趙新秀，王仁萍，胡 松，賈韻平，毛擁軍

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CAD)是威脅人類健康的主要疾病之一，目前對其危險(xiǎn)因素的探尋和防治已成為預(yù)防該疾病的重要手段。作為惟一保護(hù)因素的血脂指標(biāo)高密度脂蛋白(HDL)一旦發(fā)生氧化反應(yīng)生成氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)，便將喪失逆轉(zhuǎn)膽固醇的作用，并可通過凝血、血小板聚集等多種途徑促進(jìn)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(SMC)增加，從而加速動(dòng)脈粥樣硬化[1-2]，因此OX-HDL成為CAD患者不可忽視的血脂監(jiān)測指標(biāo)。另外，血清同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)可通過多種機(jī)制導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣斑塊形成，是近年來研究較活躍的新的CAD事件評估危險(xiǎn)因素[3]。目前國內(nèi)外對于CAD血清Hcy與OX-HDL水平之間關(guān)系的研究甚少。本研究以CAD患者為研究對象，探討血清Hcy與OX-HDL的水平及二者的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 (1)采用分層隨機(jī)抽樣方法，抽取2012年6月—2013年6月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院特需保健科、心內(nèi)科行冠狀動(dòng)脈造影被確診為CAD的患者115例為CAD組，按WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)中典型的臨床表現(xiàn)、心電圖、心肌酶學(xué)等檢查結(jié)果嚴(yán)格篩選患者；其中男65例，女50例；平均年齡(73.3±2.3)歲。選擇冠狀動(dòng)脈造影正常者38例為對照組，其中男24例，女14例；平均年齡(69.3±11.9)歲。CAD組與對照組的性別構(gòu)成、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.517，P=0.300；t=0.93，P=0.350)。(2)依據(jù)2006年美國心臟協(xié)會(huì)(AHA)推薦，將血清Hcy水平>10 μmol/L定義為高同型半胱氨酸，將CAD患者分為Hcy正常組(28例)與Hcy異常組(87例)。Hcy正常組男17例，女11例；平均年齡(71.2±1.8)歲。Hcy異常組男48例，女39例；平均年齡(72.6±7.5)歲。Hcy正常組與Hcy異常組的性別構(gòu)成、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.265，P=0.386；t=1.12，P=0.270)。研究對象均簽署知情同意書，并排除急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、腦血管疾病、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及服用激素等免疫抑制劑和維生素類藥物者。

1.2 研究方法 患者于入院次日清晨空腹10 h后抽取肘靜脈血2 ml，置于血清管中，以3 000 r/min離心15 min，離心半徑為13.5 cm，離心后取血清，并用離心管分裝置于-80 ℃冰箱中貯存待用。采用羅氏日立7600全自動(dòng)生化分析儀測定血清三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、脂蛋白a(LP-a)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸(UA)、葉酸(FA)及維生素B12(VitB12)水平；血清Hcy、OX-HDL水平測定則采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒，嚴(yán)格按照說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 兩組Hcy與OX-HDL水平的比較 CAD組血清Hcy、OX-HDL水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見表1)。

2.2 Hcy正常組與Hcy異常組血脂指標(biāo)水平的比較 Hcy異常組HDL水平低于Hcy正常組，OX-HDL、LDL水平高于Hcy正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而兩組的TG、TC、LP-a水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表2)。

2.3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相關(guān)分析 分別以Hcy和OX-HDL為因變量，F(xiàn)A、VitB12、TC、TG、UA、HDL、LDL為自變量進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果顯示CAD組Hcy與FA、VitB12呈負(fù)相關(guān)，OX-HDL 與FA呈負(fù)相關(guān)(P<0.05，見表3)；同時(shí)對Hcy、OX-HDL做相關(guān)性分析，結(jié)果顯示Hcy與OX-HDL呈正相關(guān)(r=0.772，P=0.000，見圖1)。

表1 兩組 Hcy與OX-HDL水平的比較〔M(QR)〕

注:CAD=冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，Hcy=同型半胱氨酸，OX-HDL=氧化高密度脂蛋白

表2 Hcy正常組與Hcy異常組血脂指標(biāo)水平的比較〔M(QR)〕

注：TG=三酰甘油，TC=總膽固醇,LP-a=脂蛋白a，HDL=高密度脂蛋白，LDL=低密度脂蛋白

表3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相關(guān)分析

注：FA=葉酸,VitB12=維生素B12，UA=尿酸

圖1 CAD患者血清Hcy與OX-HDL水平的相關(guān)性散點(diǎn)圖

Figure1 Scatter plot of correlation between serum Hcy and OX-HDL levels in CAD patients

2.4 CAD影響因素的多因素Logistic回歸分析 采用多因素Logistic回歸分析，以CAD為因變量，年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、2型糖尿病病史、高血壓病史OX-HDL、Hcy、UA、TG、TC、HDL、LDL、LP-a為自變量，采用逐步法篩查CAD的影響因素。結(jié)果顯示高血壓病史、OX-HDL、Hcy是CAD發(fā)生的危險(xiǎn)因素(見表4)。

3 討論

Hcy通過氧化應(yīng)激使血管內(nèi)皮功能發(fā)生障礙，直接導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷。此外,Hcy還可促使血管平滑肌細(xì)胞增殖,促進(jìn)炎性反應(yīng)，增加血小板的黏附性和聚集性,促進(jìn)血栓的發(fā)生和血管鈣化，導(dǎo)致凝血和纖溶異常等[4]；其還可通過促進(jìn)血脂紊亂導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。Hcy含有活性巰基，可形成二硫鍵使許多蛋白質(zhì)分子在

表4 CAD影響因素的多因素Logistic回歸分析

注：BMI=體質(zhì)指數(shù)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)發(fā)生錯(cuò)誤折疊，從而使蛋白質(zhì)分子不能順利地從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基復(fù)合體，也就不能分泌到細(xì)胞表面，而在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中大量聚集造成應(yīng)激狀態(tài)，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可加劇心腦血管細(xì)胞脂質(zhì)調(diào)節(jié)紊亂。用氧化型HDL單克隆抗體或串聯(lián)質(zhì)譜法，均可在人體動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和CAD患者的血清中檢測到OX-HDL[5]。本研究OX-HDL的測定采用ELISA試劑盒，對照組和CAD組的OX-HDL水平分別為125.64(48.00)μg/L和198.29(48.38)μg/L，與Nakajima等[6]人的研究結(jié)果近似。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)OX-HDL可減少巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、SMC中膽固醇的流出，并抑制其與HDL受體連接，與天然HDL相比，OX-HDL可使巨噬/泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇及膽固醇酯的堆積增加[7]。另外OX-HDL還能通過凝血、纖溶、血小板聚集和活化途徑加速血栓形成、促進(jìn)SMC增殖、發(fā)生炎性反應(yīng)、導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損失[8]，從而加速動(dòng)脈粥樣硬化的形成。本研究結(jié)果顯示，CAD組血清Hcy、OX-HDL水平均高于對照組，且多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示Hcy、OX-HDL是CAD發(fā)生的危險(xiǎn)因素。提示Hcy與OX-HDL可通過炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激、內(nèi)皮損傷、凝血異常等機(jī)制參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成。

研究證實(shí)，LDL在體內(nèi)可被多種機(jī)制氧化修飾，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生[4]。如血液循環(huán)中的Hcy發(fā)生自身氧化產(chǎn)生活性氧(ROS)，抑制NO的合成及其生物利用度[9]，使細(xì)胞膜上的LP-a發(fā)生氧化反應(yīng)，導(dǎo)致LDL被氧化成OX-LDL，OX-LDL被巨噬細(xì)胞吞噬，從而加速細(xì)胞內(nèi)膽固醇的聚集和泡沫細(xì)胞的形成[10]。近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的HDL同LDL一樣能被體內(nèi)外多種因素如脂加氧酶、髓過氧化物酶、超氧陰離子、NO、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等氧化修飾，形成OX-HDL后不但喪失抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，反而有致動(dòng)脈粥樣硬化的作用[11]。有研究者采用同位素稀釋液相質(zhì)譜/串聯(lián)質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn)，人動(dòng)脈粥樣硬化病變存在OX-HDL，在CAD患者粥樣病變內(nèi)，HDL的 3-氯絡(luò)氨酸、3-硝絡(luò)氨酸[12-13]和氨甲酰賴氨酸[14]水平高于HDL水平，表面髓過氧化物酶(MPO)氧化人動(dòng)脈壁內(nèi)的HDL。為探討HDL能否像LDL一樣被Hcy氧化成OX-HDL，本研究搜集115例CAD患者血清，檢測Hcy、OX-HDL水平并最終得出二者呈正相關(guān)，但其相關(guān)性是否能證明Hcy是致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制之一及其具體機(jī)制還有待通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)深入研究。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，CAD組Hcy與FA、VitB12呈負(fù)相關(guān)。OX-HDL 與FA呈負(fù)相關(guān)，提示補(bǔ)充FA、維生素對于降低Hcy、OX-HDL水平存在一定作用，但其具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，血清Hcy、OX-HDL是CAD的危險(xiǎn)因素，可發(fā)揮疾病診斷和病情評估作用，并且二者在CAD中存在相關(guān)性，可為今后探究OX-HDL的產(chǎn)生及致病機(jī)制提供線索。另外，熊向暉[9]和戴瑞等[10]的相關(guān)研究得出Hcy與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度相關(guān)，因此，對于今后的研究還有待于采用Gensini積分評價(jià)冠狀動(dòng)脈病變程度，比較不同Gensini積分患者血清Hcy水平，探討Hcy水平評價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及疾病嚴(yán)重程度的價(jià)值。本研究由于從外周靜脈采血，可能不能充分反映CAD患者冠狀動(dòng)脈內(nèi)各類因子的變化，如果經(jīng)冠狀竇采血可能更為準(zhǔn)確；并且由于觀察時(shí)間較短，樣本量不足，故今后將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入研究；鑒于研究對象為CAD患者且為研究初級階段，因此尚待進(jìn)行Hcy、OX-HDL的相關(guān)因子受體拮抗劑干預(yù)試驗(yàn)。

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