姜 瑩，肖鴿飛△，趙 軍，陳福光，黃 琳（.廣東省珠海市婦幼保健院檢驗科／珠海市醫(yī)學遺傳研究所 5900；.廣東省珠海市人民醫(yī)院檢驗科 5900）

隨著中國人民生活水平的提高和生活方式的改變，糖尿病的患病率已由1986年的1.04%上升至2008年的9.7%，據估計，中國成人糖尿病總數達9 240萬，可能已成為世界上糖尿病患病人數最多的國家[1]。在糖尿病的監(jiān)測指標中，常用血清葡萄糖測定，但其反映的只是患者當前的血糖水平，且易受飲食、藥物等因素影響。糖化血紅蛋白是血紅蛋白與糖類經非酶促反應結合而成的，以HbA1c為主，它的合成過程是緩慢且不可逆的，其血液濃度反映了測定前2～3個月機體平均血糖水平，因其分析前不穩(wěn)定性較小被作為糖尿?。―M）的篩選、長期血糖控制、療效評估的有效監(jiān)測指標，在臨床上得到了廣泛的應用。2011年WHO發(fā)布的《應用糖化血紅蛋白診斷糖尿病》咨詢報告中推薦在有條件的地區(qū)采用HbA1c診斷糖尿病[2]。目前HbA1c檢測的方法有很多種，包括離子交換高效液相法、親和色譜高效液相法、免疫比濁法等。本研究在自動生化分析儀上用免疫透射比濁法測定HbA1c的結果與高效液相色譜法（HPLC）測定HbA1c的結果進行方法學比對，以評估前法在臨床應用中的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集珠海市人民醫(yī)院（A組）和珠海市婦幼保健院（B組）兩家臨床機構2012年6～8月就診的各100例EDTA－K3抗凝全血標本，其中男109例，女91例；年齡25～75歲；健康人60例、疑似糖尿病患者60例、治療中糖尿病患者60例，以及合并有尿毒癥的糖尿病患者20例，C組為兩家醫(yī)院就診的200例患者的數據。

1.2 儀器和試劑

1.2.1 儀器 A組使用日本HITACHI 7600全自動生化分析儀和美國BIO－RAD D－10HPLC HbA1c分析儀對標本進行檢測。B組使用日本HITACHI 7180全自動生化分析儀和美國BIO－RAD D－10HPLC HbA1c分析儀對標本進行檢測。

1.2.2 試劑 全自動生化分析儀（日立7600和7180）均使用珠海麗珠試劑股份有限公司生產的HbA1c檢測試劑盒（免疫透射比濁法），校準品為該公司生產的與檢測試劑盒原裝配套產品。HPLC法使用的為BIO－RAD公司生產的原裝HbA1c檢測試劑盒，校準品為試劑原裝配套產品。質控品均采用BIO－RAD公司生產的HbA1c專用質控品。

1.3 方法 200例標本均采用盲法進行平行測定。在使用免疫透射比濁法測定前需對標本進行預處理，即吸取5μL沉積紅細胞加入至500μL溶血劑中，讓紅細胞充分溶解后再進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SAS 8.0統(tǒng)計學軟件對兩種方法進行Bland－Altman散點圖分析、相關性檢測、組內相關系數（ICC）及直線回歸方程比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

1.5 溯源性說明 BIO－RAD公司生產的D－10檢測試劑盒已經過美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP）認證。珠海麗珠試劑股份有限公司生產的HbA1c校準品（制造商產品校準品）是嚴格遵照《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》（GB／T 21415－2008／ISO 17511：2003）的溯源量值程序進行的，通過BIO－RAD D－10 HPLC檢測方法（制造商選定測量程序）向上溯源至國際約定校準品。

2 結 果

2.1 測定結果中最高值為13.7%，最低值為4.5%，同一份標本用2種不同方法檢測結果的最大絕對差值為0.5%，最小絕對差值為0。A、B兩組數據均顯示免疫透射比濁法相對HPLC法呈負偏差。

2.2 兩種測定方法間離群點的檢查 本研究的200組數據中，最大相對偏差為0.051，未超過相對偏差均值的4倍（0.053），并經Bland－Altman偏倚散點圖分析（圖1），95%置信區(qū)間為0.94～1.06。由圖1也可以看出，所有測量結果均在95%置信區(qū)間內。無離群點需剔除，所有數據有效。

圖1 200份標本檢測結果相對偏倚散點圖

2.3 相關性檢測 經統(tǒng)計學分析，A組HbA1c的免疫透射比濁法與HPLC法比較，相關系數（r）＝0.995 1；B組兩種方法比較得r＝0.997 9；兩家醫(yī)院200份標本數據（C組）的綜合分析得r＝0.997 0。結果顯示，所測試劑在不同儀器上的檢測結果與HPLC法比較均顯示了很好的相關性。

2.4 ICC檢驗 經統(tǒng)計學分析，A組內兩臺儀器間的ICC＝0.995 1，B組內兩臺儀器間的ICC＝0.997 9，C組內兩種方法間的ICC＝0.996 6，三組結果均ICC＞0.75，說明用免疫透射比濁法在不同的儀器上檢測HbA1c與HPLC法的檢測結果比較，均顯示出很好的一致性。

2.5 直線回歸方程比較 A組中兩種不同方法的結果作直線回歸分析，方程為Y＝0.989 2X＋0.045 4，r2＝0.990 4；B組兩組數據作直線回歸分析，方程為Y＝1.010 9X－0.080 3，r2＝0.995 9；C組為A、B兩組綜合數據的直線回歸分析，方程為Y＝0.999 8X－0.017 8，r2＝0.993 2。各組測定結果作散點圖分布如圖2。以上結果顯示，每組比對方法間的r均大于0.95，說明結果分布范圍符合要求。

圖2 兩種方法測定臨床標本結果散點圖

三組比對結果的回歸方程中斜率與截距經統(tǒng)計學分析均為P＞0.05，說明擬合直線回歸方程的斜率與1之間的差異無統(tǒng)計學意義，截距與0之間的差異也無統(tǒng)計學意義，可以認為直線通過坐標原點，也說明了兩種檢測方法具有很好的一致性。

3 討 論

HbA1c不單只作為糖尿病治療效果監(jiān)測的指標，國內有研究表明，HbA1c水平與非糖尿病高血壓患者有密切關系，是原發(fā)性高血壓的危險因素[3]。國外也有學者通過對社區(qū)9 603例中年參與者的動脈粥樣硬化風險的前瞻性研究分析觀察到：HbA1c是一個可以預測心血管疾病和腦卒中的因子，它與心血管風險均可能介導高血壓的發(fā)展[4]。美國杜克大學的Hudson等[5]報道，對非糖尿病患者行心臟手術時，患者術前如果HbA1c水平高于6.0%，其發(fā)生急性腎功能損傷的風險增加，是術后早期（30d內）病死率增高的獨立風險因素。隨著HbA1c在糖尿病診斷以外的多領域的廣泛研究應用，該項指標的檢測已越來越受到臨床重視。

隨著科學技術的不斷進步，各種儀器設備不斷進入檢驗領域，HbA1c的測定方法就有幾十種之多。目前常用的HbA1c檢測原理基本上可分為兩大類：一類是基于HbA1c與血紅蛋白的電荷不同；另一類是基于血紅蛋白上糖化基團的結構特點[6]。離子交換HPLC檢測HbA1c可以達到臨床需求的精密度和穩(wěn)定性。2011年我國HbA1c室間質評結果統(tǒng)計顯示，相同儀器的組內變異系數（CV）在3.33%～15.44%，多數儀器組內CV%＞5%，而基于離子交換HPLC的儀器組內CV相對較小[7]，顯示該法測定的結果在不同的儀器上具有很好的一致性。因此，美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP）將其作為HbA1c標準化參考系統(tǒng)的參考方法[8]。然而，HPLC法檢測需要特殊的儀器，且儀器、試劑昂貴，測試成本較高，較難在我國各基層醫(yī)院實驗室推廣應用。另外，近幾年為廣大臨床單位所推崇的HbA1c的床旁快速診斷雖然也被廣泛地應用，但由于其方法的精密度、偏倚性能方面尚不足以滿足質量保證的要求[9]，導致測定結果差異很大，臨床上難以作出合理的評價。免疫透射比濁法測定HbA1c是利用抗原、抗體特異性反應的原理，檢測所需用到的自動生化分析儀在廣大基層醫(yī)院也已廣泛地普及。有研究使用進口的免疫透射比濁法產品與HPLC法進行比較，顯示兩種方法具有良好的相關性和可比性[10]。本研究通過使用國產免疫透射比濁法檢測試劑與HPLC法對200例不同濃度的HbA1c進行盲法平行測定，結果顯示兩種方法同樣具有很好的相關性與一致性，表明用國產免疫透射比濁法試劑測定HbA1c的結果是有保障的。而且，該法測試成本相對較低，無須特殊檢測儀器，操作簡便，可用于批量檢測，對臨床提高血糖監(jiān)控水平，降低糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生具有重要的意義。

當前國內市場上已有多家公司生產免疫透射比濁法測定HbA1c的試劑盒，雖有多名學者報道該法精密度高、偏倚度小，但是由于檢測方法、儀器的標準化程度不夠，每年衛(wèi)生部室間質評結果均顯示，不同廠家、不同批號的試劑在不同儀器上檢測，表現(xiàn)出較大的變異度，這也是中國目前并不推薦采用HbA1c診斷糖尿病的原因之一。因此，不管選用哪種方法、哪家試劑，均應采取如下措施來提高HbA1c的檢測質量：知曉HbA1c檢測的干擾因素；重視量值溯源，使用科學、實用的分析系統(tǒng)；整個檢測過程應嚴格按照規(guī)范的標準化操作規(guī)程進行和參加室間質量評價活動定期監(jiān)測測定結果質量[11]。

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[9]王薇，楊雪，胡麗濤，等.糖化血紅蛋白兩種床旁檢測方法性能的比較[J].中國糖尿病雜志，2012，20（7）：511－514.

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[11]王冬環(huán)，陳文祥.應注重糖化血紅蛋白在糖尿病診療中的臨床價值[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2012，35（6）：493－496.