朱美芹，王莉莉（江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團宿遷市人民醫(yī)院檢驗科 223800）

隨著醫(yī)學(xué)科技的不斷發(fā)展，臨床標(biāo)本的檢測均采用自動化、程序化，為適應(yīng)檢測大量標(biāo)本的需要，本院2013年3月購進了瑞士TECAN公司的FREEDOM EVOLYZER－2200型全自動酶聯(lián)免疫儀。該儀器加樣系統(tǒng)采用的是非一次性的Teflon涂層鋼針，容易造成拖帶污染[1－2]，為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，經(jīng)廠家校驗穩(wěn)定后，對鋼針加樣系統(tǒng)及洗板機進行拖帶污染檢測，同時應(yīng)用TECAN FREEDOM EVOLYZER－2200全自動酶聯(lián)免疫儀檢測臨床血清標(biāo)本，并與手工方法操作比對，以便能夠建立該檢測儀與所用試劑構(gòu)成的新系統(tǒng)的性能數(shù)據(jù)[3]。具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 1IU／mL的HBsAg質(zhì)控血清購自北京金豪藥業(yè)有限公司，批號20120705；乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性混合血清及高濃度的HBsAg陽性混合血清各24份（分3組，每組8份）和隨機抽取50份血清標(biāo)本均來自宿遷市人民醫(yī)院臨床患者。

1.1.2 儀器 TECAN FREEDOM EVOLYZER－2200型全自動酶聯(lián)免疫儀，瑞士TECAN公司生產(chǎn)；美國BIO－RAD680酶標(biāo)儀及KHB ST－36W洗板機。

1.1.3 試劑 乙型肝炎病毒5項檢測試劑盒，北京萬泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 測定方法

1.2.1 交叉污染測定[4]將HBsAg陽、陰性混合血清各分為3組，每組均為8管，以H表示陽性標(biāo)本（陽性混合血清測定的吸光度在3.0以上），以L表示陰性標(biāo)本，使每根加樣針按H1、H2、H3、L1、L2、L3的順序加樣。實驗結(jié)果以公式[（L1－L3）／H×100%]計算污染率[5]。

1.2.2 兩種方法比對檢測[6]手工操作嚴格按試劑說明書進行；全自動酶聯(lián)免疫儀操作程序嚴格按試劑盒說明書設(shè)置。全自動酶聯(lián)免疫分析儀與手工操作的測定結(jié)果進行對比，50份臨床標(biāo)本酶聯(lián)免疫分析儀與手工操作同時進行?？组g重復(fù)性的檢測和板間重復(fù)性的檢測均采用1IU／mL的HBsAg質(zhì)控血清進行試驗?？组g重復(fù)性的檢測用連續(xù)20孔質(zhì)控血清的S／CO值；板間重復(fù)性的檢測觀察連續(xù)20板的S／CO值，計算CV值。

1.2.3 拖帶污染的判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]拖帶假陽性（NP）：板條按A1～A12順序同一橫排連續(xù)有2孔以上OD值大于臨界值（經(jīng)過復(fù)試只有一個是陽性的）。

2 結(jié) 果

2.1 全自動酶聯(lián)免疫儀各通道交叉污染情況 見表1。

2.2 50份臨床標(biāo)本手工操作與全自動酶聯(lián)免疫儀檢測結(jié)果比較 見表2。

表1 HBsAg8個通道的交叉污染率（%）

2.3 用1IU／mL的HBsAg質(zhì)控對孔間重復(fù)性和板間重復(fù)性的檢測 見表3。

表2 50份標(biāo)本全自動酶聯(lián)免疫儀與手工操作測定結(jié)果符合率

表3 全自動酶聯(lián)免疫儀與手工損傷檢測重復(fù)性評價

3 討 論

本次實驗中的交叉污染實驗根據(jù)陳亞軍等報道[5]的方法設(shè)計，HBsAg陽性標(biāo)本混合血清、HBsAg陰性標(biāo)本混合血清各3組，每組8管，使儀器的8根加樣針均能連續(xù)3次加高濃度樣品（HBsAg陽性標(biāo)本混合血清的吸光度平均值為3.712）后，連續(xù)3次加低濃度樣品（HBsAg陰性標(biāo)本混合血清的吸光度平均值小于0.020），同時保證了每根加樣針加在同一排，洗板的順序也同樣由高濃度向低濃度。如此設(shè)計使實驗不僅反映加樣針?biāo)鶖y帶的標(biāo)本和試劑交叉污染情況，也能反映洗板機探針引起的污染誤差。通過本實驗該儀器的交叉污染率在0.18%～0.92%，比陳亞軍等[5]報道還要略高。將此酶聯(lián)免疫儀與手工操作對照實驗，同時測定了50例臨床標(biāo)本的乙肝5項指標(biāo)，總的符合率為96.4%，其中，HBsAg有一個標(biāo)本酶聯(lián)免疫儀測定為陽性而手工測定為陰性，經(jīng)雙孔復(fù)測為陰性，因其前一孔為陽性標(biāo)本，按拖帶污染的判斷標(biāo)準(zhǔn)此標(biāo)本屬于拖帶假陽性。由于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）靈敏度極高（HBsAg僅為1ng／mL），健康人群乙型肝炎感染人群達10%，作者對在本院就診檢查乙肝標(biāo)志物患者作統(tǒng)計顯示每日HBsAg陽性率在12.0%～53.3%，平均陽性率在28.2%。如此高的HB－sAg陽性率，試劑原因如HBsAg加樣量為100mL，一次性洗板，以及加樣系統(tǒng)采用的是非一次性的Teflon涂層鋼針等都容易造成攜帶污染。因此，要優(yōu)化程序以進一步降低由于試劑原因及攜帶污染產(chǎn)生假陽性的因素，比如加樣后應(yīng)增加沖洗探針的次數(shù)，同時增加每次洗板的洗液量和次數(shù)，精確探針的加樣量，調(diào)整加樣針對酶標(biāo)板的分配速度和深度等?？梗璈Bs有一個標(biāo)本手工操作測定為陽性而全自動酶聯(lián)免疫儀器測定為陰性，但測定值均與CO值（0.105）相近，分別為0.144和0.091，在預(yù)期誤差范圍內(nèi)?？梗璈Be有4個標(biāo)本手工操作測定為陽性而本儀器測定為陰性，后經(jīng)雙孔復(fù)測均可判斷為陰性。原因分析，在ELISA乙肝標(biāo)志物檢測中抗－HBe檢測與抗－HBc的檢測方法一樣，都是酶聯(lián)免疫一步競爭法，操作時差較長，使先加樣的標(biāo)本陽性率增加[8]。本次研究中，抗－HBc結(jié)果不相符的3個標(biāo)本及抗－HBe結(jié)果不相符的4個標(biāo)本都在前20個標(biāo)本中，再次手工雙孔復(fù)測均為陰性或弱陰性結(jié)果，這說明本儀器自動加樣時間短，縮短了加樣時差，彌補手工加樣時差對抗－HBe和抗－HBc一步競爭法結(jié)果的影響，在這點上全自動酶聯(lián)免疫儀優(yōu)于手工操作。用1IU／mL的HBsAg質(zhì)控血清進行孔間、板間重復(fù)性試驗，CV%值均低于手工操作測定值，說明該全自動酶聯(lián)免疫儀與手工相比重復(fù)性有一定程度的提高。

ELISA測定不同于一般的臨床化學(xué)或臨床血液學(xué)檢驗，其某一特定的測定批次中不同反應(yīng)孔因標(biāo)本和試劑分配時間或分配量的不一致，會造成明顯的檢測誤差[9－10]。中國臨床免疫檢測儀器不斷發(fā)展進步，從以前的半自動酶標(biāo)儀到現(xiàn)在的全自動酶聯(lián)免疫儀[11]。目前許多檢驗科免疫室都擁有這兩種儀器，在同時使用。但是由于檢測系統(tǒng)的不同，結(jié)果是否具有可比性關(guān)系到檢驗科免疫室的檢測質(zhì)量，所以每年都應(yīng)進行儀器之間的比對。本研究通過比對實驗對TECAN FREEDOM EVOLYZER－2200全自動酶聯(lián)免疫儀的性能進行評價，實驗結(jié)果表明該儀器可以滿足臨床工作需要。但手工操作方法與全自動酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)操作方法存在一定的預(yù)期偏差[12]，特別是處于CO值附近臨床意義可疑的——稱之為“灰區(qū)”的檢測結(jié)果，不易判定時，需要考慮兩種操作方法間的預(yù)期偏差，使同一份標(biāo)本在不同操作系統(tǒng)的檢測結(jié)果保持一致，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確穩(wěn)定。本實驗室剛引進此儀器，要求操作人員嚴格按照儀器和試劑盒說明書進行相關(guān)操作，在使用過程中對本儀器將進行更多的性能檢測，加強儀器的保養(yǎng)與維護，確保給臨床提供更準(zhǔn)確的檢測報告。

[1]朱安友，王鳳超，楊萍，等.全自動酶免分析儀加樣中拖帶陽性的解決方法探討[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，35（8）：817－818.

[2]劉如萱.加樣針污染致不同項目拖帶情況分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（2）：480－481.

[3]趙飛雪.Microlab FAME全自動酶免分析儀檢測的影響因素及質(zhì)量控制[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（13）：1677－1678.

[4]陶義訓(xùn)，吳文俊.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗儀器導(dǎo)論[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：111－115.

[5]陳亞軍，史桂蘭，馮嶺，等.TECAN RMP 150型全自動酶免儀應(yīng)用評價[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，6（10）：33－35.

[6]鄒曉萍，駱展鵬，黎美君，等.大型酶免實驗檢測系統(tǒng)廠家校驗后確認方法的建立及應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生工程學(xué)，2011，10（2）：124－129.

[7]胡成義，劉洋.全自動酶免儀結(jié)果污染因素的分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（10）：940.

[8]曹向紅，王勝虎，李懿，等.操作時差對競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測抗－HBc結(jié)果的影響[J].實用醫(yī)技雜志，2010，17（4）：210－212.

[9]李彩霞，史飛，李佳英.全自動酶標(biāo)儀參數(shù)的設(shè)置對HBe－Ab和HBcAb測定的影響[J].中國醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2009，9（2）：98.

[10]曾俊，張丹桂，王革非，等.酶標(biāo)儀參數(shù)及性能檢測[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，21（3）：177－178.

[11]王新波，魏哲.FAME全自動酶免分析系統(tǒng)的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗，2010，2（2）：187－189.

[12]姚勇，相恒泉，石圓圓.全自動酶免分析系統(tǒng)與手工操作方法的應(yīng)用比較[J].臨床血液學(xué)雜志，2012，25（8）：482－487.