楊 帆 王淑美林捷欣

(廣東藥學(xué)院，廣州510006)

葛根總黃酮提取工藝的考察※

楊 帆 王淑美*林捷欣

(廣東藥學(xué)院，廣州510006)

目的 篩選出從野葛根中提取葛根總黃酮的最佳工藝條件。方法 運(yùn)用單因素考察以及正交試驗(yàn)法對(duì)葛根總黃酮的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化；利用紫外分光光度計(jì)測(cè)量葛根總黃酮的含量；利用HPLC測(cè)量提取出的葛根素的含量；以測(cè)量得到的葛根總黃酮及葛根素的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選出葛根總黃酮的最佳提取工藝。結(jié)果 以10倍量的70%乙醇提取3次，每次1.5h，為葛根總黃酮的最佳提取工藝條件。結(jié)論 該提取工藝成本低，重現(xiàn)性良好，適合于生產(chǎn)應(yīng)用。

葛根；總黃酮；葛根素；提取工藝；中藥

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata或甘葛藤(粉葛)Pueraria thomsonii的干燥根，為臨床常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽(yáng)止瀉，通經(jīng)活絡(luò)等作用，葛根的主要活性成分為異黃酮類化合物，如葛根素，大豆苷、大豆苷元等。現(xiàn)代藥理研究表明，葛根提取物和葛根黃酮有防治糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的作用［1］，對(duì)心血管系統(tǒng)［2］、免疫系統(tǒng)［3］的疾病也有較好的治療效果。

為了更好地發(fā)揮出葛根的藥用功效，本實(shí)驗(yàn)采用單因素考察和正交設(shè)計(jì)法，以葛根總黃酮含量及葛根素的含量為檢測(cè)指標(biāo)，篩選出葛根總黃酮的最佳提取工藝。

1 實(shí)驗(yàn)材料

葛根，購(gòu)自廣州至信中藥飲片有限公司，批號(hào)：121101，經(jīng)鑒定為豆科植物野葛的干燥根。葛根素(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)。甲醇為色譜級(jí)，其余試劑均為分析純。UV2450紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)，RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，DK-S22恒溫水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 葛根素對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品2mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，既得葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取此儲(chǔ)備液2、5、10、15、20、25、30μl注入高效液相色譜儀，按擬定的色譜條件測(cè)定，將峰面積與含量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=3560690.32x+19719.16，r=0.99999，葛根素在0.164～2.460ug時(shí)呈良好的線性關(guān)系。

2.2 葛根總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品5.01mg，置于25ml容量瓶中，加30%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，既得葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，分別配制濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14g／ml的對(duì)照品溶液，以95%乙醇做參比溶液，在250nm處測(cè)定吸光度，以吸光度(A)為橫坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y=0.1634x+ 0.0034，r=0.9996，線性范圍為0.02～0.14mg／ml。

2.3 單因素考察

2.3.1 不同溶劑濃度的考察 取干燥至恒重的葛根粉末10g (3份)，分別加入50%、70%、90%的乙醇，浸泡30min，加熱回流提取2次，每次8倍量的醇溶液加熱回流1h，過(guò)濾，合并2次所得濾液，用相應(yīng)醇溶液定容到200ml，取樣，測(cè)定葛根總黃酮及葛根素的含量，結(jié)果見(jiàn)圖1，得70%的醇提取所得葛根總黃酮及葛根素的含量最大。

圖1 不同溶劑濃度的考察圖

2.4 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 考慮到各因素之間的相互影響，為了獲得最佳工藝條件，利用正交法“均衡分散”的特點(diǎn)?？紤]影響乙醇回流提取的溶劑用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為這3個(gè)因素為考察因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平。以測(cè)得的回流提取樣品中總黃酮含量葛根素含量為主要考察指標(biāo)。根據(jù)單因素試驗(yàn)初篩選結(jié)果，選用L9(34)正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)因素水平見(jiàn)表1所示。

表1 因素水平表

取干燥至恒重的葛根粉末10g(9份)，以70%的乙醇為提取溶劑。在平行操作條件下，按照L9(34)正交表安排，回流提取，提取液過(guò)濾，合并，濃縮后，用70%的乙醇定容到200ml容量瓶中，備用。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果見(jiàn)下表，由表2可知，3個(gè)影響因素的影響從大到小依序?yàn)椋禾崛〈螖?shù)、提取時(shí)間、溶劑用量。由表3可以看出，因素A、B、C對(duì)葛根總黃酮及葛根素的含量均有顯著性影響，故最佳提取工藝為：A3B3C3，即10倍量的70%乙醇，加熱回流提取3次，每次90min。由于正交表設(shè)計(jì)中沒(méi)有出現(xiàn)最佳提取工藝，故增加驗(yàn)證性試驗(yàn)來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

表2 L9（34）正交設(shè)計(jì)分析表（以葛根總黃酮含量為指標(biāo)）(n，%)

表3 方差分析表（以葛根總黃酮含量為指標(biāo)）

2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為確保提取工藝的重現(xiàn)性及可行性，對(duì)最佳工藝A2B3C3進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，以葛根總黃酮及葛根素為考察指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表4，經(jīng)測(cè)定，此工藝所得結(jié)果明顯高于正交表中各數(shù)據(jù)，且重現(xiàn)性較好，提取工藝條件基本穩(wěn)定。

表4 最優(yōu)提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)(%)

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)單因素與正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法，以葛根素和葛根總黃酮為指標(biāo)，來(lái)篩選出葛根總黃酮的最優(yōu)提取工藝，并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，使提取工藝更加科學(xué)合理，最大程度地降低了生產(chǎn)成本。最終確定出的最佳提取工藝條件是加10倍量的70%的乙醇，提取3次，每次90min。

［1］曾明，鄭水慶，陶凱忠，等.葛根提取物對(duì)糖尿病大鼠腎臟功能的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13(8)：44-46.

［2］張仁剛，劉福明.葛根的心血管藥理作用研究進(jìn)展［J］.中藥材，2001，24(7)：70-72.

［3］白群華，李文明，劉洪濤，等.葛根素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)N9小膠質(zhì)細(xì)胞激活的抑制作用［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2010，26(3)：29-32.

Study on the Process for Extraction of Total Flavonoids from Radix of Pueraria

Yang Fan Wang Shumei?Lin Jiexin
（guangdong Pharmaceutical University，guangzhou，guangdong，China 510006）

Objective In order to select the best process of extraction of the total flavonoids in Radix puerariae.Methods The extraction process of Radix Puerariae was studied by single factor and orthogonal design.Concentration of total flavonoids was measured by the UV spectrophotometer，and concentration of puerariae was measured by HPLC.The content of puerariae and the total flavonoids were used as indexes to evaluate the optimal extracting conditions.Results 60%alcohol as solvent，8 times of alcohol amount，3 times of extraction and 1hour per time.Conclusion The results indicates that this extraction process have a low cost and a good reproducibility，suitable for production applications.

Radix puerariae；Puerariae；Total flavonoids；Process for extraction；Chinese herbs

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.03.101

1672-2779(2014)-03-0156-02

蘇 玲 本文校對(duì)：梁生旺

2013-10-17)

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目［No：81073024，81274060］*通訊作者