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        巳時、申時健脾益智膠囊對AD大鼠全血AChE表達的影響※

        2014-02-07 08:15:55蔡華珠湯慧敏于曉艷洪虹雅陳超云劉啟鴻
        關(guān)鍵詞:益智全血中醫(yī)藥大學

        蔡華珠 湯慧敏 于曉艷 洪虹雅 陳超云 劉啟鴻

        (1福建中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院,福州350122;2福建中醫(yī)藥大學骨傷學院,福州350122)

        巳時、申時健脾益智膠囊對AD大鼠全血AChE表達的影響※

        蔡華珠1湯慧敏1于曉艷1洪虹雅1陳超云2劉啟鴻1

        (1福建中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院,福州350122;2福建中醫(yī)藥大學骨傷學院,福州350122)

        目的探討巳時、申時健脾益智膠囊對老年性癡呆(AD)大鼠全血乙酰膽堿酯酶(AChE)表達的影響,揭示“脾主巳時”理論的科學性。方法通過腹腔注射D-半乳糖,同時胃飼氯化鋁(ALCL3)的方法塑造AD動物模型,設(shè)立正常對照組、模型組、中藥申時組、中藥巳時組,應(yīng)用分光光度測定方法測TChE活性,通過比較巳時和申時健脾益智膠囊對AD大鼠全血中AChE表達的影響來揭示“脾主巳時”的科學性。結(jié)果AD大鼠經(jīng)過治療,中藥巳時組AChE活性明顯降低,與模型組和中藥申時組比較有顯著差異(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論健脾益智膠囊可以降低全血AChE活性,起到治療AD的作用,而中藥巳時組效果顯著,從而驗證“脾主巳時”理論的科學性。

        脾;巳時;申時;阿爾茨海默??;乙酰膽堿酯酶;健脾益智膠囊

        中醫(yī)學認為,氣血在十二經(jīng)脈的運行具有晝夜節(jié)律性,十二經(jīng)脈氣血的運行與十二時辰相應(yīng),每一經(jīng)脈的氣血旺盛于其相應(yīng)的時辰,如足太陰脾經(jīng)旺于巳時(上午9點到11點)。老年性癡呆(Altheimer's disease,AD)的基本病機為髓減腦消,髓由精所化,而脾為“后天之本”,“氣血生化之源”。從2000年開始,研究人員不斷對中藥制劑健脾益智膠囊治療老年性癡呆進行了相關(guān)理論、臨床和實驗研究,成效顯著[1-2]。

        本研究主要通過巳時、申時對老年性癡呆大鼠(AD)給健脾益智膠囊,應(yīng)用分光光度測定的方法測定AD大鼠全血乙酰膽堿酯酶(Acetyl cholinesterase,TChE)活性的變化,揭示“脾主巳時”理論的科學性?,F(xiàn)將實驗研究部分進行分析討論。

        1 材料與方法

        1.1 動物及其分組實驗動物SPF級40周齡SD雄性大鼠60只,體重500±10g,北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供,合格證SCXK(京)2012-0001,實動單項準11400700020031號。動物飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心,醫(yī)學實驗動物環(huán)境設(shè)施合格證書為醫(yī)動字第23-016號。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機分成空白對照組、模型組、中藥巳時組、中藥申時組,每組15只。

        隨機分成空白對照組、模型組、中藥巳時組、中藥申時組,每組15只。

        1.2 藥品、試劑和儀器氯化鋁(中國醫(yī)藥集團上?;瘜W試劑公司提供,批號:F20130628);分析純;D一半乳糖(上海恒信化學試劑有限公司,批號F20130613);健脾益智膠囊(福建中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂);AChE測定試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號:20130821);多功能酶標儀(TECAN Infinite M200)。

        1.3 藥物配制及給藥健脾益智膠囊由人參、黃芪、水蛭、石菖蒲、遠志等加工制成。大鼠給藥劑量按《中藥藥理實驗方法》所提供的“實驗動物與人按體表面積等效劑量換算比率表”倍數(shù)折算。用蒸餾水將其制備成0.2 g/m L濃度的強脾益智膠囊混懸液給藥給中藥巳時組和中藥申時組大鼠;模型組,中藥巳時組和中藥申時組每日腹腔注射濃度為4.8mg/mL的D-半乳糖,按1ml/0.1kg·d劑量,同時胃飼濃度為20 mg/mL的ALCL3,按lmL/0.1kg·d劑量,塑造AD動物模型,持續(xù)30天。中藥巳時組、中藥申時組均從實驗第31天開始給藥,連續(xù)7天。

        1.4 標本的采集與制備造模第30天和實驗結(jié)束后,各組大鼠均進行斷尾,用定量采血10ul后,立即注入含有990 uL生理鹽水的試管中(即按1:99稀釋),大鼠尾部壓迫止血,所采血液冰箱低溫(4℃)儲存待測全血中AChE活力水平。

        1.5 AChE活性的測定AChE水解乙酰膽堿生成膽堿及乙酸,膽堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成對稱三硝基苯(TNB)黃色化合物,根據(jù)顏色深淺進行比色定量,水解產(chǎn)物膽堿的數(shù)量可反應(yīng)膽堿酯酶的活力,計算出AChE的活力,具體操作參照AChE測定試劑盒說明書。1.6統(tǒng)計學處理實驗結(jié)果均采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件分析,計量資料均采用(x±s)表示,組間比較采用t檢驗,以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        造模第31天和給藥第8天4組大鼠全血AChE的活性比較見表1。

        表1 4組大鼠全血中AChE活性比較

        表1 4組大鼠全血中AChE活性比較

        注:與正常對照組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.01,3)P<0.05;與西藥組比較,4)P<0.05

        組別例數(shù)造模第30天AChE活性(U·ml-1)中藥巳時組1556.03±6.111)中藥申時組1554.94±13.861)模型組1556.14±3.451)正常對照組1533.30±6.22 8例數(shù)1 091 0給藥第8天AChE活性(U·ml-1) 34.27±1.702)4)42.59±4.612)61.36±13.221)58.14±3.433)

        3 討論

        自然界的一切生物不僅具有適應(yīng)自然的生理結(jié)構(gòu)和生理機制,還具有適應(yīng)自然環(huán)境的節(jié)律變化(季節(jié)、晝夜、時辰)而形成的高度時間節(jié)律的生物活動特性[3]。中醫(yī)學是最早認識和應(yīng)用這種特性的學科之一,如其中的子午流注學說便是很好的例證。子午流注學說將人體氣血運行比喻為水流,從子時到午時,隨時間先后順序,人體陰陽盛衰,營衛(wèi)運行,經(jīng)脈流注,時穴開闔,均與自然界具有同步的節(jié)律變化,如巳時(上午9~11時)流經(jīng)脾經(jīng);申時(下午15~17時)流注膀胱經(jīng)。該學說指出:氣血迎時而至為盛,過時而去為衰;逢時為開,過時為闔;定時開穴或給藥,方可有效地調(diào)和陰陽,糾正機體的偏勝偏衰[4]。根據(jù)此學說可知“脾”應(yīng)“巳時”。

        脾藏意主思,與情志密切相關(guān),而大腦主要功能是主導(dǎo)運動、感受、意識、思維、記憶、情緒等,其主司精神、意識、思維和情感活動可歸屬于中醫(yī)情志范疇。因此中醫(yī)脾胃與大腦存在密切的相關(guān)性。

        基底前腦膽堿能神經(jīng)元丟失嚴重為AD主要病理改變之一。中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)遞質(zhì)是乙酰膽堿(acetylcholine,Ach),它由膽堿乙?;D(zhuǎn)移酶(choline acetyltransterase,CHAT)催化合成,AChE催化分解。AD患者腦組織中Ach含量明顯減少,而合成Ach的膽堿乙酰化轉(zhuǎn)移酶(CHAT)活性降低,分解Ach的AChE活性明顯增高,從而使Ach含量明顯減少。

        本研究結(jié)果提示,健脾益智膠囊可以降低全血AChE的活性,保護Ach這一中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)遞質(zhì),改善中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的功能,從而達到治療AD的作用。而中藥巳時組大鼠全血中AChE活性較中藥申時組下降更為突出。由此可說明某一臟腑經(jīng)絡(luò)的疾病,在不同時間給藥療效是不一致的。正如王冰所說:“藏在內(nèi),其象在外可閱者也?!北緦嶒炌ㄟ^這種“天人相應(yīng)”觀指導(dǎo)下的“以時測臟”的思路確切地證實脾經(jīng)氣血旺盛于巳時,以及在脾臟功能活躍之時,“因時制宜”對AD進行治療可取得顯著的療效。因此依臟腑相應(yīng)之時用藥很有必要進行深入挖掘研究,以完善中醫(yī)學“時臟相應(yīng)”的現(xiàn)代科學內(nèi)涵及臨床運用。

        [1]蔡華珠,紀立金.強脾益智膠囊對老年性癡呆大鼠腦海馬星形膠質(zhì)細胞增殖的影響[J].福建中醫(yī)學院學報,2009,19(6):57-58.

        [2]馮珂,紀立金.健脾益智膠囊對大腦中動脈栓塞大鼠海馬神經(jīng)干細胞增殖及Notchl、Jaggedl表達的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2013,28(4):921-924.

        [3]李財.中藥制劑給藥時間的探討[J].社區(qū)醫(yī)學雜志,2005,3(6):45-46.

        [4]郭霞珍.劉曉燕.馬淑然.“以時測臟”理論的分析和探討[J].中醫(yī)雜志,2006,47(2):85-87.

        Effects of Jianpi Yizhi Capsule on Whole Blood AChE in Rats with Alzheimer Disease During 9~11 am and 3~5pm

        Cai Huazhu1Tang Huimin1Yu Xiaoyan1Hong hongya1Chen Chaoyun2Liu Qihong1
        (1 Fujian university of traditional Chinese medicine,Fuzhou350122,China; 2 Orthopedics Institute of Fujian university of traditional Chinese medicine,Fuzhou350122,China)

        Obejective To detect the effects of Jianpi Yizhi Capsule on the whole blood AChE in the rats with Alzheimer Disease during 9~ 11 am and 3~5pm and reveal the scientific theory of"Spleen in 9~11am".Methods The AD racts model was established by D(+) Galactose injected into the rats and intragastric administration of ALCL3,the rats were divided into 4 groups,the control group,the model group,the chinese herbal medicine Si-shi group,the chinese herbal medicine Shen-shi group,Spectrophotometric method was used to measure the whole blood of AChE activity,by comparing the expression of Jianpi Yizhi Capsule on the whole blood AChE in the rats with alzheimer disease during Si-shi(9~11am)9~11 am and Shen-shi(3~5pm)to reveal the scientific theory of"Spleen in Si-shi(9~ 11am)".Results After the treatmeat of AD rats,the AChE activity of the chinese herbal medicine Si-shi group was significantly reduced, compared with that of the model group and the chinese herbal medicine Shen-shi group,it had highly significant difference(P<0.05 or P<0.01)).Conclusion The Jianpi Yizhi Capsule can reduce the whole blood of AChE activity,it had the therapeutic effect on AD,and the Chinese herbal medicine Si-shi group had significant effect,that verified the scientific theory of"Spleen in 9~11am".

        spleen;Si-shi(9~11am);Shen-shi(3~5pm);alzheimer disease;AChE;Jianpi Yizhi Capsule

        10.3969/j.issn.1672-2779.2014.24.087

        1672-2779(2014)-24-0153-02

        楊杰 本文校對:鄭春松

        2014-12-02)

        國家自然科學基金資助項目[No:81202613];福建省教育廳B類課題[No:JB08158];福建省大學生創(chuàng)新課題[No:201310393037]

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