帥小雪，李文娟，劉丹鳳，王玉婷，朱科學(xué)，謝明勇

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

黑靈芝多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞甘露糖受體的影響

帥小雪，李文娟，劉丹鳳，王玉婷，朱科學(xué)，謝明勇*

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

目的：研究黑靈芝多糖（polysaccharides from Ganoderma atrum，PSG-1）對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞甘露糖受體（mannose receptor，MR，CD206）的影響。方法：不同質(zhì)量濃度的PSG-1作用巨噬細(xì)胞后，用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面MR的表達(dá)，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)巨噬細(xì)胞MR的mRNA表達(dá)水平；以MR抑制劑甘露聚糖預(yù)處理細(xì)胞后加入PSG-1，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，酶聯(lián)免疫法測(cè)定培養(yǎng)上清液中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的含量，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞TNF-α、IL-1β的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：PSG-1可上調(diào)巨噬細(xì)胞表面MR的表達(dá)及MR mRNA水平；與單獨(dú)PSG-1處理組相比，甘露聚糖預(yù)處理可明顯抑制PSG-1增強(qiáng)的巨噬細(xì)胞吞噬功能和誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-1β，對(duì)TNF-α的分泌則無(wú)影響。結(jié)論：MR能部分介導(dǎo)PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。由此推測(cè)，MR可能是PSG-1發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫作用的受體之一。

黑靈芝多糖；巨噬細(xì)胞；甘露糖受體；吞噬功能；細(xì)胞因子

黑靈芝既是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用真菌也是民間常見(jiàn)的食品配料，它具有多方面的生物活性。研究表明食用黑靈芝可補(bǔ)腎強(qiáng)精、延緩衰老、增強(qiáng)免疫力，對(duì)腫瘤、炎癥、糖尿病等有很好的療效[1]。現(xiàn)代研究認(rèn)為，從黑靈芝中提取的水溶性成分黑靈芝多糖是黑靈芝生物學(xué)作用的主要功效成分[2]。多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗輻射、降血糖、降血脂、保肝等多種功能[3]，其中多糖的免疫調(diào)節(jié)作用是多糖類物質(zhì)的最基本作用，研究發(fā)現(xiàn)多糖激活免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用是通過(guò)與細(xì)胞表面的受體相結(jié)合而介導(dǎo)免疫反應(yīng)[4]。

甘露糖受體（mannose receptor，MR，CD206）屬于C型凝集素樣受體，是鈣依賴性Ⅰ型跨膜蛋白受體，可識(shí)別和結(jié)合以D-甘露糖、L-巖藻糖和N-乙酰葡萄糖胺等糖殘基為末端的糖類物質(zhì)[5]。本實(shí)驗(yàn)室從黑靈芝中分離純化出一種由甘露糖、半乳糖和葡萄糖組成的水溶性黑靈芝多糖（polysaccharides from Ganoderma atrum，PSG-1），3 種單糖的物質(zhì)的量比為1∶1.28∶4.91[6]。前期研究已證明PSG-1具有調(diào)節(jié)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞免疫功能的作用[7]，甘露糖作為PSG-1的三大組分之一，提示PSG-1與MR具有潛在的結(jié)合能力。但是PSG-1對(duì)機(jī)體免疫的調(diào)節(jié)作用是否與MR結(jié)合有關(guān)，含有甘露糖的PSG-1是否可作為MR的候選配體從而激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，這些內(nèi)容仍有待進(jìn)一步的研究。因此，在前期研究的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)采用體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，研究PSG-1對(duì)巨噬細(xì)胞MR的影響及其是否通過(guò)MR影響細(xì)胞的吞噬功能和細(xì)胞因子的分泌。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

BALB/c清潔級(jí)小鼠，雌性，體質(zhì)量（22±2）g，購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房；水溶性黑靈芝多糖PSG-1（純度＞99.8%）由本實(shí)驗(yàn)室自制。

RPMI-1640培養(yǎng)基 北京索萊寶科技有限公司；胎牛血清 美國(guó)HyClone公司；甘露聚糖 美國(guó)Sigma公司；FITC-大鼠抗小鼠CD206抗體 英國(guó)AbD Serotec公司；異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖（FITC-dextran）美國(guó)Sigma公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒 美國(guó)Fermentas公司；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒 北京全式金公司；小鼠腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA試劑盒 武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Varioskan Flash多功能酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司；3K15-高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma 公司；FACSCaliburTM流式細(xì)胞儀 美國(guó)Becton Dickinson公司；MyCycler PCR擴(kuò)增儀、ChemiDoc XRS+凝膠顯像系統(tǒng) 美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離、純化及培養(yǎng)

小鼠分籠飼養(yǎng)于空調(diào)溫室內(nèi)，溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度50%～60%，自動(dòng)調(diào)控晝夜各12 h，飼料喂養(yǎng)，自由飲水，實(shí)驗(yàn)前靜養(yǎng)1 周。小鼠頸椎脫臼處死，75%乙醇中浸泡3～5 min，取出小鼠，至于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，腹腔注入6～8 mL預(yù)冷的RPMI-1640培養(yǎng)基，用棉球輕揉腹部2～3 min后吸出腹腔液置于離心管中，重復(fù)洗2 次，收集以上培養(yǎng)基，1 400 r/min離心5 min，棄上清液收集巨噬細(xì)胞，用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基重懸巨噬細(xì)胞并接種于培養(yǎng)瓶中，置于CO2培養(yǎng)箱（5% CO2、37 ℃）培養(yǎng)4 h后，輕輕吸棄培養(yǎng)液，用RPMI-1640培養(yǎng)基洗去未貼壁細(xì)胞，重復(fù)洗滌2 次，即得到純化的腹腔巨噬細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)其活性（＞95%），分別按每孔1×106個(gè)細(xì)胞接種于6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。

1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨噬細(xì)胞表面MR的表達(dá)

不同質(zhì)量濃度PSG-1刺激6 孔板中細(xì)胞24 h后進(jìn)行收集，移入標(biāo)記好的 EP管中，1 400 r/min離心5 min，棄盡培養(yǎng)液，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌細(xì)胞2 次，加100 μL PBS重懸細(xì)胞；加入10 μL FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD206抗體，同型對(duì)照管加入10 μL對(duì)照試劑FITC-IgG2a，4 ℃避光孵育30 min；孵育結(jié)束后，用PBS洗2 次，去除游離的抗體；重懸細(xì)胞成單個(gè)細(xì)胞懸液，將細(xì)胞液定量在1 mL左右，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，記錄各標(biāo)本的陽(yáng)性細(xì)胞百分率。

1.3.3 反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）檢測(cè)巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平

細(xì)胞處理方法同1.3.2節(jié)，收集各組細(xì)胞以Trizol法提取總RNA，在20 μL反應(yīng)體系中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄為cDNA，每組取2 μL cDNA 用于PCR擴(kuò)增，將得到PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳，電泳后的凝膠通過(guò)凝膠成像儀觀察，并對(duì)條帶進(jìn)行灰度分析，以β-actin為內(nèi)參，測(cè)定其mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.4 FITC-dextran測(cè)定巨噬細(xì)胞吞噬功能

用甘露聚糖2.5、5.0、10.0 mg/mL分別預(yù)處理巨噬細(xì)胞30 min，再予以160 μg/mL PSG-1刺激，另設(shè)空白對(duì)照組和160 μg/mL PSG-1組，刺激細(xì)胞24 h后棄去培養(yǎng)液并以PBS洗滌2 次，加100 μL PBS重懸細(xì)胞，加入FITC-dextran（5 mg/mL）2 μL，37 ℃繼續(xù)孵育1 h。用PBS終止反應(yīng)，洗滌細(xì)胞2次，并重懸細(xì)胞。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞對(duì)FITC-dextran的吞噬作用。

1.3.5 ELISA法測(cè)定TNF-α、IL-1β的含量

細(xì)胞處理方法同1.3.4節(jié)，刺激結(jié)束后，收集巨噬細(xì)胞上清液，采用ELISA法測(cè)定TNF-α、IL-1β的含量，具體操作方法參照相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.6 RT-PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)水平

細(xì)胞處理方法同1.3.4節(jié)，處理后的各組細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR，以β-actin為內(nèi)參，測(cè)定TNF-α、IL-1β mRNA的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)中用到的引物序列及退火溫度如表1所示。

表1 引物序列及退火溫度Table1 Primer sequences and annealing temperatures

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用GraphPad Prism 5.0軟件作圖，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS Statistics 19.0對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05時(shí)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面MR表達(dá)的影響

圖1 PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面MR表達(dá)的影響Fig.1 Effect of PSG-1 on the expression of MR on the surface of mouse peritoneal macrophages

使用FITC-大鼠抗小鼠CD206抗體對(duì)巨噬細(xì)胞表面MR進(jìn)行標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞率以反映PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面MR表達(dá)的影響。如圖1所示，正常巨噬細(xì)胞表面有MR的表達(dá)，加入PSG-1后，細(xì)胞表面MR表達(dá)呈劑量依賴性的增加，其中160 μg/mL PSG-1組比空白對(duì)照組上升了26.71%。

2.2 PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平的影響

如圖2所示，RT-PCR進(jìn)一步檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與流式細(xì)胞儀檢測(cè)的結(jié)果相似，加入PSG-1處理細(xì)胞后，MR mRNA表達(dá)量隨著PSG-1質(zhì)量濃度的升高而上升。

圖2 PSG-1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平的影響Fig.2 Effect of PSG-1 on the mRNA expression level of MR in mouse peritoneal macrophages

2.3 MR抑制劑對(duì)PSG-1誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

圖3 PSG-1通過(guò)MR影響小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬FITC-dextran的能力Fig.3 E ffect of PSG-1 on the phagocytosis of FITC-dextran by mouse peritoneal macrophages via MR

流式細(xì)胞儀檢測(cè)各處理組細(xì)胞吞噬FITC-dextran的能力，如圖3所示，與空白對(duì)照組相比，PSG-1能顯著增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬FITC-dextran的能力；預(yù)先給予甘露聚糖2.5、5.0、10.0 mg/mL預(yù)處理細(xì)胞30 min后，再予以PSG-1作用，與PSG-1單獨(dú)刺激相比，細(xì)胞的吞噬能力顯著或極顯著下降，且10.0 mg/mL甘露聚糖處理組對(duì)PSG-1誘導(dǎo)的細(xì)胞吞噬能力抑制作用最強(qiáng)。

2.4 MR抑制劑對(duì)PSG-1誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的影響

由表2可知，正常腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β的含量極低，PSG-1刺激后上清液中TNF-α和IL-1β的含量極顯著增加，遠(yuǎn)高于空白對(duì)照組；提前30 min給予甘露聚糖2.5、5.0、10.0 mg/mL預(yù)處理細(xì)胞后再加入PSG-1，與PSG-1單獨(dú)刺激相比，IL-1β的含量顯著或極顯著降低，TNF-α的含量稍有降低，但與PSG-1單獨(dú)刺激相比無(wú)顯著差異。

表2 甘露聚糖對(duì)PSG-1誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF--α、IL--1β的影響Table2 Effect of PSG-1 on the secretion of TNF- and IL-1 in mouse peritoneal macrophages via MR

2.5 MR抑制劑對(duì)PSG-1誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β mRNA的表達(dá)水平的影響

圖4 甘露聚糖對(duì)PSG-1誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF--α、IL--1β mRNA表達(dá)水平的影響Fig.4 Effect of PSG-1 on the mRNA expression levels of TNF-α and IL-1β in mouse peritone al macrophages via MR

如圖4所示，空白對(duì)照組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β mRNA的水平較低，給予PSG-1刺激后，TNF-α、IL-1β mRNA的水平顯著增加；預(yù)先加入甘露聚糖2.5、5、10 mg/mL處理細(xì)胞，再加入PSG-1刺激，IL-1β mRNA的表達(dá)被抑制，且抑制作用與甘露聚糖的質(zhì)量濃度呈劑量依賴性，TNF-α mRNA的表達(dá)略有降低，但與PSG-1單獨(dú)刺激相比無(wú)顯著性差異。

3 討 論

近年來(lái)的研究表明多糖的免疫調(diào)節(jié)作用主要是通過(guò)細(xì)胞表面相關(guān)受體介導(dǎo)的，這些受體稱為模式識(shí)別受體[8]（pattern recognition receptor，PRR）。PRR是多糖發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的樞紐，識(shí)別多糖后，與之結(jié)合引發(fā)一系列的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而誘導(dǎo)免疫基因的表達(dá)，激活免疫反應(yīng)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[9]。因此對(duì)PRR的研究極大地促進(jìn)了對(duì)多糖免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制的研究。目前發(fā)現(xiàn)的PRR主要包括Toll樣受體[10]（Toll-like receptors，TLRs）、樹(shù)突狀細(xì)胞相關(guān)C型凝集素-1[11]（dendritic cell-associated C-type lectin-1，Dectin-1）、MR[12]、補(bǔ)體受體3[13]（complement receptor，CR3）、清道夫受體[14]（scavenger receptor，SR）等。多糖與這些受體結(jié)合后可以激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，進(jìn)而活化免疫細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[8]。MR是PRR中的一種，可特異性地識(shí)別以甘露糖、巖藻糖或N-乙酰葡糖胺為末端的配體并與之結(jié)合，研究表明MR在病原體的識(shí)別、吞噬與清除[15]、感染[16]等許多過(guò)程中都發(fā)揮著重要的作用。

Yu Qiang等[17]研究表明PSG-1可能是通過(guò)活化NF-κB途徑激活巨噬細(xì)胞從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，隨后，Zhang Shenshen等[18]證明PSG-1能通過(guò)TLR4依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路提高機(jī)體免疫力，抑制腫瘤生長(zhǎng)，其中TLR4是具有代表性的一種PRR。最新研究表明，PSG-1可以通過(guò)TLR4/ROS/PI3K/Akt/MAPKs/NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮其對(duì)巨噬細(xì)胞的活化作用[19]。然而，PSG-1能否通過(guò)影響巨噬細(xì)胞MR的表達(dá)從而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，以及通過(guò)MR誘導(dǎo)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的分泌，目前尚未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)對(duì)此進(jìn)行了研究。

在腹腔巨噬細(xì)胞表面有大量MR的表達(dá)，表明其在早期的免疫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。MR已被證明參與病原體的吞噬作用，如甲型流感病毒[20]。蘆薈多糖[12]可經(jīng)MR激活巨噬細(xì)胞，上調(diào)巨噬細(xì)胞表面MHC-Ⅱ（主要組織相容性抗原Ⅱ類分子）和FcγR （IgGFc段受體）的表達(dá)，MHC-Ⅱ可以提高巨噬細(xì)胞的抗原呈遞能力，F(xiàn)cγR則能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞清除抗原抗體復(fù)合物或者抗體腫瘤細(xì)胞復(fù)合物的能力。Liu Li等[21]研究表明大黃多糖可明顯地升高結(jié)腸炎大鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR的活性和吞噬能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)PSG-1處理后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面MR的表達(dá)量呈劑量依賴性的升高， RT-PCR進(jìn)一步測(cè)定結(jié)果表明PSG-1處理后MR mRNA表達(dá)水平隨著PSG-1質(zhì)量濃度的增加而升高。由此推斷，PSG-1可以通過(guò)上調(diào)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平從而促進(jìn)細(xì)胞表面MR的表達(dá)。MR與多糖配體結(jié)合后，可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性，產(chǎn)生活性氧，激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，并誘導(dǎo)細(xì)胞因子的分泌[22]。PSG-1可激活巨噬細(xì)胞的吞噬作用[17]，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各處理組細(xì)胞吞噬FITC-dextran的能力，結(jié)果表明PSG-1促進(jìn)的巨噬細(xì)胞吞噬功能被MR的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑甘露聚糖劑量依賴性地減弱。由此可知，PSG-1可以通過(guò)上調(diào)MR的表達(dá)從而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，抑制MR后，PSG-1對(duì)吞噬功能的促進(jìn)作用減弱。殼寡糖可通過(guò)與巨噬細(xì)胞表面的MR結(jié)合，產(chǎn)生IL-1β和TNF-α[23]。郭振軍等[24]研究表明含有近50%甘露糖的大黃多糖和含有N-乙酰葡萄糖胺殘基的當(dāng)歸多糖通過(guò)MR介導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α的分泌，而對(duì)IL-4的表達(dá)無(wú)影響。TNF-α主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，具有極為廣泛的生物學(xué)活性。例如調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性、免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)造血、抗腫瘤、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等。已有研究證明在RAW264.7巨噬細(xì)胞中，PSG-1能通過(guò)PI3K/Akt/MAPK/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)TNF-α的分泌[25]。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PSG-1單獨(dú)刺激的細(xì)胞與甘露聚糖預(yù)處理30 min后再加PSG-1刺激的細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α的含量，結(jié)果顯示，甘露聚糖抑制MR后，對(duì)PSG-1誘導(dǎo)的TNF-α分泌無(wú)影響，且TNF-α mRNA的相對(duì)表達(dá)水平也無(wú)明顯差異，因此可以說(shuō)明MR在PSG-1誘導(dǎo)的TNF-α分泌過(guò)程中無(wú)明顯作用。PSG-1誘導(dǎo)升高的另一細(xì)胞因子IL-1β的分泌量和mRNA表達(dá)水平則被甘露聚糖劑量依賴性地抑制，說(shuō)明PSG-1對(duì)IL-1β的調(diào)節(jié)與MR有關(guān)。

綜上所述，相關(guān)研究表明組分中含有甘露糖的多糖可通過(guò)MR激活巨噬細(xì)胞從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，考慮到PSG-1中含有部分甘露糖，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞用于探討PSG-1對(duì)MR的影響，以及PSG-1是否能通過(guò)影響巨噬細(xì)胞MR的表達(dá)從而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的免疫功能，可為完善黑靈芝多糖免疫調(diào)節(jié)的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。結(jié)果顯示，PSG-1可以上調(diào)巨噬細(xì)胞MR的表達(dá)，從而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能和相關(guān)細(xì)胞因子IL-1β的分泌，抑制劑抑制MR后，細(xì)胞吞噬功能減弱，IL-1β的分泌量減少。由此推測(cè)，PSG-1的免疫調(diào)節(jié)作用可能至少部分由MR介導(dǎo)。

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Effect of Polysaccharides from Ganoderma atrum on Mannose Receptor of Mouse Peritoneal Macrophages

SHUAI Xiao-xue, LI Wen-juan, LIU Dan-feng, WANG Yu-ting, ZHU Ke-xue, XIE Ming-yong*
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

Objective: To explore the effect of polysaccharides from Ganoderma atrum (PSG-1) on the mannose receptor (MR) of mouse peritoneal macrophages. Methods: After the macrophages were treated with PSG-1 at various concentrations, the MR expression on the macrophage surface was analyzed by f ow cytometry, and then the mRNA expression level of MR was evaluated by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). After the cells were pretreated with mannan (an MR inhibitor) and then exposed to PSG-1, the phagocytosis of macrophages was assayed by f ow cytometric method, the contents of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) in cell culture supernatant were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and the mRNA expression levels of TNF-α and IL-1β were determined by RT-PCR. Results: PSG-1 could increase the protein and mRNA expression levels of MR. Compared with the group treated with PSG-1 alone, the phagocytosis of macrophages and the secretion of IL-1β in cells pretreated with mannan were signif cantly inhibited and no effect on the secretion of TNF-α was observed in the presence of PSG-1. Conclusion: MR can partly mediate the immunoregulatory effect of PSG-1 on peritoneal macrophages in mice. Therefore, MR may be one of the receptors of PSG-1 associated with the immunomodulatory function.

polysaccharides from Ganoderma atrum; peritoneal macrophages; mannose receptor (MR); phagocytosis; cytokine

TS201.4

A

1002-6630（2014）23-0262-06

10.7506/spkx1002-6630-201423051

2014-06-27

國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（31130041）；國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（31201326）

帥小雪（1989—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)代謝與分子營(yíng)養(yǎng)學(xué)。E-mail：shuaisnow@163.com

*通信作者：謝明勇（1957—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称窢I(yíng)養(yǎng)學(xué)、食品安全、功能保健食品。E-mail：myxie@ncu.edu.cn