孔令和，柯云霞，高素香，黃潔，楊劍，雷桂萍，史國香

(九江市第三醫(yī)院，江西九江332000)

·調(diào)查報告·

1312例婦女人乳頭瘤病毒(HPV)感染狀況及其亞型分布情況調(diào)查

孔令和，柯云霞，高素香，黃潔，楊劍，雷桂萍，史國香

(九江市第三醫(yī)院，江西九江332000)

目的探討我院2013年門診人群感染人乳頭瘤病毒(HPV)的流行情況及感染的亞型分布情況。方法采用凱普醫(yī)用核酸分子雜交系統(tǒng)對我院的1312例婦科患者進(jìn)行HPV21分型檢測。結(jié)果在1312例研究對象中，HPV感染總陽性率為29.4%，最常見的高危感染亞型分別是16、58、18型；最常見的低危感染亞型分別是6型、11型。HPV單一感染和多重感染的陽性率分別為77.5%和22.5%，多重感染主要以二重感染為主，陽性率為16%。研究人群中40～50歲的陽性率最高，其次是30～40歲。結(jié)論九江地區(qū)最常見的HPV亞型是16亞型;多重感染主要是以二重感染為主；40～50歲是感染的高峰人群，對患有HPV病毒的患者進(jìn)行定期的跟蹤隨訪，有助于預(yù)防尖銳濕疣和宮頸癌的發(fā)生。

人乳頭瘤病毒；年齡分布；單一感染

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.054

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)自上世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)與宮頸癌相關(guān)以來，一直備受人們關(guān)注。據(jù)調(diào)查分析[1，2]，HPV在宮頸細(xì)胞異常及宮頸癌的病理學(xué)上具有最為重要的作用。HPV是一雙鏈閉合環(huán)狀的DNA病毒分子，它容易侵犯鱗狀上皮的基底層細(xì)胞以及位于宮頸鱗-柱交界處的增生性細(xì)胞，主要是通過性傳播、皮膚傳播、接觸污物等途徑進(jìn)入人體內(nèi)。本篇文章主要是研究了不同年齡段的女性感染HPV的亞型的分布情況，為本地區(qū)的HPV疫苗的研發(fā)和宮頸癌的篩查提供一定的參考價值。

1 資料與方法

1.1 對象收集2013年3月至2014年3月九江市第三人民醫(yī)院就診的門診患者與住院患者共1312例，并對他們進(jìn)行HPV基因分型檢測，年齡18～89歲，平均年齡為39.5±4.24歲。

1.2 標(biāo)本采集用潔凈生理鹽水濕棉簽除去女性子宮頸口分泌物，然后取專用潔凈毛刷(凱普公司提供)伸入宮頸內(nèi)稍加用力轉(zhuǎn)動，取含有上皮細(xì)胞的標(biāo)本，

1.3 儀器和試劑美國ABI2720型PCR擴(kuò)增儀、凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、凱普公司人乳頭瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測試劑盒。

1.4 操作步驟

1.4.1 病原體DNA提取在采樣管里取500μl臨床樣本，14000r/min離心5min，去上清液。加400μl溶液I(溶液I需在45℃水浴中預(yù)熱)混勻，100℃煮15min，加入400μl溶液Ⅱ，混勻室溫放置2min，14000r/min離心5min，去上清液，14000r/min離心1min，去上清液(務(wù)必吸干凈)，加60μl溶液Ⅲ充分溶解，14000r/min離心5min。取1μl樣品擴(kuò)增，1人份PCR反應(yīng)體系為25μl(即Premix∶23.5μl、Taq酶：0.75μl)。擴(kuò)增程序：(溫度速率為1℃/s)20℃(10min)→95℃(9min)→95℃(20s)→55℃(30s)→72℃(30s)→72℃(5min)40個循環(huán)。

1.4.2 HPV-DNA雜交擴(kuò)增后產(chǎn)物各反應(yīng)管放入PCR擴(kuò)增儀95℃變性5min(迅速放入冰盒中2min以上)，放置雜交膜，加入雜交液0.8ml(預(yù)雜交45℃2min以上)，排雜交液，加雜交液0.5ml,將PCR產(chǎn)物加入各反應(yīng)槽立即混勻，雜交45℃10min排液，雜交液0.8ml清洗3次(清洗第二次時溫度調(diào)到25℃)，加封阻液0.5ml，放置5min排液,加酶標(biāo)液0.5ml，放置5min排液,溶液A0.8ml清洗四次(清洗第二次時溫度調(diào)到36℃)，加顯色液0.5ml,蓋好雜交儀蓋子，放置5min，加溶液B0.8ml(需45℃加熱)清洗三次。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1312例標(biāo)本結(jié)果HPV21分型檢測結(jié)果1312例標(biāo)本中有386例陽性，陽性率為29.4%。在386例樣本中，單重高危型有269例，占69.7%(269／386)；單重低危型有30例，占7.8%(30／386)；多重感染有87例，占22.5%(87／386)；其中16型最多，有106例，占27.5%，其次為HPV58型，共50例，占15.0%，HPVl8型陽性率為5．1%，HPV6型陽性率為7．8%，HPV 11型陽性率為6.9%。高危型占了67．7%，遠(yuǎn)高于低危型(15.8%)，二者陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義性(P＜0.01)。見表1。

表1 299人次HPV單重感染患者的21分型的分布

2.2 單重感染與多重感染的構(gòu)成比386例HPV陽性患者中，單一感染有299例，占77.5%，多重感染有87例，占22.5%。其中多重感染主要是以二重感染為主，為62例(16%)，并且二重感染大部分是以16型+其他型別，所以無論是單一感染還是多重感染都以感染16亞型為主，見表2。

表2 HPV多重感染情況

2.3 1312例患者不同年齡HPV21亞型感染的情況1312例標(biāo)本中共分為八組(＜20歲、21～30歲、31～40歲、41～50歲、51～60歲、61～70歲、70歲以上、無年齡信息組)，總陽性有386例，陽性率為29.4%(386／1312)。其中＜20歲檢測了6例，陽性2例，陽性率為33.3%(2／6)；21～30歲檢測了155例標(biāo)本，陽性40例，陽性率為25.8%(40／155)；31～40歲檢測了359例，陽性93例，陽性率為25.9(93／359)；41～50歲檢測了442例，陽性126例，陽性率為28.5%(126／442)；51～60歲檢測了151例，陽性55例，陽性率為36.4%(55／151)；61～70歲檢測了59例，陽性26例，陽性率為44.1%(26／59)；70歲以上檢測了33例，陽性19例，陽性率為57.6%；無年信息齡組檢測了107例，陽性25例，陽性率為23.4%(25／107)。見表3。

表3 各年齡段的HPV感染21分型的情況

3 討論

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率居全球惡性腫瘤第二位。相比于其他的惡性腫瘤，宮頸癌的病因比較明確，能夠有效預(yù)防、發(fā)現(xiàn)并且能早期治療的癌癥[3,4]。早在上世紀(jì)70年代楚爾·豪森首先提出了HPV與宮頸癌具有相關(guān)性的假說，他先后完成了從生殖器疣中分離HPV6和宮頸癌組織中分離HPV16、18核酸的分析，而HPV的核酸檢測引入我國的各大醫(yī)院的門診人群的篩查是在上世紀(jì)90年代喬友林教授的帶領(lǐng)下實現(xiàn)的。許多報道和文獻(xiàn)中都得出了高危型人乳頭瘤病毒的持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件[5]。

HPV的分型檢測對宮頸癌變的預(yù)防和治療具有重要的價值[6]。本結(jié)果顯示，我院門診最常見的感染HPV的亞型分別是16(18.7%)、58(12.9%)、18 (5.1%)、6(7.8%)和11(6.9%)型，而浙江地區(qū)分別是16、11、58和6型為主，武漢地區(qū)分別是16、11、6和18型為主。總的來說不同的地區(qū)感染的HPV亞型分布存在一定的相同點[2，6]。從本篇文章的統(tǒng)計中可以了解到，九江地區(qū)仍然是以16型高危型的HPV感染為主，并且年齡在40至50歲之間為高發(fā)人群，可能存在的原因是中年婦女存在性活躍期并且抗病毒能力低于青年女性導(dǎo)致感染的幾率更大，所以提倡在此年齡段的婦女進(jìn)行定期檢查，預(yù)防宮頸病變和癌變的發(fā)生[7]。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示高危型中有其他型別的高檢出率，58、18型的感染幾率較高同樣可以說明該地區(qū)高危型別存在較高的感染[8,9]，并且HPV的單重感染和二重感染的陽性率分別為77.5%和16.0%，Ho等研究認(rèn)為持續(xù)性多重感染的危害性更大，與單一感染的情況來看，HPV的多重感染更難清除，宮頸病變的概率更高[10]?？傊?，HPV高危型和多重感染與宮頸癌變具有密切的關(guān)系，從九江地區(qū)的高危型的陽性率高的情況表明，我們應(yīng)該在該地區(qū)加大HPV持續(xù)感染與宮頸癌有關(guān)的宣傳力度，進(jìn)一步推進(jìn)宮頸癌篩查的普遍化，提高早期的宮頸癌檢出率，減少死亡病例的發(fā)生。

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R737.33

A

1674-1129(2014)06-0780-03

2014-09-17；

2014-11-07)