葉葆衡 連玉華

（1肉食品安全生產(chǎn)技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廈門361100；2龍海華美種豬場(chǎng)363100）

一起豬藍(lán)耳病的診治報(bào)告

朱蘇琴1葉葆衡1何宗亮2連玉華2

（1肉食品安全生產(chǎn)技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廈門361100；2龍海華美種豬場(chǎng)363100）

漳州某豬場(chǎng)發(fā)生一起以呼吸道疾病為主要癥狀的傳染病，應(yīng)用免疫金標(biāo)試紙檢測(cè)患豬血清抗體和PCR檢測(cè)抗原，結(jié)合生豬疫苗免疫、臨床癥狀和病理變化，確診為豬藍(lán)耳病，同時(shí)應(yīng)用該場(chǎng)健康母豬高免血清治療，取得很好的效果。

豬藍(lán)耳病免疫金標(biāo)試紙RT-PCR

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的以母豬繁殖障礙、仔豬斷乳前后高死亡率、育成豬呼吸道疾病為主要特征的傳染病[1]。該病1987年首次發(fā)現(xiàn)于美國(guó)，隨后北美、歐洲及亞洲各國(guó)和地區(qū)也相繼報(bào)道[2]。1996年，我國(guó)郭寶清等首次分離到PRRSV[3]。之后近20年來此病相繼在我國(guó)各地蔓延流行。2006年，發(fā)生變異的高致病性藍(lán)耳病即“豬高熱病”在我國(guó)各地暴發(fā)流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成很大損失[4]。

有研究表明，該病與其他傳染病一樣所引起母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道癥狀有著非常類似的臨床表現(xiàn)，只憑臨床癥狀和病理變化難以判定，必須結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)才能做出正確的診斷。目前，已經(jīng)建立的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有病毒的分離與鑒定、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)（IPMA）、間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等。而我們采用免疫膠體金技術(shù)檢測(cè)結(jié)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR/RT-PCR）技術(shù)快速準(zhǔn)確地診斷了一起由PRRSV引起的豬繁殖與呼吸綜合征?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 發(fā)病情況

福建漳州某豬場(chǎng)，飼養(yǎng)一批外三元60～70日齡小豬，該批小豬的免疫程序：14日齡接種藍(lán)耳病弱毒苗和圓環(huán)病毒病、支原體病滅活苗、20日齡接種豬瘟弱毒苗、40日齡接種偽狂犬病弱毒苗、50日齡接種口蹄疫滅活苗、55日齡接種豬瘟弱毒疫苗。由于冷空氣襲擊，有3欄小豬出現(xiàn)以咳嗽喘氣為主要癥狀，伴有體溫升高，開始以感冒治療，用阿莫西林后大部分小豬痊愈，但仍有5%～6%小豬體溫升高至40～41℃，精神沉郁，食欲下降或不食，嗜睡；眼瞼水腫；出現(xiàn)咳嗽、氣喘甚至呼吸困難等癥狀；背部皮膚發(fā)紅，有出血點(diǎn)，耳尖部發(fā)紺，腹下和四肢內(nèi)側(cè)處皮膚有出血點(diǎn)或紫紅色斑塊；病情嚴(yán)重者臥地不起，呼吸困難，肌肉震顫，后肢麻痹無力，兩腳劃地不能站立或共濟(jì)失調(diào)。急性者發(fā)病3～5 d死亡，并有10多頭患豬死亡。發(fā)病率10%左右，病死率低。

2 病理變化

從3個(gè)欄各取1頭患豬進(jìn)行剖檢，主要表現(xiàn)為全身內(nèi)臟器官、黏膜、漿膜等均有不同程度出血。胸腔積液；肺表面有散在出血點(diǎn)、水腫、肉變區(qū)，以心葉為多見的灶性暗紅色實(shí)變；肺門淋巴結(jié)呈深紅色腫脹、切面有彌漫性出血點(diǎn)；脾臟呈紫色，有少許的表面隆起結(jié)節(jié)狀梗死灶；腎呈土黃色，有一例表面可見針尖大小出血點(diǎn)。其余臟器末見明顯變化。

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

3.1 細(xì)菌學(xué)檢查無菌采集病死豬的脾、淋巴結(jié)等病料組織，接種于普通肉湯和血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)48 h，未見有細(xì)菌生長(zhǎng)。

3.2 抗體檢測(cè)采集3頭患豬血液，分別加入豬藍(lán)耳病（PRRS）抗體、豬偽狂犬?。≒R）抗體，豬瘟（CSF）抗體、豬圓環(huán)病毒（PCV-2）抗體金標(biāo)檢測(cè)試紙的加樣孔內(nèi)，室溫下放置30 min判定，結(jié)果見表1。

表1 各抗體金標(biāo)試紙檢測(cè)結(jié)果

根椐小豬疫苗免疫情況，豬體內(nèi)豬瘟、偽狂犬病、圓環(huán)病毒病、藍(lán)耳病的抗體都應(yīng)為陽(yáng)性，但檢測(cè)結(jié)果藍(lán)耳病抗體陰性，可能豬感染了藍(lán)耳病毒。

3.3 PCR/RT-PCR檢測(cè)無菌采集患豬肺、脾、淋巴結(jié)等研磨成勻漿制成混合樣，提取病毒RNA。鑒于抗體檢測(cè)顯示豬偽狂犬抗體、豬圓環(huán)抗體弱陽(yáng)性及豬藍(lán)耳抗體陰性的結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)室采用豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒2型PCR檢測(cè)試劑盒及豬藍(lán)耳病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行分子水平的抗原檢測(cè)，擴(kuò)增的目的片段大小分別為220 bp、1 060 bp、492 bp，結(jié)果顯示，豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型PCR檢測(cè)陰性，無特異性條帶；豬藍(lán)耳病毒RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性，擴(kuò)增出了預(yù)期492 bp的DNA片段（如圖1）。

圖1 PRRS-RT-PCR電泳圖

4 診斷

根據(jù)臨床癥狀、流行病學(xué)（免疫程序資料）、病理變化和實(shí)驗(yàn)室檢查等診斷該豬場(chǎng)發(fā)生的小豬傳染病為豬藍(lán)耳病。

5 防治措施

1）全場(chǎng)封鎖隔離消毒，對(duì)已發(fā)病的3欄豬舍每天2次帶豬消毒，同時(shí)將癥狀明顯患豬轉(zhuǎn)移到患豬舍進(jìn)行隔離治療。

2）選擇本場(chǎng)即將淘汰的健康母豬，采血后用金標(biāo)試紙測(cè)定，對(duì)藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性的2頭鍵康母豬放血制作高免血清，每頭豬肌注5 mL高免血清，有明顯病征的隔日再注射5 mL。

應(yīng)用高免血清后3 d，豬只采食、飲水、精神狀況都恢復(fù)正常。

6 討論

1）目前，豬各種傳染病的發(fā)生主要趨于隱性或非典型化，這給疾病的確診帶來了困難。在豬藍(lán)耳病診斷技術(shù)中，常見的ELISA、間接免疫熒光（IFA）、免疫過氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)（IPMA）、病原分離鑒定等檢測(cè)方法，需要大量?jī)x器設(shè)備、耗時(shí)長(zhǎng)、操作難度大、成本高，不能滿足基層的實(shí)際需要。該病診斷采用的膠體金抗體檢測(cè)技術(shù)，檢測(cè)結(jié)果說明應(yīng)用免疫金標(biāo)試紙檢測(cè)抗體（抗原），結(jié)合豬體疫苗免疫、臨床癥狀和病理變化，可以在短時(shí)間內(nèi)做出正確診斷，為有效治療取得寶貴時(shí)間，相比ELISA等其他方法來說，操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)費(fèi)用低，非常適用于基層技術(shù)人員現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)診斷使用。

2）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)已滲透到生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，使原本診斷十分困難的某些傳染病和遺傳病在分子水平上給我們快速、準(zhǔn)確的診斷提供了捷徑。PRRSV是引起豬呼吸與繁殖綜合征的直接病原，由于病毒粒子很?。ㄖ挥?5～65 nm）、在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不產(chǎn)生細(xì)胞病變、無血凝活性等原因，常規(guī)的病毒分離鑒定很困難。但是，PRRSV是單股正鏈RNA病毒，基因組很小，僅有15 kb，便于從核酸水平對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)和研究。該病例采用的RTPCR/PCR方法可以快速準(zhǔn)確檢測(cè)感染病變組織樣品中的病毒核酸。PRRS的一個(gè)生物學(xué)顯著特性是對(duì)巨噬細(xì)胞的親和性，特別是對(duì)豬肺巨噬細(xì)胞（PAM）的親和性。因此發(fā)病豬的肺部病毒含量最高。但為了檢測(cè)到其他病毒粒子如PRV、PCV-2病毒的存在，因此，該病例選取肺部、脾臟和淋巴結(jié)作為檢測(cè)病毒核酸的材料，從中只擴(kuò)增出了PRRS病毒沒有其他病毒預(yù)期長(zhǎng)度的DNA片段，這使得結(jié)果特異可靠更具有說服力。

3）豬繁殖與呼吸綜合征是一種病毒病，目前尚無藥物治療，只能采取隔離消毒和緊急免疫方法，緊急免疫會(huì)引起不少已感染病毒的豬只死亡，而該病例采取了應(yīng)用本場(chǎng)健康老母豬的高免血清治療取得了非常好的效果，而且治療成本低，值得推薦。

致謝本文承蒙廈門檢驗(yàn)檢疫局黃印堯老師審閱，特此致謝。

[1]Dea S,Rossow R.Current knowledge on the st uctural proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome（PRRSV）virus:co mparision of the North American and Europeanisolates[J].Arch Virol，2000，145：659-688.

[2]Eric S,Janneke M.The molecular biology of arterivirus[J] .JGen Virol，1998，79：961-979.

[3]Shen S,Meng X,Wesl y R,et al.Determination of the complete nucleotide sequence of a vaccine strai n of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and identification of the Nsp2 gene with a unique insertion[J].Arch Virol，,2000，145：871-883.

[4]邵衛(wèi)星，魏榮，祝麗.高致病性豬藍(lán)耳病的特點(diǎn)及防制[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2008，25（7）：44-45.

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1003-4331（2014）04-0066-02