陳玉紅，魏雄杰，黃秋艷

(宜春市疾病預(yù)防控制中心，江西宜春336000)

·調(diào)查報告·

宜春市2013年流感病毒檢測結(jié)果分析

陳玉紅，魏雄杰，黃秋艷

(宜春市疾病預(yù)防控制中心，江西宜春336000)

目的通過分析宜春市2013年流感病毒檢測結(jié)果，探討研究本地區(qū)流感流行特征及趨勢。方法對宜春市國家流感監(jiān)測哨點醫(yī)院的流感樣病例定期采集咽拭子，采用Real-time RT-PCR進行流感病毒核酸檢測，采用MDCK細胞對核酸陽性標本進行病毒分離，HI方法進行病毒型別鑒定，用SPSS軟件對檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果2013年流感病毒核酸陽性率為11.06%,其中2-5月以新甲H1N1為主，共檢出43份陽性，6-12月以H3N2為主，共107份陽性；以7,8月核酸陽性率最高。全年分離到流感毒株73份，其中新甲H1N1 41份，季H3N2 25份，Bv 4份，By 3份。女性陽性率略高于男性，無年齡分布差異。結(jié)論本市2013年春季以新型甲型H1N1為優(yōu)勢株,夏秋冬季以H3N2亞型為主。新型甲型H1N1分離率高于H3N2。應(yīng)繼續(xù)加強對流感的監(jiān)測。

流感病毒；核酸檢測；病毒分離

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.060

流行性感冒病毒(influenza virus)是正黏病毒科(Orthomyxoviridae)的代表種，簡稱流感病毒，包括人流感病毒和動物流感病毒。人流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原體。其中甲型流感病毒抗原性易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行[1]。宜春市疾控中心流感網(wǎng)絡(luò)實驗室負責宜春市兩所監(jiān)測哨點醫(yī)院流感網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測及宜春市10個縣市區(qū)流感疫情監(jiān)測，本文對宜春市2013年兩所監(jiān)測哨點醫(yī)院流感監(jiān)測結(jié)果進行分析，以了解本地區(qū)流感流行的特征。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞株狗腎傳代細胞(MDCK)由江西省疾病預(yù)防控制中心疾檢所提供，傳代細胞置于液氮罐中保存。

1.1.2 試劑RNA提取采用Promega核酸純化儀,提取試劑盒采用Promega核酸純化儀配套試劑。Real-time RT-PCR檢測試劑盒購自達安基因有限公司。流感病毒流行代表毒株及抗血清來自國家流感中心。

1.2 標本來源收集2013年宜春市兩所國家流感監(jiān)測哨點醫(yī)院(宜春市人民醫(yī)院、宜春市第二人民醫(yī)院)流感樣病例咽拭子，兩所醫(yī)院每周二、周四送樣，且采樣人員均為培訓上崗專業(yè)人員，標本采集后保證48h內(nèi)送樣。全年共采集流感樣病例咽拭子標本1600份，采樣、送樣均按照《全國流感監(jiān)測方案(2010年版)》[2]要求進行。

1.3 實驗方法

1.3.1 核酸檢測RNA提取采用Promega核酸純化儀,提取試劑盒采用Promega核酸純化儀配套試劑。核酸檢測采用達安基因熒光RT-PCR檢測試劑，Real Time RT-PCR核酸檢測按試劑盒說明書操作。此試劑盒有甲型、乙型、季節(jié)性H1、季節(jié)性H3、新甲H1N1、禽流感H5、H7、H9，該試劑盒經(jīng)過了國家認證。

1.3.2 病毒分離對核酸檢測陽性樣本接種75%-90%成片MDCK細胞培養(yǎng)瓶，觀察細胞有無病變，75%-100%細胞病變時進行收獲，利用HA(血紅細胞凝集實驗)及HI(紅細胞凝集抑制實驗)實驗對毒株進行定型，標準血清由國家流感中心提供。

1.4 統(tǒng)計分析使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，組間比對采用卡方檢驗，P＜0.05時差異有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

2.1 核酸檢測結(jié)果2013年共對1600份ILI(流感樣病例)咽拭子標本進行了流感病毒核酸檢測，檢出核酸陽性177份，陽性率為11.06%,其中新甲H1N1陽性44份，占24.86%；季H3N2陽性110份，占62.15%；B型23份，占12.99%。其中2-5月以新甲H1N1為主，共檢出43份陽性，6-12月以H3N2為主，共107份陽性；陽性率最高的是7、8兩月，占36.7%。

2.2 病毒分離結(jié)果2013年對所有核酸陽性標本進行流感病毒分離，分離到流感毒株73份，其中新甲H1N1 41株，占56.16%；季H3N2 25株，占34.24%；B型Victoria系4株，占5.48%；B型Yamagata系3株，占4.12%。以3，4月份病毒分離率最高。

新甲H1N1核酸陽性標本的病毒分離率為93.18%(41/44),季H3N2、B型核酸陽性標本的病毒分離率分別為27.73%(25/110)和30.43%(7/23)。不同型別的分離率具有顯著地統(tǒng)計學差異(P= 5.55×10-15)，新甲H1N1標本病毒分離率顯著高于其他型別。

圖1 2013年流感核酸檢測結(jié)果

2.3 性別分布情況1600份ILI檢測標本中，男性占986份，女性占614份，男女比例為1.61：1，流感病毒核酸陽性男性占97份，女性占80份，男女流感陽性率分別為9.84%和13.03%，男女流感陽性率具有統(tǒng)計學差異(P=0.0479)，女性陽性率略高于男性。詳見表1。

表1 2013年流感檢測性別分布

2.4 年齡分布情況1600份ILI檢測標本中，最小的1月，最大的90歲，各年齡組流感病毒陽性率差異無統(tǒng)計學意義(P=0.983)。見表2。

3 討論

2013年流感樣病例監(jiān)測結(jié)果顯示，宜春市流感流行主要有以下特點，一是有明顯的季節(jié)性。引起宜春市2013年流感毒株的流行主要有新甲H1N1、H3N2及B型，隨著時間變遷呈現(xiàn)不同的優(yōu)勢毒株趨勢，2-5月份，主要流行新甲H1N1,5-12月份，流行的是季節(jié)性H3N2及B型，主要以H3N2為主[3-6]。二是男女陽性率具有差異，以女性陽性率居高，可能是男女對流感普遍易感，但男女身體素質(zhì)的差異，導致女性陽性率略高于男性，與其它地區(qū)有關(guān)文獻報道不一致[7，9]。三是患病年齡無明顯差異，與有關(guān)文獻報道一致[8]。實驗室病毒分離結(jié)果顯示2013年新甲H1N1病毒的分離率較其他型別高。44份新甲H1N1核酸陽性標本分離到了41株毒株，僅三份未分離到毒株，病毒分離率達到了93.18%。流感病毒分離陽性率除與發(fā)病率，分離方法，細胞對病毒的敏感性等關(guān)系密切外，采樣液的配制、標本采集、保存及運送各個環(huán)節(jié)都會對病毒成功分離造成影響，各個環(huán)節(jié)緊密相扣，缺一不可，有時某一環(huán)節(jié)可能會成為病毒分離成敗的關(guān)鍵,所以病毒標本采集、保本及運送是病毒分離中非常重要的環(huán)節(jié)。新甲H1N1病毒分離率明顯高于其它，原因可能主要是新甲H1N1較其他型別對MDCK更為敏感，更易培養(yǎng)，此外還可能與哨點醫(yī)院樣本采集、樣本保存以及運輸?shù)拳h(huán)節(jié)息息相關(guān)。

表2 2013年流感檢測年齡分布

宜春市流感網(wǎng)絡(luò)實驗室自加入國家流感網(wǎng)絡(luò)實驗室以來，積極開展流感病毒核酸檢測及病毒分離工作，獲得了較完整的數(shù)據(jù)，能夠及時了解宜春市流感毒株變化情況及流感流行趨勢，是有效預(yù)測流感疫情的重要手段，對流感疫情的防控工作具有重要意義。

[1]郭元吉,程曉雯.流行性感冒病毒及實驗技術(shù)[M].北京∶三峽出版社,1997∶122.

[2]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.全國流感監(jiān)測實施方案(2010年版)[Z].2010.http∶//www.moh.gov.cn/jkj/s3577/ 201009/3fa356d0f4834d408fde6c12891a6482.shtml

[3]熊英,鄒明霞,謝昀,等.2004年江西省流行性感冒病原學監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(9)∶1103,1108.

[4]鄒明霞,謝昀,熊英,等.2004-2007年江西省流行性感冒監(jiān)測哨點醫(yī)院病原學監(jiān)測結(jié)果分析[J].疾病監(jiān)測,2009,24(7)∶484-486.

[5]鄒明霞,謝昀,曾艷文,等.江西省2006-2008年流感監(jiān)測哨點醫(yī)院病原學監(jiān)測結(jié)果分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學,2010,37(23)∶4408-4410.

[6]周郡,熊英,李健雄,等.2009年-2012年江西省流感病原學監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(12)∶1771,1775.

[7]孫楠,薄志堅.大連市2009年-2010年流感病毒核酸檢測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(6)∶1482-1486.

[8]吳麗,巫紫瓊.來賓市514例流感病毒核酸檢測結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(6)∶1519-1520.

[9]鄧蘭,李晶鑫.2009年至2013年萍鄉(xiāng)市流感病例樣本real-time RT-PCR結(jié)果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2014,32(5)∶511-513.

[10]董曉毅,孫長貴.H7N9禽流感病毒感染及其實驗室診斷[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2013,31(2)∶105-104.

R373.1+3,R511.7,R446.62

A

1674-1129(2014)06-0793-02

2014-08-28；

2014-11-13)