馮體玉，張惠琴（廣東省梅州市人民醫(yī)院檢驗科 514031）

新生兒溶血?。℉DN）是由于胎兒與母親血型不相容，胎兒的紅細胞進入母體循環(huán)中，致使母體產(chǎn)生相應(yīng)的IgG抗體。該類抗體通過胎盤作用于胎兒的紅細胞，使其產(chǎn)生不同程度的溶血現(xiàn)象，從而出現(xiàn)溶血病的癥狀。HDN的血清學(xué)檢測主要采用“三項試驗”，即直抗試驗（直接抗人球蛋白試驗）、釋放試驗（抗體釋放試驗）和游離試驗（游離抗體試驗）。微柱凝膠技術(shù)具有操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確且易判讀的優(yōu)點，本實驗室采用此方法對本院2010年7月至2012年7月檢測的481例高膽紅素血癥新生兒的血液標(biāo)本進行檢測與統(tǒng)計，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2010年7月至2012年7月出生1周內(nèi)發(fā)生高膽紅素血癥的新生兒的血液標(biāo)本2mL，用EDTA－K2抗凝全血，抽血后即時送檢即時檢驗，3h內(nèi)完成。

1.2 主要試劑和儀器 溶血病微柱凝膠檢測卡、6%牛蛋白血清標(biāo)準(zhǔn)、TA－3A型血型血清學(xué)多用離心機和FYQ免疫微柱孵育器購自長春博迅生物技術(shù)有限公司；ABO紅細胞購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司。

1.3 參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[1]，采用微柱凝膠技術(shù)檢測。

1.3.1 ABO和Rh血型鑒定以及直接抗人球蛋白試驗 將患兒待檢測的紅細胞用生理鹽水配成1%的懸液，然后取50μL加入溶血病檢測卡Ⅰ內(nèi)，用TA－3A型血型血清多用離心機離心5min（900r／min，2min；1 500r／min，3min），取出判讀結(jié)果。

1.3.2 游離試驗 取溶血病檢測卡Ⅱ，在1、2、3孔各加入患者血漿50μL，再分別加入50μL 1%的A、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細胞懸液。

1.3.3 釋放試驗 采用熱放散法。在溶血病檢測卡Ⅱ的第4、5、6孔中各加入患兒的放散液50μL，再分別加入50μL 1%的ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細胞懸液。37℃孵育15min，用TA－3A型血型血清學(xué)多用離心機離心5min（900r／min，2min；1 500r／min，3min）。

1.3.4 結(jié)果判讀 紅細胞留在微柱上端或分布在凝膠中為試驗結(jié)果陽性，紅細胞沉降至微柱底部為試驗結(jié)果陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 患兒血樣“三項試驗”結(jié)果 481例中，15例直抗試驗陽性（陽性率3.1%），123例釋放試驗陽性（陽性率25.6%），114例游離試驗陽性（陽性率23.7%）?！叭椩囼灐钡南嗷ヂ?lián)系見表1。陽性率從高到低依次為游離試驗＋釋放試驗的陽性率、直抗試驗＋游離試驗＋釋放試驗的陽性率、單項釋放試驗的陽性率，游離試驗＋釋放試驗的陽性率與各項差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 “三項試驗”各種組合的陽性率情況

2.2 HDN血型分布及各血型性別所占比率結(jié)果比較 481例高膽紅素血癥新生兒中123例診斷為HDN。在123例HDN中，A型占49.6%（61／123），B型占50.4%（62／123），O型和AB型均為0，全部患兒Rh血型均為陽性。但A型和B型HDN發(fā)生率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。123例HDN中，A型男嬰占25.2%（31／123）、女嬰占23.4%（30／123）；B型男嬰占26.8%（33／123）、女嬰占23.6%（29／123），本組數(shù)據(jù)中HDN男女性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 HDN患兒血型分布及性別結(jié)果比較（n）

2.3 HDN患兒血樣“三項試驗”結(jié)果 123例HDN中，釋放試驗敏感度最高，陽性為122例，陽性率達99.2%；其次游離試驗陽性為113例，陽性率達91.9%；直抗試驗僅12例陽性，陽性率為9.8%。見表3。

表3 HDN患兒“三項試驗”的陽性率情況

3 討 論

HDN主要的病因是胎兒紅細胞進入母體的循環(huán)，胎兒與母體具有不同的血型抗原，該血型抗原刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的IgG類血型抗體，當(dāng)該抗體進入胎兒循環(huán)與紅細胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合，破壞紅細胞而發(fā)生溶血。IgG類抗體是最具臨床意義的抗體，引起HDN的血型抗體都是IgG類抗體。在我國，ABO血型不合引起的HDN是最為常見的，ABO系統(tǒng)抗原導(dǎo)致的HDN中，母親血型多為O型。引起HDN的其他血型抗體還有抗－C、抗－c、抗－E、抗－e、抗－K等。不管妊娠婦女的血液中含有以上任何一種IgG類抗體，只要胎兒紅細胞膜上具有相應(yīng)的抗原，都可能發(fā)生HDN。

HDN檢測包括直抗試驗、釋放試驗和游離試驗。其中，直抗試驗是檢測新生兒的紅細胞是否已被母體的IgG類抗體所致敏，釋放試驗、游離試驗則檢測患兒血清中是否有IgG類抗體的存在。目前檢測方法主要有傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠法，試管法操作復(fù)雜，洗滌放散時間過長不能及時給臨床提供診療結(jié)果；結(jié)果判斷主觀化，受干擾的因素較多，重復(fù)性差；而且在洗滌過程中由于抗原和抗體間的親和力較弱，抗體易被洗脫掉，容易出現(xiàn)假陰性。微柱凝膠技術(shù)是建立在傳統(tǒng)血型血清學(xué)基礎(chǔ)上的一項免疫檢測技術(shù)[2]。該技術(shù)通過調(diào)節(jié)凝膠的濃度來控制凝膠間隙的大小，利用離心力將抗原和抗體反應(yīng)后的凝集紅細胞留在微柱的上端或分布在凝膠中，未凝集紅細胞則通過間隙到達微柱底部。該方法不用洗滌紅細胞可使抗人球蛋白被殘留蛋白質(zhì)中和，避免了抗人球蛋白被洗滌后殘留的鹽分稀釋所產(chǎn)生的假陰性[3]。資料顯示，微柱凝膠法敏感度高于試管法，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）[4]，微柱凝膠法對抗體效價的檢出水平比試管法平均高出1～3個滴度[5]，與臨床符合率相比，微柱凝膠法也遠高于試管法。

本研究481例高膽紅素血癥新生兒的標(biāo)本在“三項試驗”中均為陽性者占2.5%（12／481）；游離試驗和釋放試驗陽性而直抗試驗陰性者占21.0%（101／481）；單項釋放試驗陽性者占2.1%（10／481）；單項直抗試驗陽性者占0.4%（2／481）；游離試驗單項陽性為0；“三項試驗”均為陰性占73.8%（355／481）。結(jié)果顯示游離試驗＋釋放試驗陽性率與各項差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。本研究結(jié)果與文獻[6－7]報道有差異，其單項釋放試驗陽性者占52.5%，所占比例較高，這可能與本時間段內(nèi)的病例數(shù)存在著一定的局限性，其次可能與本地區(qū)人口血型基因頻率分布有關(guān)，另外可能與采用不同檢測方法和試劑有關(guān)，可加大病例數(shù)進一步探討分析研究。

481例高膽紅素血癥新生兒確診為HDN 123例，占25.6%，均為ABO血型系統(tǒng)所致的HDN?；純簽锳型者，HDN的檢出率49.6%（61／123），B型者HDN的檢出 率50.4%（62／123），兩者檢出率經(jīng) χ2檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與羅偉瓊等[8]報道一致，說明ABO HDN的發(fā)生率與嬰兒A、B血型無關(guān)，在ABO血型中呈正態(tài)分布。確診為HDN的123例中ABO引起的直抗試驗為12例，另外，101例放散試驗和游離陽性，11例直抗試驗＋游離試驗＋釋放試驗陽性，10例釋放試驗陽性，1例直抗試驗、游離試驗陽性。理論上HDN患者其釋放試驗都應(yīng)該是陽性的[9]，出現(xiàn)HDN患者釋放試驗陰性的原因可能是在制備放散液時，離心的溫度和時間未控制好，釋放出的抗體又被重新吸附到紅細胞表面，導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)假陰性。隨后對實驗室診斷的123例HDN病例進行了追蹤隨訪，結(jié)果均與本實驗室的診斷相符。因此 “三項試驗”在HDN的診斷中具有重要的臨床價值，其中釋放試驗在HDN的診斷中最為重要，研究結(jié)果證實釋放試驗是“三項試驗”中敏感度最高，也是判定HDN最有力的證據(jù)[10－11]。

HDN可引起新生兒黃疸、貧血、水腫、肝脾大，甚至膽紅素腦病，使患兒神經(jīng)細胞受到損害。因此，采用敏感而且準(zhǔn)確的實驗檢測技術(shù)對HDN早期、準(zhǔn)確的診斷有重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，出生天數(shù)小于或等于3d的患兒HDN檢出率為65.2%，出生天數(shù)大于3～7d的患兒HDN檢出率為20.8%，出生天數(shù)超過7d的未檢出HDN陽性[12－13]。致敏的紅細胞會在出生后逐漸被破壞，游離抗體也只在出生后幾天內(nèi)存在，之后會逐漸消失，使HDN漏檢。本研究選取的是出生一周內(nèi)發(fā)生高膽紅素血癥新生兒，其檢出率為25.6%，遠低于出生3d內(nèi)的檢出率，可能就是游離抗體消失的原因所導(dǎo)致。因此發(fā)現(xiàn)高膽紅素血癥的新生兒應(yīng)盡早檢測“三項試驗”，以提高HDN的檢出率，達到及時治療的效果。

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