江俊 胡強 宋炎鑫

（鎮(zhèn)江威特藥業(yè)有限責任公司，江蘇 鎮(zhèn)江 212009）

恩諾沙星對雞大腸桿菌病臨床療效試驗

江俊 胡強 宋炎鑫

（鎮(zhèn)江威特藥業(yè)有限責任公司，江蘇 鎮(zhèn)江 212009）

為驗證A、B、C、D四個不同配比的10%長效恩諾沙星注射液對雞大腸桿菌病的臨床療效，選用人工誘發(fā)大腸桿菌病的雞為試驗對象，設計14日齡三黃雞雛雞動物實驗，經頸部皮下注射不同配比的10%長效恩諾沙星注射液，10%長效恩諾沙星注射液A、B、C、D四個配比符合注射液要求，通過實驗室和臨床療效兩方面數據綜合篩選出療效最佳的10%長效恩諾沙星注射液。結果同時顯示，實驗室10%長效恩諾沙星注射液配比C藥動學參數[消除半衰期(9.821±2.256)h、最大濃度(3.032±0.152)μg/mL、藥時曲線下面積(19.865±1.876)(mg·h)/L]比其他3組10%長效恩諾沙星注射液配比A、B、D的藥動學參數明顯高，通過指標對比，說明配比C優(yōu)越；臨床10%長效恩諾沙星注射液C組的治愈率、存活率（90.0、96.8%），均極顯著高于其他3組（P<0.01），證明了配比C對致病菌有明顯的治療作用，適合臨床需求。

恩諾沙星；注射液；大腸桿菌；雞

恩諾沙星(enrofloxaein)是動物專用的氟喹諾酮類抗菌藥，因抗菌譜廣、殺菌作用強、吸收快、體內分布廣，在治療雞的細菌性疾病[1]與支原體病[2]方面應用廣泛。為客觀、科學地評價恩諾沙星注射液對雞大腸桿菌病的臨床療效，通過人工誘發(fā)雞大腸桿菌病，頸部皮下注射給藥方式進行療效試驗，為臨床提供科學依據。

1 材料與方法

1.1試驗用動物

選取三黃雞雛雞120只，公母兼有，未經大腸桿菌菌苗免疫，飼養(yǎng)于專門的試驗區(qū)，試驗前按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為不添加任何藥物的全價日糧，從1日齡開始適應性喂養(yǎng)14d后進行試驗，隨機分為①、②、③、④組，每組30只，分組情況見表1。1.2試驗主要藥物藥品及試劑

表1 試驗分組及處理kg

四種不同10%長效恩諾沙星注射液；正己烷、羧甲基纖維素鈉、吡咯烷酮粉、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鉀、0.1mol/L氫氧化鈉溶液、0.05mol/L氫氧化鈉溶液、pH試紙。

1.3主要試驗儀器

TGL-16B離心機；JSWII恒溫水浴箱；高效液相色譜儀；Shimadu LC-2010C HT；C-212-103光學顯微鏡；PHS-25B數字酸度儀。

1.410%長效恩諾沙星注射液制備

要用到恩諾沙星原料10%、抗氧化劑0.2%、絡合劑3.2%、助溶劑4%、緩釋劑2%、穩(wěn)定劑10%、其余注射用水等，按照四種不同比例進行配合備用。

1.5液相色譜儀色譜條件

譜條件：不銹鋼柱，柱溫25℃，檢測波長275nm，流速1mL/min，檢測范圍0.05～20μg/mL,進樣量20 μL。在選定色譜條件和參數下，得到相關標準曲線的回歸方程y=0.25+120.1x，相關系數r=0.9997。用其測得的峰面積在標準曲線上進行多點外標法校準，得其血漿長效恩諾沙星的濃度。

1.6數據處理

試驗采用MCPKP藥代學數據處理程序，自由選擇最佳模型，符合一級吸收二室開放模型，將血漿長效恩諾沙星的濃度經過MCPKP藥代學數據處理，計算出藥動力學參數（如表2）。

1.7雞的致病性試驗方法

1.7.1菌株的選擇。選擇的是江蘇地區(qū)雞大腸桿菌菌株，江蘇地區(qū)大腸桿菌血清型以O78、O127、O18、O2等血清型為主[4，5]，由合作單位提供具有代表性的血清型O78作為這次試驗的菌株（如圖1）。

表2 藥敏試驗判定標準mm

圖1 大腸桿菌形態(tài)特征

圖2 普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

1.7.2檢驗大腸桿菌菌株的敏感性。使用前，保存的強毒菌種先接種普通營養(yǎng)瓊脂平板[3]，培養(yǎng)24h時，挑選典型菌落于普通肉湯中，經37℃培養(yǎng)18～24h后取出。肉湯培養(yǎng)物接種雞經復壯后，從病死雞肝臟分離大腸桿菌并接種營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)（如圖2），根據抑菌圈直徑的大小不同區(qū)分敏感性的高低，按美國

NCCLS判定標準劃分方式分為極敏感、高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感（如表2）。經藥敏試驗檢驗抑菌直徑為16～18mm，故所選大腸桿菌O78血清型標準菌株對恩諾沙星敏感。

1.7.3臨床試驗接種劑量。將大腸桿菌O78血清型標準菌株經口接種14日齡健康雛雞，每只0.2mL大腸桿菌懸液，約含1.2×108個菌CFU[6]。各組隔離分開飼養(yǎng)，觀察記錄其發(fā)病、死亡和剖檢病變（如圖3、圖4）。

圖3 心包炎

圖4 肝周炎

1.7.4試驗動物給藥。表現出臨床癥狀時（精神沉郁、食欲減退、下痢等），用10%長效恩諾沙星進行治療，按注射用量0.5mL/kg，直至全愈。

1.8實驗室數據處理（見表3）

表3 動力學參數

2 結果分析

2.1致病性

在試驗期間，根據接種雞死亡或產生嚴重病變（心包炎、肝周炎、氣囊炎等）確定大腸桿菌菌株的致病性（如圖3、圖4）。

2.2動力學參數

由表3可以看出，由配方C制成的10%長效恩諾沙星注射液在雞體內的藥代動力學參數為：消除半衰期(9.821±2.256)h、最大濃度(3.032±0.152)μg/ mL、藥時曲線下面積(19.865±1.876)(mg·h)/L，主要指標都比其他配比優(yōu)越，而且達到血藥峰濃度的時間比其他配比短，說明該配方可以在短時間達到血藥濃度，且可以維持較長時間的有效血藥濃度。

2.3治愈率

在試驗期間，雞經給藥后，精神狀態(tài)、食欲等恢復正常，均屬治愈。根據治愈雞數占整個試驗雞數

給的比率計算治愈率。

2.4有效率

經用藥后，治愈的和沒有死亡但有臨床癥狀表現的雞均為“有效”；試驗結束時每組存活的雞數占試驗雞數的比率為有效率（見表4）。

表4 各試驗組療效效果%

2.5各組的治療效果

比較配比C長效恩諾沙星注射液的有效率和治愈率（90.0%，96.7%）都比其他3組的數據高，見表4。

經統計表明:C配比的長效恩諾沙星注射液治療率、有效率（90.0%，96.7%），均極顯著高于其他3組①、②、④治愈率、存活率(P<0.01)。

3 討論

本試驗中配比C10%長效恩諾沙星注射液藥動學數據消除半衰期(9.821±2.256)h、最大濃度(3.032± 0.152)μg/mL、藥時曲線下面積(19.865±1.876)(mg·h)/ L，說明血藥峰濃度時間比其他配比短，因而長效恩諾沙星注射液消除比較緩慢，在體內存留時間較長，說明藥物吸收緩慢，從而導致消除半衰期延長，使恩諾沙星注射液起長效的作用，從而具有明顯的抑菌和殺菌效果。此外，配比C臨床治愈率和有效率高（90.0%、96.7%），因此配比C10%的恩諾沙星注射液是適合臨床需求的產品。

[1]方炳虎，曾振靈，馮淇輝，等.恩諾沙星對雞大腸桿菌病及葡萄球菌病的藥效研究[J].中國獸醫(yī)學報，1997，17(2):157～160.

[2]Barbour EK，Hamadeh S，Talhouk R，et a1.Evaluation of anenrofloxacin treatment program against Mycoplasmagallisepticurn infection in broilers[J].Preventive Vet Med，1998.35(2):91～99.

[3]俞樹榮.微生物學和微生物學檢驗[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:169～175.

[4]高崧，吳長新，文其乙，等.不同地區(qū)101個禽源性大腸桿菌分離株的致病性試驗[J].中國預防獸醫(yī)學報，1999.21（1）：13～16.

[5]揮時峰，鄭明球，潘震寰.雞源性大腸桿菌的分離、鑒定及特性[J].西南農業(yè)學報，1998.11(1):90～96.

[6]廖延雄.獸醫(yī)微生物實驗診斷手冊[M].北京:中國農業(yè)大學出版社，1977.

1004-2342（2014）03-0011-03

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