葉寧華,羅勇強(qiáng),林東子,曾今誠(chéng)

(1、東莞市中醫(yī)院，廣東東莞523000;2、東莞市慢性病防治院，廣東東莞523008;3、廣東醫(yī)學(xué)院廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東東莞523808)

·論著·

白細(xì)胞介素17A和白細(xì)胞介素23在肺結(jié)核合并糖尿病患者外周血中的表達(dá)及意義

葉寧華1,羅勇強(qiáng)2,林東子2,曾今誠(chéng)3

(1、東莞市中醫(yī)院，廣東東莞523000;2、東莞市慢性病防治院，廣東東莞523008;3、廣東醫(yī)學(xué)院廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東東莞523808)

目的探討肺結(jié)核合并糖尿病(PPTDM)患者外周血血清白細(xì)胞介素17A(IL-17A)和白細(xì)胞介素23(IL-23)含量并分析其臨床意義。方法ELISA檢測(cè)30例PPTDM患者、30例肺結(jié)核(PTB)患者、30例糖尿病(DM)患者和26例健康志愿者(HV)外周血血清IL-17A和IL-23含量，并分析其相關(guān)性。結(jié)果PPTDM組血清IL-17A均顯著高于PTB組、DM組和HV組，而血清IL-23含量均顯著低于PTB組、DM組和HV組(P＜0.05)。PTB組血清IL-17A含量均顯著高于DM組和HV組，而血清IL-23含量均顯著低于DM組和HV組(P＜0.05)。DM組和HV組血清IL-17A和IL-23含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同臨床起病形式PPTDM患者中血清IL-17A和IL-23含量存在差異，DM-PTB組血清IL-17A含量顯著高于PTBDM組，而血清IL-23含量顯著低于PTB-DM組(P＜0.05)。PPTDM患者組血清IL-17A含量和IL-23含量無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。結(jié)論IL-17A和IL-23在PPTDM疾病進(jìn)展中可能具有重要的作用。

肺結(jié)核；糖尿??；白細(xì)胞介素23；白細(xì)胞介素22

當(dāng)前結(jié)核病(tuberculosis,TB)和糖尿病(diabetes mellitus,DM)均以成為我國(guó)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前，我國(guó)TB年發(fā)病人數(shù)約為130萬(wàn)，年死亡人數(shù)達(dá)13萬(wàn)，遠(yuǎn)超其它傳染病死亡人數(shù)的總和，而我國(guó)DM患者總數(shù)已超過(guò)9000萬(wàn)，成為世界第一糖尿病大國(guó)[1,2]。尤其是，近年來(lái)肺結(jié)核合并糖尿病(patients with pulmonary tuberculosis and diabetes mellitus,PPTDM)發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì)，兩者合并相互影響預(yù)后較差[3]。因此，尋找有效的途徑控制PTB-DM的發(fā)病率和死亡率也成為我國(guó)當(dāng)今亟需面臨的問(wèn)題。PTB-DM根據(jù)臨床起病形式分為兩種，即先患肺結(jié)核后患糖尿病(pulmonary tuberculosis coincident with diabetes mellitus,PTB-DM)和先患糖尿病后患肺結(jié)核(diabetes mellitus coincident with pulmonary tuberculosis,DM-PTB)。臨床調(diào)查顯示PPTDM患者在PTB患者中占有率達(dá)5%～10%，且PPTDM患者中65%～80%為DM發(fā)病在前[4]。因此，本文我們以PPTDM患者為研究對(duì)象，通過(guò)ELISA檢測(cè)PPTDM患者血清白細(xì)胞介素17(Inter-leukin 17,IL-17)和白細(xì)胞介素23(Interleukin 23, IL-23)含量，探討IL-17和IL-23在PPTDM發(fā)生、發(fā)展中的意義，為尋求新的PPTDM患者治療手段提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象根據(jù)中華人民共和國(guó)肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS 288-2008)及1999年世界衛(wèi)生組織頒布的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集2013年6月至2014年1月于東莞市慢性病防治院和東莞市中醫(yī)院住院及門診新發(fā)肺結(jié)核(PTB)患者30例，平均年齡(40.4± 2.7)歲，其中男性15例，女性15例；肺結(jié)核合并糖尿病(PPTDM)患者30例，平均年齡(40.7±2.5)歲，其中男性18例，女性12例；糖尿病(DM)患者30例，平均年齡(43.8±2.9)歲，其中男性15例，女性15例。PPTDM患者根據(jù)臨床起兵形式分為先肺結(jié)核后糖尿病(PTB-DM)患者15例和先糖尿病后肺結(jié)核(DM-PTB)患者15例。所有病例均無(wú)其它免疫相關(guān)性或免疫性疾病或冠心病，且4個(gè)月內(nèi)未使用過(guò)激素及免疫抑制劑。同時(shí)選取同期東莞市慢性病防治院體檢科健康志愿者(healthy volunteers, HV)30例，平均年齡(40.3±2.1)歲其中男性15例，女性15例。所有標(biāo)本均采用肝素抗凝管空腹采血2ml，經(jīng)離心機(jī)(1500r/min)離心5min后，收集上清，100μl/每管，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑和方法采用ELISA法檢測(cè)血清IL-17和IL-23含量，IL-17和IL-23 ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)買于深圳達(dá)科為生物公司，操作步驟按照說(shuō)明書進(jìn)行，檢測(cè)儀器為MK3-酶標(biāo)儀(芬蘭)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Graphpad prism5.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用x±s表示。組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PPTDM患者血清IL-17A和IL-23含量檢測(cè)結(jié)果PPTDM組、PTB組、DM組和HV組血清IL-17A含量檢測(cè)結(jié)果分別為：(86.15±9.34)pg/ml、(71.24±8.03)pg/ml、(38.22±5.36)pg/ml和(31.34± 6.15)pg/ml。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析PPTDM組血清IL-17A含量顯著高于PTB組、DM組和HV組(t=2.229,P= 0.030;t=6.335,P＜0.001;t=6.729,P＜0.001)。PTB組血清IL-17A含量顯著高于DM組和HV組(t= 4.924,P＜0.001;t=5.427,P＜0.001)。DM組和HV組血清IL-17A含量無(wú)顯著性差異(t=0.843,P=0.403)。 PPTDM組、PTB組、DM組和HV組血清IL-23含量檢測(cè)結(jié)果分別為：(19.29±2.25)pg/ml、(26.36±2.32) pg/ml、(35.65±2.42)pg/ml和(40.11±2.36)pg/ml。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析PPTDM組血清IL-23含量顯著低于PTB組、DM組和HV組(t=2.191,P=0.033;t=4.682,P＜0.001;t=5.151,P＜0.001)。PTB組血清IL-23含量顯著低于DM組和HV組(t=2.711,P=0.009;t=3.368, P=0.002)。DM組和HV組血清IL-23含量無(wú)顯著性差異(t=1.125,P=0.265)。見(jiàn)圖1。

圖1 PPTDM患者血清IL-17A和IL-23含量檢測(cè)。

2.2 不同臨床起病形式PPTDM患者血清IL-17A和IL-23含量檢測(cè)結(jié)果不同臨床起病形式PPTDM患者中，DM-PTB組和PTB-DM組血清IL-17A含量檢測(cè)結(jié)果分別為：(106.03±14.93)pg/ml和(66.33±9.05)pg/ml。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示DM-PTB組血清IL-17A含量顯著高于PTB-DM組(t=2.270,P= 0.031)。不同臨床起病形式PPTDM患者中，DMPTB組和PTB-DM組血清IL-23含量檢測(cè)結(jié)果分別為：(24.17±3.83)pg/ml和(14.40±1.71)pg/ml。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示DM-PTB組血清IL-23含量顯著低于PTB-DM組(t=2.328,P=0.027)。見(jiàn)圖2。

圖2 不同臨床起病形式PPTDM患者血清IL-17A和IL-23含量檢測(cè)。

2.3 相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析顯示，PPTDM患者組血清IL-17A含量和IL-23含量無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.051，P=0.792)。

3 討論

肺結(jié)核(PTB)和糖尿病(DM)均是當(dāng)今人類的常見(jiàn)病和多發(fā)病，兩病合并存在時(shí)稱為肺結(jié)核合并糖尿病(PPTDM)，近年來(lái)其發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì)，且患者預(yù)后較差。65%～80%PPTDM患者常以DM發(fā)病在前[4]。目前，研究人員從物質(zhì)代謝、細(xì)胞因子、瘦素及藥物影響方面對(duì)PPTDM發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了不同程度的報(bào)道，尤其是發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫功能低下導(dǎo)致機(jī)體易感性增加是導(dǎo)致PPTDM發(fā)病率增高的主要因素，在這個(gè)過(guò)程中細(xì)胞因子的表達(dá)失衡可能具有重要的作用[4]。IL-17A和IL-23在參與機(jī)體免疫監(jiān)視和免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用。在抗微生物感染過(guò)程中，IL-17A誘導(dǎo)T細(xì)胞活化、刺激巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生多種促炎介質(zhì)，進(jìn)炎癥和協(xié)同刺激T細(xì)胞活化的作用[5]。IL-23由p19和p40兩個(gè)異二聚體分子組成，主要表達(dá)于樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，在自身免疫性炎癥性疾病和感染性疾病的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用[6]。IL-23能誘導(dǎo)幼稚CD4+T細(xì)胞分化為高活性的Th17細(xì)胞亞群，高活性的Th17細(xì)胞亞群通過(guò)分泌IL-17A，IL-17F和IL-22等多種細(xì)胞因子影響多種疾病的發(fā)生、發(fā)展[7,8]。近年來(lái)，Abbasi等[9]發(fā)現(xiàn)IL-23亞基mRNA在DM患者外周血PBMC中低水平表達(dá)，說(shuō)明IL-23在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

前期研究中本課題組發(fā)現(xiàn)PTB患者外周血血清IL-17A水平呈高表達(dá)，而IL-23水平呈低表達(dá)，尤其在痰涂結(jié)核菌反應(yīng)陽(yáng)性PTB患者這種差異尤為明顯，且PTB患者外周血IL-17A和IL-23含量均與外周血Th17細(xì)胞亞群含量變化呈正相關(guān)[10,11]。說(shuō)明IL-17A和IL-23可能與PTB的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。本研究通過(guò)ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PPTDM患者外周血血清IL-17A含量顯著高于PTB患者和DM患者，而PPTDM患者外周血血清IL-23含量顯著低于PTB患者和DM患者。不同臨床起病形式PPTDM患者中，DM-PTB患者外周血血清IL-17A含量顯著高于PTB-DM患者，而DM-PTB患者外周血血清IL-23含量顯著低于PTB-DM患者。值得注意的是，與課題組前期在PTB患者中觀察的結(jié)果類似[11]，PTDM患者外周血血清IL-17A含量與IL-23含量均無(wú)明顯相關(guān)性。本研究還發(fā)現(xiàn)PPTDM患者外周血Th17細(xì)胞亞群含量顯著增高(結(jié)果未報(bào)道)。因此，PPTDM患者外周血血清IL-17A含量與IL-23含量顯著高于PTB患者是否與PPTDM患者外周血Th17細(xì)胞亞群含量顯著增高有關(guān)還有待進(jìn)一步研究。以上研究說(shuō)明，IL-17A和IL-23在PPTDM發(fā)病過(guò)程中可能扮演不一致的作用，但其確切機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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Expression and clinical significance of serum IL-17A and IL-23 in pulmonary tuberculosis patients with diabetes mellitus

YE Ninghua,LUO Yongqiang,LIN Dongzi,et al.Dongguan Hospital of Traditional Chinese Medicine,Dongguan Guangdong 523000,China

Objective To detect serum IL-17A and IL-23 levels and analysis their clinical significance in pulmonary tuberculosis patients with diabetes mellitus(PPTDM).Methods Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect serum IL-17A and IL-23 levels in 30 PPTDM patients,30 pulmonary tuberculosis(PTB)patients,30 diabetes mellitus(DM)patients and 30 healthy volunteers(HV).Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation of them.Results Serum IL-17A level was significantly higher,and IL-23 level lower in PPTDM patients than those in PTB,DM and HV groups(P＜0.05 respectively).Serum IL-17A level was significantly higher,and IL-23 level lower in PTB patients than those in DM and HV groups (P＜0.05 respectively).There was no significant difference of serum IL-17A level and IL-23 level between DM and HV groups(P＞0.05 respectively).There was no significant correlation between serum IL-17A and IL-23 in PPTDM patients.Conclusion IL-17A and IL-23 may play an important role in PPTDM development.

Pulmonary tuberculosis;Diabetes mellitus;IL-23;IL-17A

R521，R587.1，R446.62

A

1674-1129(2014)06-0664-03DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.005

2014-08-22；

2014-09-22)

廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目（B2013427），東莞市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201450715200503）

葉寧華，女，1978年1月出生，本科，主管技師，臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，研究方向：結(jié)核病的免疫治療。