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        鐵皮石斛培養(yǎng)基配方篩選

        2014-02-06 03:45:10朱虹嫻胡佳麗戚正華馬美蘭張悅凱
        浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年11期

        朱虹嫻,胡佳麗,戚正華,馬美蘭,張悅凱

        (東陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,浙江東陽 322100)

        鐵皮石斛培養(yǎng)基配方篩選

        朱虹嫻,胡佳麗,戚正華,馬美蘭,張悅凱

        (東陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,浙江東陽 322100)

        以鐵皮石斛種子、一年生嫩莖為外植體,通過試驗篩選種子培養(yǎng)、原球莖增殖、分化成苗、壯苗生根4個階段的最佳配方。結(jié)果顯示,鐵皮石斛苗在MS培養(yǎng)基中生長狀況最好;種子培養(yǎng)最佳配方為MS+0.5 mg· L-1NAA+15%土豆;當(dāng)添加NAA的濃度為0.2 mg·L-1,6-BA的濃度為2.0 mg·L-1時,鐵皮石斛原球莖的增殖率達(dá)到最高;適合分化的培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-1NAA;鐵皮石斛壯苗生根的較佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-1IBA+0.5 mg·L-1NAA+8%香蕉。

        鐵皮石斛;無菌繁殖;配方篩選

        鐵皮石斛(Dendrobium candidum)為蘭科石斛屬多年附生草本植物,是名貴中藥楓斗的原材料[1],有“除脾下氣,補五臟虛勞羸弱,強陰,久服厚腸胃,輕身延年”[2]之功效。近年來,許多學(xué)者對鐵皮石斛的有效成分及作用進行了研究,表明其含有多糖、氨基酸及多種元素,具有抗衰老、抗腫瘤、降血糖的作用[3]。隨著藥材市場對石斛的需求量不斷上升,多年的過度開采使得野生資源枯竭,用傳統(tǒng)的無性繁殖方式繁殖石斛,其繁殖系數(shù)過低,大面積栽培種苗數(shù)量無法得到滿足,并且成活率低,產(chǎn)量有限,遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了市場的需求[4-5],本試驗旨在通過篩選鐵皮石斛種子培養(yǎng)、原球莖增殖、芽分化及壯苗生根的最適培養(yǎng)基,探索并建立一套適宜鐵皮石斛生長的組培快繁體系,以促進東陽鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        試驗用浙江農(nóng)林大學(xué)提供的鐵皮石斛成熟種子及金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院提供的鐵皮石斛莖段。

        試驗用的試劑有75%酒精,次氯酸鈉,蔗糖,瓊脂,活性炭,芐基腺嘌呤(6-BA),萘乙酸(NAA),吲哚丁酸(IBA);還有土豆(pt)、香蕉(bn)、無菌水。

        1.2 方法

        1.2.1 材料處理

        鐵皮石斛成熟種子經(jīng)自來水沖洗30 min,用75%的酒精浸泡30 s,再用無菌水沖洗3次后備用。

        鐵皮石斛健壯嫩莖用自來水沖洗30 m in,摘去葉片及膜質(zhì)葉鞘,用75%的酒精浸泡30 s,并用5%~10%次氯酸鈉浸泡8~10 min[6],再用無菌水沖洗4~5次,切成0.5 cm莖段備用。

        培養(yǎng)基中添加20 g·L-1蔗糖,6 g·L-1瓊脂,0.5 g·L-1活性炭,調(diào)節(jié)pH值為5.8。

        1.2.2 基本培養(yǎng)基篩選

        將準(zhǔn)備好的莖段均勻接種在MS,1/2MS,B5,M6等4種培養(yǎng)基中,每個培養(yǎng)基配方10瓶,并做好標(biāo)記,每瓶接種10個點,培養(yǎng)條件為溫度25~28℃,光照強度2 000~2 500 lx,時間14 h·d-1,環(huán)境濕度60%~80%。30 d為一個周期,觀察其生長情況。

        1.2.3 初代培養(yǎng)基篩選

        初代培養(yǎng)基配方4種:MS+0.5 mg·L-1NAA+ 15%pt,MS+0.5 mg·L-1NAA,MS+2.0 mg· L-16-BA,MS+2.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA。將準(zhǔn)備好的成熟種子切開均勻撒在添加不同植物激素的4種培養(yǎng)基上,每個配方10瓶,培養(yǎng)條件為溫度20~25℃,光照強度1 500~2 000 lx,時間12 h·d-1,環(huán)境濕度60%~80%。培養(yǎng)30 d,觀察萌發(fā)情況。

        1.2.4 原球莖增殖培養(yǎng)基篩選

        增殖培養(yǎng)基配方為在MS+0.2 mg·L-1NAA的基礎(chǔ)上,分別加0.5,1.0,2.0,3.0 mg·L-16-BA,以不加激素的作對照。種子萌發(fā)后培養(yǎng)的原球莖接種于試驗培養(yǎng)基中,每個配方重復(fù)10次,每瓶接種10個點,培養(yǎng)條件為溫度25~28℃,光照強度2 000~2 500 lx,時間12 h·d-1,環(huán)境濕度60%~80%。培養(yǎng)30 d,觀察增殖情況。

        1.2.5 繼代(分化)培養(yǎng)基篩選

        設(shè)置在加0.0或0.2 mg·L-16-BA的MS培養(yǎng)基上,分別加0.0,0.5,1.0 mg·L-1NAA共6個配方。將增殖所得的原球莖接種于分化培養(yǎng)基中,每個配方重復(fù)10次,每瓶接種10個點,培養(yǎng)條件為溫度25~28℃,光照強度2 000~2 500 lx,時間12 h·d-1,環(huán)境濕度60%~80%。培養(yǎng)30 d,觀察出苗情況。

        1.2.6 壯苗生根培養(yǎng)基篩選

        設(shè)置在加0.0或0.5 mg·L-1IBA的MS加香蕉80 g·L-1的培養(yǎng)基上,分別加0.0,0.5,1.0 mg· L-1NAA共6個配方。將2~3 cm高的小苗轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中,每個配方重復(fù)10次,每瓶接種10個點,培養(yǎng)條件為溫度25~28℃,光照2 500~3 000 lx,時間14 h·d-1,環(huán)境濕度60%~80%。培養(yǎng)60 d,觀察苗的長勢及生根狀況。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 基本培養(yǎng)基

        表1表明,MS,1/2MS和B5基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)的莖段均有小芽冒出,但是MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的莖段產(chǎn)生大量白色小芽,并且小芽生長速度較其他培養(yǎng)基快,所以MS為最佳基本培養(yǎng)基。

        表1 鐵皮石斛莖段在不同基本培養(yǎng)基上的萌發(fā)情況

        2.2 初代培養(yǎng)基

        表2表明,在4個配方的培養(yǎng)基中,添加土豆的配方,種子萌發(fā)得較好,且芽較綠于其他3個配方;添加6-BA激素的培養(yǎng)基,種子萌發(fā)情況不佳;加入一定濃度的NAA,有利于促進種子萌發(fā),使萌發(fā)時間、數(shù)量、生長速度均達(dá)到較理想的水平。

        表2 鐵皮石斛種子不同培養(yǎng)基上的萌發(fā)情況

        2.3 原球莖增殖培養(yǎng)基

        表3表明,添加6-BA激素配合一定的NAA有利于原球莖的增殖,當(dāng)6-BA 2.0 mg·L-1和NAA 0.2 mg·L-1的激素配比時鐵皮石斛原球莖增殖最佳。

        2.4 繼代(分化)培養(yǎng)基

        表4表明,原球莖分化隨NAA濃度的增高而呈現(xiàn)分化不整齊的現(xiàn)象,添加6-BA激素的培養(yǎng)基分化不理想。6個配方以MS+0.5 mg·L-1NAA的較佳。

        表3 鐵皮石斛原球莖在不同培養(yǎng)基上的增殖情況

        2.5 壯苗生根培養(yǎng)基

        表5表明,培養(yǎng)基添加香蕉后,鐵皮石斛壯苗長根速度較快,添加0.5 mg·L-1NAA和0.5 mg· L-1IBA后,苗長勢粗壯,莖段分明,葉片飽滿,而無添加植物生長調(diào)節(jié)劑的則表現(xiàn)葉發(fā)黃、莖不正常、根少。表明MS+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+香蕉80 g·L-1培養(yǎng)基較利于鐵皮石斛壯苗生根。

        表4 鐵皮石斛小苗在不同培養(yǎng)基上的分化情況

        表5 鐵皮石斛壯苗在不同培養(yǎng)基上生根的情況

        3 小結(jié)與討論

        經(jīng)鐵皮石斛從種子萌發(fā)到壯苗生根的培養(yǎng)試驗,得出相應(yīng)的最佳培養(yǎng)基?;九囵B(yǎng)基以MS為宜;種子培養(yǎng)以MS+0.5 mg·L-1NAA+15%pt為最佳,有利于種子轉(zhuǎn)綠及膨大;對于原球莖誘導(dǎo)和增殖,培養(yǎng)基中的激素種類和濃度,以同時添加較高濃度的6-BA(2.0 mg·L-1)和低濃度NAA(0.2 mg·L-1)最好;適合分化的培養(yǎng)基為MS+ 0.5 mg·L-1NAA;壯苗生根以MS+0.5 mg·L-1IBA+0.5 mg·L-1NAA培養(yǎng)基為最佳,莖粗苗高葉長根多,效果最好。當(dāng)培養(yǎng)基中NAA濃度為0.5 mg·L-1時,鐵皮石斛幼苗生根率為100%,且長勢良好、生長健壯。李小軍等[7]認(rèn)為添加香蕉泥對石斛試管苗的生根有利,可以促使幼苗生根時間提前,本試驗也證明了這一點。

        [1] 楊一令,來平凡,蔣士鵬.鐵皮石斛研究進展[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,32(1):82-85.

        [2] 魏·吳普等述,清·孫星衍等輯.神農(nóng)本草經(jīng)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:21.

        [3] 劉燦蘭,尚子義,曲衛(wèi)玲.鐵皮石斛保健產(chǎn)品的研究開發(fā)價值[J].中國民族民間醫(yī)藥,2010:29.

        [4] 包雪聲,順慶生,陳立鉆.中國藥用石斛[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,復(fù)旦大學(xué)出版社,2001.

        [5] 瑞南.珍稀瀕危植物石斛[J].中國林業(yè),2005:15.

        [6] 李桂鋒,鐵皮石斛組培快繁工藝及規(guī)范化生產(chǎn)體系研究[D].廣州中醫(yī)藥,2008:14

        [7] 李小軍,石泉,維陵,等.香蕉提取物對霍山石斛試管苗壯苗的影響[J].江蘇大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2004,25(6):469-472.

        (責(zé)任編輯:張才德)

        S 567

        A

        0528-9017(2014)11-1699-03

        文獻(xiàn)著錄格式:朱虹嫻,胡佳麗,戚正華,等.鐵皮石斛培養(yǎng)基配方篩選[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2014(11):1699-1671.

        2014-08-12

        鐵皮石斛組培育苗培養(yǎng)基的篩選項目

        朱虹嫻(1990-),女,浙江義烏人,本科,主要從事植物組培技術(shù)研究工作。E-mail:739540610@qq.com。

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