孟翠紅，張福元

（1.山西運城農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 運城 044000；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)院，山西 太谷 030800）

發(fā)酵紅三葉草對肉仔雞飼料消化率的影響

孟翠紅1，張福元2

（1.山西運城農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 運城 044000；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)院，山西 太谷 030800）

為評價紅三葉草固態(tài)發(fā)酵物（RSF）對肉仔雞的飼料消化率及血液生化指標(biāo)的影響，采用單因素完全隨機試驗，設(shè)0.1%、0.2%、0.3%3個添加水平，用紅三葉草提取物作對比，選用1日齡健康艾維茵肉仔雞600只，分成5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)40只雞，試驗期為49 d。試驗結(jié)果表明，RSF 0.1%處理組顯著提高了脂肪的消化率（P＜0.05），對氮沉積的作用低于脂肪。RSF 0.1%處理組提高了生長前期（13～15 d）表觀代謝能，在生長后期（34～36 d）RSF 0.2%處理提高效果顯著（P＜0.05）。RSF有提高血清總蛋白、血糖及降低尿酸濃度的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），添加RSF對其他各項血液生化指標(biāo)影響不大。

紅三葉固態(tài)發(fā)酵；肉仔雞；血液生化指標(biāo)

紅三葉草也稱紅車軸草，為豆科三葉草屬多年生草本植物。大量研究表明，紅三葉不僅是優(yōu)良的豆科牧草，而且因其含有豐富的異黃酮類物質(zhì)，如紅車軸草素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A、大豆素等具有類似大豆異黃酮的藥用與保健作用[1-3]。異黃酮具有多種生理活性，主要有植物雌激素功能和抗氧化功能[4-5]。異黃酮類化合物屬植物雌激素，相關(guān)研究結(jié)果表明，異黃酮具有促進(jìn)動物生長、提高動物泌乳性能及促進(jìn)乳腺發(fā)育、增加產(chǎn)蛋、調(diào)節(jié)動物繁殖、增強機體免疫力等生理功能[6-8]。楊守鳳等發(fā)現(xiàn)，這類物質(zhì)還具有降血脂、對抗性激素依賴性腫瘤生長和抗癌等作用[9-10]。米曲霉固態(tài)發(fā)酵紅三葉草培養(yǎng)物富含異黃酮、各種消化酶、多糖等有益保健成分。陶浩等證實，異黃酮、各種消化酶和多糖等物質(zhì)單獨添加于飼料中都能提高動物生產(chǎn)性能和機體免疫力[11-13]。但未見米曲霉發(fā)酵紅三葉草培養(yǎng)物對動物生產(chǎn)性能方面的試驗報道。本試驗進(jìn)一步了解米曲霉對紅三葉草的發(fā)酵效果，認(rèn)識該發(fā)酵物對肉仔公雞生產(chǎn)性能的影響，從營養(yǎng)消化率指標(biāo)方面探討發(fā)酵物作用效果和機理，為固態(tài)發(fā)酵紅三葉生產(chǎn)富含異黃酮、消化酶的高效廉價的飼料添加劑提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

紅三葉草：購自甘肅岷海制藥有限公司，粉碎，過40目篩，測得總黃酮含量為2.2%。

紅三葉草固態(tài)發(fā)酵物（RSF）：在最佳發(fā)酵條件下利用米曲霉A.niger 3.314 8菌株（產(chǎn)纖維素酶）發(fā)酵紅三葉草兩周后，低溫干燥便可制得。測得含纖維素酶為2 000 U·g-1、果膠酶為1 560 U·g-1、糖化酶為396 U·g-1、酸性蛋白酶為196 U·g-1，米曲霉活菌數(shù)為5.3×106cfu·g-1，總黃酮為2.3%。

紅三葉草提取物：購自蘭州天萃生物技術(shù)有限公司，主要成分為刺芒柄花素、鷹嘴豆芽素A、染料木素及大豆素，總黃酮含量為98%。

1.2 試驗日糧

以玉米-豆粕為主要原料，按兩個階段配制試驗日糧，即為生長前期（0～21 d）和后期（22～49 d）。基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗設(shè)計

本試驗是以紅三葉固態(tài)發(fā)酵物RSF的添加水平為影響因素的單因素完全隨機試驗設(shè)計。選擇1日齡健康艾維茵肉仔公雛雞600只，肉仔雞平均體重為40.39±1.48 g·只-1（P＞0.05），隨機分為5個處理，每個處理3個重復(fù)，每40只雞為1個重復(fù)。5個試驗組日糧分別為基礎(chǔ)日糧（對照組），基礎(chǔ)日糧添加RSF0.1%，基礎(chǔ)日糧添加RSF0.2%，基礎(chǔ)日糧添加RSF 0.3%，基礎(chǔ)日糧添加紅三葉草提取物20mg·kg-1。試驗期為49d。

表1 肉仔雞基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗雞采用3層籠養(yǎng)，進(jìn)雞前5 d雞舍用福爾馬林熏蒸消毒。第1周室溫為33～35℃，第2周為30℃，3周后室溫保持在22℃。自由飲水和采食。在試驗雞7日齡，新城疫弱毒苗首免；14日齡，法氏囊疫苗飲水；21日齡，新城疫弱毒苗飲水二免，疫苗用量為2倍的首免。全程為自然環(huán)境條件下飼養(yǎng)，室內(nèi)24 h光照。整個試驗全程觀察雞群精神狀態(tài)和健康狀況，記錄每日采食量和病死數(shù)。

1.5 測定指標(biāo)及方法

分別在13～15、20～22、34～36日齡，采集糞樣要以重復(fù)組為單位，各組在以試驗期每天17:00收糞1次，連續(xù)收集3 d，糞樣-20℃保存。將3 d收集的各重復(fù)組的糞樣等比例混合，分成15份樣品。將樣品置于瓷盤內(nèi)，70℃烘箱內(nèi)烘干48 h，冷卻30 min，稱重，再繼續(xù)烘干2 h，直至恒重為止（＜0.01 g）。待糞樣烘后，粉碎機粉碎，過40目篩（孔徑0.45 mm），充分混勻后放入有磨口的廣口瓶中，貼上標(biāo)簽，用于測定表觀代謝能、氮沉積、表觀脂肪。取樣后，再將剩余糞樣置于105℃烘箱烘干至恒重（＜0.01 g），用于測定總能。日糧中各種養(yǎng)分消化率和日糧代謝能均采用內(nèi)源指示劑法（2N-HCl不溶灰分法）測定。養(yǎng)分消化率計算公式見式1。

式中：a-糞中某養(yǎng)分的百分含量；b-飼料指示劑的百分含量；c-飼料中某養(yǎng)分的百分含量；d-糞中指示劑的百分含量。

1.6 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件One Way ANONA進(jìn)行統(tǒng)計，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 對肉仔雞各日齡營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

RSF對肉仔雞各生長階段脂肪消化率的影響見表2，對各日齡表觀代謝能的影響見表3，對各日齡階段氮沉積的影響見表4。

表2 RSF對肉仔雞各生長階段脂肪消化率的影響 %

表3 RSF對肉仔雞各日齡表觀代謝能的影響MJ·kg-1

表4 RSF對肉仔雞各日齡階段氮沉積的影響

由表2可見，RSF 0.1%處理組和紅三葉草提取物提高了肉仔雞13～15日齡脂肪的消化率，與對照組相比差異顯著（P＜0.05），與另外兩個水平RSF處理組差異不顯著（P＞0.05）。20～22日齡，RSF處理組有提高脂肪消化率的趨勢，但與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。紅三葉草提取物可顯著提高脂肪消化率，與對照組相比差異顯著（P＜0.05），但與RSF 3個水平添加組差異不顯著（P＞0.05）。RSF 0.1%處理顯著提高了肉仔雞34～36日齡脂肪消化率，與對照組差異顯著（P＜0.05），與其他各組差異不顯著（P＞0.05）。紅三葉草提取物可顯著提高34～36日齡肉仔雞脂肪消化率（P＜0.05）?？偟膩砜?，RSF的添加可提高肉仔雞脂肪的消化率。

由表3可見，RSF 0.1%組能夠顯著提高肉仔雞13～15日齡代謝能，與對照組和RSF 0.3%組差異顯著（P＜0.05），與RSF 0.2%組和紅三葉草提取物組差異顯著（P＞0.05）。各RSF組在20～22日齡無顯著差異（P＞0.05）。紅三葉草提取物與試驗理組對照組差異顯著（P＜0.05），與RSF組差異不顯著（P＞0.05）。RSF 0.2%組顯著提高了34～36日齡肉仔雞表觀代謝能（P＜0.05），與對照組及RSF 0.3%組差異顯著（P＜0.05），與RSF 0.1%組和紅三葉草提取物組差異不顯著（P＞0.05）。

由表4可見，各組間13～15日齡肉仔雞氮沉積無顯著差異（P＞0.05）。在20～22日齡階段，紅三葉草提取物組有提高氮沉積的趨勢，但與各組間無顯著差異（P＞0.05）。RSF 0.3%組提高了34～36日齡肉仔雞的氮沉積，與紅三葉草提取物組無顯著差異（P＞0.05），與對照組及另外兩個水平RSF組差異顯著（P＜0.05）。但總的來看，RSF提高了氮沉積，但差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 對肉仔雞各日齡血液生化指標(biāo)的影響

RSF對22、36和49日齡肉仔雞血液生化指數(shù)的影響見表5、6和7。

由表5、6和7可見，添加RSF對22、36、49日齡肉仔雞中各組之間的總蛋白、白蛋白、血糖、尿酸、膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、底密度脂蛋白、球蛋白和血蛋白/球蛋白差異不顯著（P＞0.05）。

表5 添加RSF對22日齡肉仔雞血液生化指數(shù)的影響

表6 添加RSF對36日齡肉仔雞血液生化指數(shù)的影響

表7 添加RSF對49日齡肉仔雞血液生化指數(shù)的影響

3 討論

3.1 對肉仔雞各日齡營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

安永義報道，在玉米-豆粕日糧中添加消化酶，并對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率沒有產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05），消化酶的添加可以降低抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)水平和腸道食糜黏性，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[13]。此外，腸道有害微生物可通過腸道食糜黏度的降低來減少其滋生，而有害菌的存在與宿主在營養(yǎng)吸收上存在競爭，尤其是脂肪的利用[14]。周業(yè)飛在基礎(chǔ)日糧中分別添加不同水平的那西肽預(yù)混劑，進(jìn)行肉仔雞飼養(yǎng)試驗，研究那西肽對肉仔雞生長性能及日糧營養(yǎng)消化率的影響，結(jié)果表明，那西肽可以顯著提高飼料消化率（P＜0.05），對促進(jìn)肉仔雞生長具有一定的劑量依賴性。這與安永義和Smits等的研究結(jié)果一致。本試驗為含米曲霉菌的未發(fā)酵紅三葉草，主要以纖維素酶為主，可能是因為纖維素酶可降低抗?fàn)I養(yǎng)因子的作用來提高某些營養(yǎng)的利用率，另外米曲霉菌在腸道中也可發(fā)揮作用。

3.2 對肉仔雞各日齡血液生化指數(shù)的影響

血液成分在一定程度上能反映動物體內(nèi)代謝及健康狀況，血液總蛋白在某種程度上反映動物蛋白質(zhì)營養(yǎng)狀況，良好的營養(yǎng)狀況可以提高血漿蛋白含量，使血漿蛋白維持在一個相對較高的水平上，血清蛋白是組織合成的原料，特別是清蛋白和α-球蛋白的合成。從表5、6、7可見，RSF 0.2%組提高了肉仔雞0～21和36～49 d血清總蛋白，與對照組相比提高比例為5.95%和8.44%，對各生長階段血清總蛋白水平統(tǒng)計分析表明，各組間在血清總蛋白水平上差異均不顯著（P＞0.05）。

血清白蛋白和球蛋白的含量高低與動物抗病力有關(guān)，本試驗雖發(fā)現(xiàn)RSF的添加提高了成活率，卻在白蛋白和球蛋白指標(biāo)上沒有反應(yīng)出來，各組間差異不顯著（P＞0.05）。從本試驗數(shù)據(jù)上看，在各試驗組內(nèi)血液生化指標(biāo)個體偏差較大，RSF 0.1%和0.2%組雖有提高血清總蛋白和降低尿酸的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），可能是個體差異較大所致。另外血液生化指標(biāo)表明，米曲霉菌對肉仔雞生理機能沒有損傷作用。Steenfeldt等對2 kg的石歧雜雞用加酶飼料強飼后4 h采血，測定血液中葡萄糖和游離氨基酸的含量，發(fā)現(xiàn)加酶組血糖和總的氨基酸水平均高于對照組[16]。本試驗RSF 0.1%、0.2%組提高了肉仔雞35日齡前生長階段蛋白質(zhì)沉積，但差異不顯著（P＞0.05），這點與上述差異顯著的報道不一致。動物機體內(nèi)脂類代謝情況可通過血清甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的指標(biāo)得以反映。從全程來看，各組間無顯著差異（P＞0.05），這與Um等的研究結(jié)果一致[16]。說明RSF對肉仔雞脂類代謝影響不大，或者在血液指標(biāo)上無表現(xiàn)出來。

Um等發(fā)現(xiàn)添加淀粉酶提高血糖濃度，安永義卻未發(fā)現(xiàn)加酶使血糖濃度升高[17]。本試驗RSF的添加有提高肉仔雞35日齡血糖濃度的趨勢，但各處理組與對照組差異不顯著（P＞0.05），有研究表明血糖濃度高是動物能量代旺盛的表現(xiàn)，Verma等發(fā)現(xiàn)，添加酶使肉鴨IGF-Ⅱ水平提高近2倍，血糖水平顯著降低[18]。而本試驗認(rèn)為血糖升高可能是由于RSF中所含糖化酶和纖維素酶促進(jìn)了高分子碳水化合物的單糖分解過程。有關(guān)酶添加對血液血糖濃度的影響結(jié)果不一致，造成不一致的原因可能與采血時雞生理狀況及應(yīng)激有關(guān)。另一方面作者認(rèn)為酶作用效果在血液生化指標(biāo)上并不一定能很好的反應(yīng)出來。

禽類蛋白質(zhì)分解的產(chǎn)物是尿酸，當(dāng)禽類不能從食物中獲得必需氨基酸時，將引起體蛋白的分解，補飼以獲得這種氨基酸，導(dǎo)致尿酸排出量增加。因此，蛋白質(zhì)的品質(zhì)可通過尿酸的排出量來評價。血液中尿酸水平的降低說明蛋白質(zhì)的分解代謝降低，添加粗酶制劑可以增加限制性氨基酸的吸收，從而提高蛋白質(zhì)的品質(zhì)，增加蛋白質(zhì)在體內(nèi)的沉積。從各生長階段血清尿酸含量來看，3個水平RSF添加組均有降低0～21日齡肉仔雞尿酸含量的趨勢，RSF 0.2%、0.3%組有降低22～35日齡肉仔雞血清尿酸濃度的趨勢，但各組間差異不顯著（P＞0.05），36～49日齡肉仔雞尿酸濃度無下降趨勢，全期各組間在尿酸含量上差異不顯著（P＞0.05）。

4 結(jié)論

4.1 RSF對各生長期營養(yǎng)消化率的影響

RSF 0.1%組能顯著提高脂肪消化率（P＜0.05），脂肪消化率提高是由于RSF 0.1%組降低了腸道內(nèi)有害菌，使腸道變薄以及維持腸道膽汁酸鹽的濃度，從而有利于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。對氮沉積的作用低于脂肪。在生長前期，RSF 0.1%組的表觀消化能最佳；在生長后期，RSF 0.2%組的表觀消化能最佳。

4.2 RSF對血液生化指標(biāo)的影響

RSF有提高血清總蛋白，血糖及降低尿酸濃度的趨勢，但差異不顯著（P＜0.05），添加RSF對其他各項血液生化指標(biāo)影響不顯著（P＞0.05）。

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Effects of Redclover-solidstate-fermentation on Digestibility of Feed in Broilers

MENG Cuihong1,ZHANG Fuyuan2

（1.Agricultural Vocational and Technology College of Yuncheng Shanxi,Yuncheng 044000,Shanxi China;
2.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Shanxi Agricultural University,Taigu 030801,Shanxi China）

To study the effects of redclover-solidstate-fermentation(RSF)on digestibility of feed in broilers,six hundred one-day-old broilers were divided into 5 groups randomly.The control group was fed with basal diet,while the four experiment groups were fed with the basal diet added 0.1%,0.2%,0.3%redclover-solidstate-fermentation products(RSF)and red clover extract.The experiment lasted for 49 days.The results showed that,0.1%RSF improved the digestibility of fat significantly(P＜0.05).But the nitrogen deposition is not as distinct as fat.0.1%RSF improved the apparent metabolizable energy at the early stage of growth(13-15 d),and 0.2%RSF had a signifixant effect at the later stage of growth(34-36 d)(P＜0.05).RSF could improve the total serum protein and blood glucose.It could reduce the concentration of uric acids,but no obvious difference(P＞0.05).Added RSF had little effect on the oblood of other biochemicalindexes.

redclover-solidstate-fermentation;broiler;blood biochemical indexes

S831.5

A

1001-0084（2014）12-0006-06

2014-09-30

孟翠紅（1972-），女，山西運城人，碩士，講師，主要從事動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)方面的教學(xué)與研究。