)行定性鑒別，藥材用乙醇提取并用1%的鹽酸甲醇定容，與鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液點(diǎn)于同一硅膠 G 板上，以氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下（365 nm）檢視。金鳳珠等[4]在復(fù)方益母草合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中，對(duì)益母草、當(dāng)歸以及川芎進(jìn)行薄層色譜鑒別，作為該制劑的質(zhì)量控制手段。益母草的薄層鑒別為水提醇沉液與對(duì)照藥材溶液以及陰性對(duì)照液同點(diǎn)于一硅膠 G 板上，以苯-氯仿-冰醋酸（6∶5∶1）為展開劑，置紫外光燈下（365 nm）檢視。女金丸[5]由當(dāng)歸、白芍、肉桂、益母草、牡丹皮、延胡索、黃芩、陳皮等二十三味中藥制成，益母草的鑒別為其水提液經(jīng)過(guò)濾、過(guò)交換樹脂以及洗脫等過(guò)程制得的甲醇溶液與鹽酸水蘇堿的甲醇溶液點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉制成的硅膠G板上，以正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯（8∶3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，并噴以稀碘化必鉀，日光下檢視。羅毅等[6]用益母草提取液與阿魏酸對(duì)照品溶液點(diǎn)于同一硅膠 G板上，以苯∶冰醋酸∶甲醇=30∶1∶3為展開劑展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。另外，以苯∶甲酸乙酯∶甲酸=6∶3.5∶0.5；三氯甲烷∶甲醇∶冰醋酸=9∶1∶0.1； 正己烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸=8∶2∶0.5 為展開劑也可以得到與以上相同的結(jié)果。

薄層色譜法多作為定性鑒別用，也有的文獻(xiàn)采用薄層掃描法定量。如2005年版 《中國(guó)藥典》采用薄層掃描法（TLCS）測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿的含量。產(chǎn)婦定膠囊主要由益母草、當(dāng)歸、川芎、甘草、紅花等中藥組成，傅勇等[7]以君藥益母草中的鹽酸水蘇堿為指標(biāo)成分，采用薄層掃描法對(duì)其進(jìn)行定性鑒別以及含量測(cè)定，從而控制其質(zhì)量。婦月康膠囊是由當(dāng)歸、川芎、甘草、益母草、紅花等8味中藥組成，具有活血、祛瘀、止痛的作用，裴香萍等[8]以鹽酸水蘇堿為指標(biāo)，建立薄層掃描法，并建立了方法學(xué)考察，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法以其分離度好、靈敏度高、分析速度快等特點(diǎn)被廣泛用于中藥的含量測(cè)定中。陳碧蓮等[9]采用親水作用色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿含量，方法為 HILIC 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-0.2%冰醋酸溶液（80∶20）為流動(dòng)相；Alltech 2000 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：漂移管溫度 80℃，氣體流速 2.0 L/min；流速0.5 L/min。該方法可以替代薄層掃描法用于鹽酸水蘇堿的含量測(cè)定。張玉萌等[10]采用高效液相色譜法對(duì)益母草飲片中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿的含量進(jìn)行測(cè)定，色譜柱：SCX 強(qiáng)陽(yáng)離子柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.5 mol磷酸二氫鉀-三乙胺（1000∶1.5）（磷酸調(diào) pH 值 2.25～2.3）檢測(cè)波長(zhǎng)：192 nm；流速 1.0 mL/min；柱溫：25℃。該方法可以用于益母草飲片的質(zhì)量控制。彭麗麗等[11]對(duì)益母草滴丸中水蘇堿進(jìn)行了含量測(cè)定，方法為Waters Spherisorb SCX陽(yáng)離子交換樹脂柱（416 mm×250 mm，5 μm ）；流動(dòng)相：15 mmol/L磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：192 nm。此方法簡(jiǎn)便，可以用于益母草滴丸的質(zhì)量控制。李政海等[12]采用反相高效液相色譜法，以Ultimate Column XB-NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，乙腈-水（90∶10）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 192 nm，流速為1.0 mL/min，建立了益母草顆粒（無(wú)蔗糖型）中鹽酸水蘇堿的含量測(cè)定方法。復(fù)方益母草膠囊是由益母草、熟地黃、當(dāng)歸3種中藥制成，具有調(diào)經(jīng)活血、祛瘀生新的功效。鐘穎[13]采用RP-HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定復(fù)方益母草膠囊中阿魏酸、鹽酸水蘇堿、梓醇、麥角甾苷的含量，豐富了復(fù)方益母草膠囊的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1.3 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳在藥物分析中的應(yīng)用越來(lái)越多，在益母草的質(zhì)量控制中也有應(yīng)用。羅毅等[14]采用HPCE法測(cè)定了益母草總堿中的鹽酸水蘇堿，水蘇堿在0.164～1.97 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為96.52%，該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可作為益母草總堿提取物定量控制的方法。徐兩軍[15]采用毛細(xì)管電泳-紫外檢測(cè)法測(cè)定了益母草中的4種黃酮類化合物（山奈酚、蘆丁、金絲桃苷以及槲皮素），山奈酚、蘆丁、金絲桃苷和槲皮素的檢測(cè)限分別為0.07、0.08、0.23和0.44 μg/mL，該方法可以用于益母草黃酮類化合物的測(cè)定。吳婷等[16]采用毛細(xì)管電泳-電化學(xué)法（CE-ED）測(cè)定了益母草及其沖劑中的黃酮類化合物，根皮苷、橙皮素、蘆丁、山奈酚、洋芹素、槲皮素在 5.00×10-7～1.00×10-4g/mL范圍內(nèi)均與其相應(yīng)的峰電流呈線性關(guān)系，其檢出限（S/N=3） 分別為 4.68×10-7、2.03×10-7、4.68×10-7、2.68×10-7、4.81×10-7、3.61×10-7g/mL，該方法可以用于實(shí)際樣品的分析。

1.4 指紋圖譜

指紋圖譜已成為國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效的手段[17]。朱海云等[18]采用“H2SO4-KBrO3-Mn-SO4-丙酮”振蕩器，添加一定量的益母草，得到其振蕩指紋圖譜，同時(shí)研究了振蕩體系中丙酮、Mn2+、H+和 BrO3的濃度變化對(duì)振蕩波形的影響，并分析了振蕩周期、振幅和振蕩壽命隨底物益母草用量的變化規(guī)律，以期為益母草的臨床用藥提供基礎(chǔ)。益母草制劑的指紋圖譜研究較其藥材廣泛，如賀亞玲等[19]應(yīng)用反相離子對(duì)色譜法對(duì)16批益母草注射劑進(jìn)行了指紋圖譜研究，采用Aichrom Bond-AQ-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱，流動(dòng)相為 0.1 mol/L的磷酸二氫鈉溶液，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為242 nm，共確定了9個(gè)共有峰，一定程度上說(shuō)明了益母草注射液指紋圖譜的專屬性以及特征性。苗文娟等[20]以水蘇堿峰為參照物峰，采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法建立益母草注射液指紋圖譜，標(biāo)示出益母草注射液中12個(gè)主要共有峰，該法具有良好的重現(xiàn)性及分離度，可為益母草注射液的質(zhì)量提供依據(jù)。

近年來(lái)，DNA指紋圖譜由于其具有高度的個(gè)體特異性而被廣泛應(yīng)用于中藥的鑒別中。中藥成分復(fù)雜，不同植物來(lái)源的同一種中藥，其有效成分的含量也有很大差異。如益母草屬植物在我國(guó)有12個(gè)種，2個(gè)變種，由于功效相似，常被混用。因此，從分子水平上對(duì)益母草藥材進(jìn)行鑒別，保證藥材質(zhì)量，是很有必要的。余琪等[21]采用擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP）標(biāo)記，在DNA水平上對(duì)益母草種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性研究，構(gòu)建了益母草AFLP指紋圖譜，為益母草種質(zhì)資源的分析、評(píng)價(jià)以及品種選育提供了理論依據(jù)。張國(guó)梅等[22]用RAPD法對(duì)幾種來(lái)源于益母草屬植物的生藥進(jìn)行鑒別，采用CTAB法提取材料基因組DNA，選取50種隨機(jī)引物，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，所得結(jié)果比較穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好，該方法可以用于益母草屬植物的鑒別。陳麗雅等[23]用ISSR分子標(biāo)記研究來(lái)自益母草主要分布區(qū)19個(gè)種源樣本，通過(guò)遺傳距離聚類分析，可將19個(gè)益母草種源聚為3類，其遺傳變異與地理位置以及形態(tài)特征存在顯著相關(guān)性，這為益母草新品種的選育和人工栽培提供了理論基礎(chǔ)。

2 小結(jié)與展望

中藥的復(fù)雜性在于其內(nèi)在成分的多樣性，其藥效不是來(lái)自于單一活性成分，而是來(lái)自于多種成分，如大分子物質(zhì)（蛋白質(zhì)、多糖等）以及常規(guī)小分子物質(zhì)（生物堿、黃酮、皂苷等）之間的協(xié)同或拮抗作用。因此，任何一種單一活性成分都不能代表藥材及其制劑的功效，也不能全面反映其內(nèi)在質(zhì)量的優(yōu)劣。目前，對(duì)于益母草藥材及其復(fù)方制劑的質(zhì)量控制主要集中在單一活性化學(xué)成分上，主要以鹽酸水蘇堿以及鹽酸益母草堿作為鑒別和含量測(cè)定，也有的測(cè)定阿魏酸、黃酮以及多糖的含量。關(guān)于益母草的質(zhì)量評(píng)價(jià)中，文獻(xiàn)中所測(cè)定的鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿含量差異很大，有的甚至低于藥典規(guī)定指標(biāo)，所測(cè)定的黃酮、多糖也不能客觀反映益母草藥材的全貌，所以對(duì)益母草藥材及其制劑采用綜合分析成為其質(zhì)量控制的必然趨勢(shì)。

在藥材的傳統(tǒng)質(zhì)量評(píng)價(jià)體系中，氣味是十分重要的一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)[24]。電子鼻、電子舌技術(shù)是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的新型的檢測(cè)和識(shí)別復(fù)雜氣味及味道的分析系統(tǒng)。它的原理是模仿生物的嗅覺(jué)以及味覺(jué)機(jī)能檢測(cè)樣品的整體信息，適于中藥復(fù)雜氣味的分析。2010年版《中國(guó)藥典》在性狀項(xiàng)下描述益母草為氣微、味微苦，模糊的術(shù)語(yǔ)導(dǎo)致很難從氣味上對(duì)其藥材進(jìn)行鑒別以及質(zhì)量控制。但是，電子鼻、電子舌在中藥“氣味、味道”的整體把握上顯示出了優(yōu)越性，能對(duì)樣品“氣味、味道”特征進(jìn)行特異性識(shí)別，可以作為一種有效的輔助手段，結(jié)合藥典規(guī)定指標(biāo)共同對(duì)益母草質(zhì)量進(jìn)行控制，從而保證益母草及其制劑用藥的安全、有效和可控。

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