李喜香，劉效栓 ，張小華 ，禚 君，豆金彥，劉軍剛，高小恒 ，張 堅(jiān) ，張芳麗 ，馬 嵐 ，鄭立娟 ，吳 迪

1甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅 蘭州 730050；2蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)研究所；3甘肅省新藥臨床前研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

養(yǎng)陰生肌膜是由甘肅省中醫(yī)院醫(yī)院制劑養(yǎng)陰生肌散經(jīng)劑型改革而得，由甘草、冰片、牛黃、青黛、黃柏等藥組成，主要用于治療口腔潰瘍［1-2］。為了解其安全性，本研究進(jìn)行了養(yǎng)陰生肌(膜)散的急性毒性及全身過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(18～22)g，SPF級(jí)，購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(甘)2009-0004；豚鼠，雌性，體質(zhì)量(200～300)g，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(甘)2010-0001。

1.2 藥物與試劑 養(yǎng)陰生肌散(甘肅省中醫(yī)院提供，甘藥制字 Z04000835，批號(hào)：20111224)；2，4-二硝基氯苯(上海試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：97-05-01)；新潔爾滅消毒液 (山東利爾康消毒科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：100901A)；10%卵白蛋白(自制)，取 1mL雞蛋清，加入9mL生理鹽水，混勻后備用；氯化鈉注射液(西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：020605482)；戊巴比妥鈉(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)：F20020915)。

2 方法與結(jié)果

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)［3-6］取小鼠50只，按1∶0.7比例設(shè) 5個(gè)劑量組(0.49、0.34、0.24、0.17、0.12 g/mL)，每組10只。小鼠禁食不禁水12小時(shí)，按0.02mL/g灌胃給藥。觀察小鼠毒性反應(yīng)癥狀以及癥狀出現(xiàn)和消失時(shí)間、死亡時(shí)間、死亡只數(shù)，每4小時(shí)做詳細(xì)記錄。連續(xù)觀察7天，于第7天處死小鼠進(jìn)行剖檢，肉眼觀察小鼠各臟器損害情況。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，所有小鼠均未死亡，未能測(cè)出LD50。隨后將養(yǎng)陰生肌散配成0.6 g/mL濃度，按照上述操作給藥進(jìn)行最大耐受量測(cè)試。結(jié)果顯示小鼠活動(dòng)自如，飲食、飲水正常，體質(zhì)量未減輕。按照毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，LD50＞1 000mg/kg，屬無(wú)毒性物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)劑量增加到12000mg/kg仍未出現(xiàn)毒性，表明養(yǎng)陰生肌散對(duì)小鼠安全無(wú)毒，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 養(yǎng)陰生肌散急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 全身過(guò)敏性試驗(yàn)［3-5，7］取豚鼠 18只，隨機(jī)分為生理鹽水組、卵白蛋白組和養(yǎng)陰生肌散組，每組6只。生理鹽水組腹腔注射生理鹽水0.5mL/只，卵白蛋白組腹腔注射10%卵白蛋白0.5mL/只，養(yǎng)陰生肌散組腹腔注射養(yǎng)陰生肌散0.5mL/只，隔日給藥，共3次。將每組豚鼠再分為2組，每組3只。其中一組于首次注射受試藥物后第14天靜脈注射受試藥物1mL/只,進(jìn)行攻擊，觀察攻擊后豚鼠的反應(yīng)；另一組于首次注射受試藥物后第21天同法進(jìn)行攻擊并觀察。根據(jù)豚鼠全身過(guò)敏反應(yīng)癥狀進(jìn)行分級(jí)，并對(duì)全身過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行等級(jí)評(píng)價(jià)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，生理鹽水組豚鼠均未出現(xiàn)全身過(guò)敏癥狀，致敏率為0%；卵白蛋白組豚鼠均出現(xiàn)全身過(guò)敏癥狀，致敏率為100%，反應(yīng)強(qiáng)度為極強(qiáng)陽(yáng)性，多因過(guò)敏性休克死亡；養(yǎng)陰生肌膜組在第14天攻擊時(shí)有2只豚鼠出現(xiàn)不安、立毛和發(fā)抖癥狀，致敏率為30%，根據(jù)全身過(guò)敏反應(yīng)癥狀等級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判斷，養(yǎng)陰生肌散全身過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度為弱陽(yáng)性，表明養(yǎng)陰生肌散全身過(guò)敏反應(yīng)癥狀輕微，見(jiàn)表 2—5。

表2 過(guò)敏反應(yīng)分級(jí)及癥狀

表3 全身過(guò)敏反應(yīng)癥狀等級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

表4 各組豚鼠全身性過(guò)敏反應(yīng)結(jié)果

表5 養(yǎng)陰生肌散全身性過(guò)敏反應(yīng)致敏率

3 討論

決定一個(gè)藥物能否用于臨床的首要條件是其安全性，本研究對(duì)養(yǎng)陰生肌散的安全性進(jìn)行了考察。急性毒性實(shí)驗(yàn)的目的是推測(cè)受試藥物急性毒性的強(qiáng)弱，同時(shí)也可為長(zhǎng)期毒性、生殖毒性、致突變等實(shí)驗(yàn)提供劑量的選擇和有關(guān)毒性信息，還可以推測(cè)受試藥物毒性發(fā)生的速度和持續(xù)時(shí)間。因此，急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)了解未知藥物的毒性是非常必要的。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，養(yǎng)陰生肌散LD50未測(cè)出，按照毒理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，LD50＞1 000mg/kg，屬無(wú)毒性物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)劑量增加到12 000mg/kg仍未出現(xiàn)毒性，表明養(yǎng)陰生肌(膜)散對(duì)小鼠安全無(wú)毒，局部使用安全。

全身過(guò)敏反應(yīng)是機(jī)體免疫反應(yīng)的一種特殊表現(xiàn)。當(dāng)藥物作為抗原或半抗原初次進(jìn)入體內(nèi)，通過(guò)免疫反應(yīng)刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。當(dāng)相同藥物再次進(jìn)入體內(nèi)時(shí)，抗原與抗體結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物，促使肥大細(xì)胞釋放組胺等物質(zhì)，導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷，從而引起動(dòng)物局部組織水腫，出現(xiàn)搔鼻、立毛、呼吸困難、窒息、痙攣等癥狀，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)休克死亡。全身過(guò)敏實(shí)驗(yàn)用于考察注射用及含特異性蛋白質(zhì)較多的中草藥注射劑，是評(píng)價(jià)臨床用藥安全性的指標(biāo)。

養(yǎng)陰生肌(膜)散的急性毒性實(shí)驗(yàn)及全身過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)基本符合規(guī)定要求，本實(shí)驗(yàn)為臨床安全用藥提供了依據(jù)。

［1］ 國(guó)家藥典編輯委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：277.

［2］ 梁愛(ài)華，李春英，王金華，等.雄黃的毒性研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2011，36(14)：1889-1894.

［3］ 呂圭源，王一濤.中藥新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：366-376.

［4］ 王北嬰，李儀奎.中藥新藥研制開(kāi)發(fā)技術(shù)與方法［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001：788-808.

［5］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：112-119.

［6］ 陳忠偉，劉偉，趙武.復(fù)方中藥制劑對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)［M］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2007，34(6)：112-113.

［7］ 翁謝川，樊星，王青秀，等.藥物安全性評(píng)價(jià)中豚鼠全身過(guò)敏試驗(yàn)方法的研究［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2012，22(5)：51-55.