曾勇勝，鐘冬明，鐘思群

（1. 化州市疾病預(yù)防控制中心， 廣東 化州 525100； 2. 廣州市蘿崗區(qū)東區(qū)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 廣東 廣州 510730；3. 廣州市蘿崗區(qū)衛(wèi)生局（食品藥品監(jiān)督管理局），廣東 廣州 510530）

甲拌膦高效液相色譜檢測方法研究

曾勇勝1，鐘冬明2，鐘思群3

（1. 化州市疾病預(yù)防控制中心， 廣東 化州 525100； 2. 廣州市蘿崗區(qū)東區(qū)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 廣東 廣州 510730；3. 廣州市蘿崗區(qū)衛(wèi)生局（食品藥品監(jiān)督管理局），廣東 廣州 510530）

目的 探討高效液相色譜法檢測甲拌膦的方法。方法 采用不同的流動相、檢測波長等反復(fù)測定甲拌膦的峰面積與峰高，按照規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)方法對本試驗條件檢測甲拌膦的檢測限、線性范圍與產(chǎn)品及加標(biāo)回收率的實驗。結(jié)果 在流動相乙腈+水（85+15）、205 nm波長，甲拌膦在5.1 min附近產(chǎn)生一靈敏色譜峰,線性范圍為: 0.02～2.5μg，檢出限為：0.005μg。結(jié)論 高效液相色譜在一定條件下測定甲拌膦的含量效果理想。

甲拌膦；高效液相色譜；檢測

甲拌膦（別 名 3911；西梅脫；O,O-二乙基-S-（乙硫基甲基）二硫化磷酸酯，分子式 C7H17O2PS3）。甲拌膦是透明的、有輕微臭味的油狀液體，在室溫下穩(wěn)定，pH 5～7時穩(wěn)定，強(qiáng)酸（pH＜2）或堿（pH＞9）介質(zhì)中，能促進(jìn)水解，其速度取決于溫度和酸堿度。

甲拌膦能抑制膽堿酯酶活性，造成神經(jīng)生理功能紊亂。短期內(nèi)接觸（口服、吸入、皮膚、粘膜）大量接觸引起急性中毒。表現(xiàn)有頭痛、頭昏、食欲減退、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、流涎、瞳孔縮小、呼吸道分泌物增多、多汗、肌束震顫等。重者出現(xiàn)肺水腫、腦水腫、昏迷、呼吸麻痹。部分病例可有心、肝、腎損害。少數(shù)嚴(yán)重病例在意識恢復(fù)后數(shù)周或數(shù)月發(fā)生周圍神經(jīng)病。個別嚴(yán)重病例可發(fā)生遲發(fā)性猝死。血膽堿酯酶活性降低。

現(xiàn)在檢測甲拌膦的國標(biāo)方法是氣相色譜法，本文就用液相色譜檢測甲拌膦的方法條件做了分析研究。

1 實驗部分

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器

（1）高效液相色譜儀：美國安捷倫 1200，色譜數(shù)據(jù)工作站。

（2）色譜柱：agilent zorbax eclipse XDB-C18 Analytical 4.6×250 mm，5-Micron。

（3）微量進(jìn)樣器：50μL。

（4）溶劑過濾器，濾膜孔徑0.45μm；針式過濾器，過濾膜孔徑0.45μm。

（5）超聲波清洗器。

1.1.2 試劑

（1）甲拌膦標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω=99%）：國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心（沈陽）。

（2）乙腈：特級，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

（3）純凈水：新蒸二次蒸餾水。

1.2 實驗方法

甲拌膦用乙腈溶解并定溶，以乙腈+水為流動相，使用以agilent XDB-C18 4.6×250 mm色譜柱，紫外可變波長檢測器下對甲拌磷進(jìn)分析檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 甲拌膦的色譜峰曲線

以乙腈+水（85+15）為流動相，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣5 μL，波長205 nm的條件下，甲拌膦在5.10 min左右產(chǎn)生一靈敏的色譜峰，根據(jù)峰面積定量，保留時間定性。利用此峰可測定微量甲拌膦含量。

2.2 條件實驗

影響甲拌膦峰面積的因素有流動相種類與組成，波長，環(huán)境溫度等，其中流動相種類及波長的影響最明顯。

（1）本人試驗了甲醇、乙腈等溶劑，以245 nm波長，進(jìn)樣5 μL進(jìn)行試驗，結(jié)果表明，用乙腈效果較好，具體實驗數(shù)據(jù)結(jié)果如表1所示，標(biāo)樣：720 μg/mL。

表1 甲醇與乙腈檢測甲拌膦效果比較Table 1 Comparison of phorate detection results by using methanol and acetonitrile

甲醇的極性比乙腈的大，甲醇6.6，乙腈6.2，反相洗脫能力應(yīng)該極性越小，洗脫能力越強(qiáng)，在后來的實驗中，相同的溶劑與水的配比中，乙腈與水的流動相要比甲醇與水的流動相保留時間要短。從保留時間、峰面積與峰高方面考慮，用乙腈檢測甲拌膦比用甲醇為流動相檢測甲拌膦的效果更好。

（2）選擇乙腈作為流動相溶劑后，以245 nm波長，進(jìn)樣5μL，乙腈與水按不同比例配制進(jìn)行高效液相色譜分析測定，具體實驗數(shù)據(jù)結(jié)果如表2所示：標(biāo)樣:720μg/mL。

表2 乙腈與水不同配比效果比較Table 2 Comparison of phorate detection results with different ratio of acetonitrile and water

從以上結(jié)果可知，流動相（乙腈+水）水的比例增加，峰面積增加不十分顯著，但保留時間明顯延遲，峰高也降低較多，流動相比例的變化對基線影響不明顯，基線較穩(wěn)定。從保留時間與峰面積及與其他峰分離的情況方面考慮，選擇流動相乙腈+水（85+15）較適宜。

（3）檢測波長的選擇

在沒有干擾的情況下用最大吸收波長來進(jìn)行定量測定的話，靈敏度最高，本次試驗在流動相乙腈+水（85+15）與流速1.0 mL/min的情況下，改變波長對同一濃度的甲拌磷進(jìn)行高效液相色譜分析。

隨著波長的減少，峰面積與峰高呈增加趨勢，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高，粘度較小，且截止波長(190 nm)較甲醇(205 nm)的短，更適合于利用末端吸收的檢測。但用乙腈作為流動相進(jìn)行檢測，在200 nm以下時基線不穩(wěn)，從檢測效果來考，205 nm的檢測波長基線平穩(wěn)，峰形穩(wěn)定對稱，因此，選擇205 nm波長作為甲拌膦的檢測波長。

2.3 檢測限與線性范圍

2.3.1 檢測限

能夠定性區(qū)別與零的待測物的最低含量，定量10次進(jìn)樣0.005 μg甲拌磷。選取較為平緩的一段基線作為參比，放大后，記錄基線噪音峰的高度，由數(shù)據(jù)結(jié)果可知，0.005 μg甲拌磷的進(jìn)樣量約是噪音峰的高度的3倍，可以確定用此法得出甲拌膦的檢測限為0.005 μg。如果進(jìn)樣量為5 μL，則甲拌膦的檢測限為1.0 μg/mL。

2.3.2 線性范圍

在試驗最佳的液相色譜分析操作條件下（乙腈（85+15），檢測波長205 nm，流速1.0 mL/min）定量進(jìn)樣不同質(zhì)量的甲拌膦樣品，每個質(zhì)量的樣品重復(fù)測定3次，取平均值，以平均峰面積對各進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，由試驗結(jié)果顯示，甲拌膦在進(jìn)樣0.02 μg到2.5μg之間呈良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為：y=655.967x+11.3336，相關(guān)系數(shù)為0.999241，線性范圍達(dá)2個數(shù)量級，如果進(jìn)樣量為5μL，則線性范圍為4～500 μg/mL。

2.4 精密度的測定

配制40μg/mL甲拌膦標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述操作試驗最佳測試條件下，進(jìn)樣5μL，連續(xù)進(jìn)樣10針。有測試結(jié)果計算，0.2μg甲拌膦進(jìn)樣的精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.222%。在相同操作條件下，再分別連續(xù)10次進(jìn)樣0. 1μg與2.0μg甲拌膦樣，測得的精密度為0.1μg進(jìn)樣的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.66%，2.0μg進(jìn)樣的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.683%。

2.5 樣品測定與加標(biāo)回收率測定

2.5.1 樣品測定

從市場購買化州市天力化工有限公司 5%甲拌膦顆粒劑產(chǎn)品，準(zhǔn)確稱取1.0 g（精確到0.0002 g）樣品于100 mL容量瓶中，加80 mL乙腈，在超聲浴中震蕩20分鐘，取出冷卻到室溫，加乙腈至刻度，離心10 min（2 000 r/min），再吸取10 mL濾液到100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至100 mL，稀釋液經(jīng)0.45 μm針頭過濾，濾液備用［1］。

2.5.2 加標(biāo)回收率測定［2］

準(zhǔn)確稱取9份5%甲拌膦顆粒劑，每份約1.0 g（精確到0.000 2 g），每3份樣品分別加0.01 g、0.05 g、0.1 g甲拌膦標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，加標(biāo)樣品按上述樣品測定的方法進(jìn)行樣品處理后，測定未加標(biāo)的甲拌膦顆粒劑中甲拌膦的含量與加標(biāo)后甲拌膦的含量，具體結(jié)果如表3所示。

表3 甲拌膦顆粒劑加標(biāo)回收率測試Table 3 Phorate addition standard recovery test

本次試驗測定了3個不同標(biāo)準(zhǔn)的加入量，加標(biāo)回收率為95.4%～103.6%，加標(biāo)回收率在理想的范圍內(nèi)。

3 結(jié) 論

（1）用氣相色譜檢甲拌膦的情況較普遍，但用液相色譜檢有機(jī)磷農(nóng)藥的狀況也越來越常見，在以往的液相色譜檢測甲拌膦的論文報告中，主要是用甲醇+水為流動相，但本論文用乙腈作為流動相能得到更高的檢測限與更寬的線性范圍，甲拌膦的檢測，在本文的色譜操作條件下，會得到更加理想的測試效果。

（2）高效液相色譜用于農(nóng)藥及其殘留物的分析有其獨特的優(yōu)勢，如何快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行農(nóng)藥殘留特別是多種殘留成分的分析測試，是農(nóng)藥殘留分析有待解決的問題。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分析手段與方法得到不斷改進(jìn)和提高，高效液相色譜技術(shù)也在不斷發(fā)展，例如，引入3 μm填料的色譜柱及能分離幾何異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體的手性柱［3］。隨著科技的發(fā)展，技術(shù)的日益完善，較之以前色譜分析的方法有了很大程度的提高，很多科學(xué)家在對于一些分析上的難點有了新的突破，這樣一個不斷完善的技術(shù)在以后的社會發(fā)展中一定會扮演著一個重要的角色。液相色譜分析有機(jī)磷農(nóng)藥將會越來越普及［4］。

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［2］張虹.加標(biāo)回收率的測定和結(jié)果判斷[J]. 石油與天然氣化工,2000，2(1)：50-52.

［3］朱正武.高效液相色譜法在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用[J]. 化學(xué)工業(yè)與工程技術(shù)，2004, 25(6)：51-53.

［4］楊茜 液相色譜法在有機(jī)磷農(nóng)藥檢測中的應(yīng)用前景[J] .十堰農(nóng)業(yè)信息網(wǎng), 2013（4）：37-40．

圖2 MCM-41介孔材料TEM圖Fig.2 TEM photo of MCM - 41 mesoporous materials

3 結(jié) 論

本方法采用MCM-41介孔材料作為吸附劑，固相萃取水樣中的微量砷，實驗對儀器條件、洗脫酸度、吸附及洗脫速率等條件進(jìn)行優(yōu)化，達(dá)到了微量砷的分離富集的效果，從而準(zhǔn)確的測定廢水中砷的含量。但是MCM-41介孔材料的選擇性還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究，因此對MCM-41介孔材料進(jìn)行修飾從而有選擇性的吸收廢水中的待測元素是未來的研究方向之一。

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Study on Detection of Phorate by High Performance Liquid Chromatography

ZENG Yong-sheng1，ZHONG Dong-ming2，ZHONG Si-qun3
（1. Huazhou Center for Disease Control and Prevention, Guangdong Huazhou 525100，China；2. Guangzhou City Luogang District Eastern Community Health Service Center, Guangdong Guangzhou 510730，China；3. Guangzhou City Luogang District Health Bureau , Guangdong Guangzhou 510530，China）

HPLC method was used to determine phorate, peak areas and peaks were obtained by using different mobile phase and detection wavelength. In accordance with the provisions of the standard method, the detection limit of phorate was determined as well as the linear range of products, and recovery rate experiments were carried out. The results show that, when the mobile phase is acetonitrile and water (85+15), the wavelength is 205 nm, phorate produces a sensitive chromatographic peak near 5.1 min, and the linear range is 0.02～2.5 μg, the detection limit is 0.005 μg. So HPLC method has ideal determination effect for phorate under certain conditions.

Phorate; High performance liquid chromatography; Testing

O 657

A

1671-0460（2014）11-2466-03

2014-09-03

曾勇勝（1977-），男，廣東化州人，理化檢驗中級職稱，2002年畢業(yè)于廣東藥學(xué)院衛(wèi)生檢驗專業(yè)，研究方向：從事檢驗檢測工作。郵箱：zys28@126.com。