周發(fā)為 游文忠 覃仕鋒 唐生堯 (湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院檢驗科，恩施 445000)

小兒激素敏感型腎病綜合征血清中IL-4、IL-5、TGF-β與IL-10水平變化及意義

周發(fā)為 游文忠①覃仕鋒 唐生堯 (湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院檢驗科，恩施 445000)

目的:探討小兒激素敏感型腎病綜合征(SSNS)治療前與恢復(fù)期Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-5和Treg T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β、IL-10水平的變化。方法:納入36例SSNS患兒在治療前和緩解期以及匹配的18例健康體檢兒童，采用ELISA方法檢測其血清IL-4、IL-5、TGF-β和IL-10水平，分析其水平變化與各臨床指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果:SSNS患兒治療前血清IL-4、IL-5顯著高于緩解期以及健康對照組(P＜0.01)，腎病治療前的血清TGF-β顯著低于緩解期以及健康對照組(P＜0.01)，而各組之間的血清IL-10水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);SSNS治療前的血清IL-4水平與血清白蛋白水平負(fù)相關(guān)(R2= －0.694，P=0.000);與血清膽固醇呈正相關(guān)(R2=0.658，P=0.000);血清 TGF-β 表達(dá)水平與血白蛋白呈正相關(guān)(R2=0.838，P=0.000)，與血清膽固醇呈負(fù)相關(guān)(R2= －0.722，P=0.000)。結(jié)論:腎病綜合征患兒血清 IL-4、IL-5 升高以及TGF-β水平降低與SSNS發(fā)病有關(guān)。

腎病綜合征;激素敏感型;兒童;IL-4;IL-5;TGF-β;IL-10

腎病綜合征(Nephrotic syndrome，NS)是兒童最常見的腎小球疾病，其中90%以上為原發(fā)性腎病綜合征(Primary nephrotic syndrome，PNS)[1]。85% 以上的PNS患兒病理類型為微小病變型[1]，而該型在90%以上的兒童對糖皮質(zhì)激素治療敏感[2]。PNS病因尚未完全明了，已有研究表明，其與體液免疫紊亂、異常的 T細(xì)胞反應(yīng)與 Th2細(xì)胞因子關(guān)系密切[3-5]。Th2細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞的激活與PNS發(fā)病密切相關(guān)，Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子可引起腎小球毛細(xì)血管壁的糖蛋白發(fā)生改變[4，6]。此外，近期研究表明，Treg T細(xì)胞功能失調(diào)是成人微小病變型NS發(fā)病的潛在因素[7]。本研究首次同時檢測了小兒激素敏感型腎病綜合征(Steroid-sensitive nephrotic syndrome，SSNS)治療前與緩解期外周血血清中Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-5，Treg T細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子TGF-β、IL-10的變化，分析其與血清白蛋白、膽固醇等臨床指標(biāo)的相關(guān)性，以期為小兒激素敏感型NS的發(fā)病機制與診治提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2010年1月至2012年12月間我院兒科住院的SSNS患兒36例;診斷符合我國最新的《兒童常見腎臟疾病診治循證指南:激素敏感、復(fù)發(fā)/依賴腎病綜合征診治循證指南》[1]。所有病例均是初診病例，之前未接受糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療，排除了繼發(fā)性腎病、感染、肝功能異常以及免疫性疾病、內(nèi)分泌疾病等。確診腎病綜合征后給予潑尼松[2 mg/(kg·d)]治療。足量潑尼松治療≤4周蛋白尿轉(zhuǎn)陰者為SSNS;水腫等臨床癥狀消失，連續(xù)3 d以上蛋白尿轉(zhuǎn)陰為緩解期。

SSNS組平均年齡為6.23歲，最小18個月，最大12歲3個月;男女比例為7∶5;平均身高110.8 cm (85.5 ～150.7 cm)，平均體重22.5 kg(12.1 ～32.7 kg)，血壓平均值95/60 mmHg(85/55～115/70 mm-Hg)。選擇2011年1月至2011年6月在我院兒科門診健康體檢兒童18例為健康對照組。健康對照組平均年齡為5.98歲，最小25個月，最大11歲10個月;男女比例為17∶7;平均身高114.2 cm(87.4 ～142.6 cm)，平均體重 22.5 kg(12.8 ～31.5 kg)，血壓平均值105/65 mmHg(86/50～120/80 mmHg)。兩組之間的性別、年齡、身高、體重等無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性。本研究經(jīng)過湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院倫理委員會審批，所有入選對象的家屬知情并同意。

1.2 觀察指標(biāo)及樣本采集 記錄所有研究對象的年齡、性別、身高、體重、血壓等情況，留取研究對象的清晨空腹血標(biāo)本，均進行血常規(guī)、肝功、腎功、離子、心肌酶、免疫球蛋白、CRP以及抗O的檢測。其中SSNS組在潑尼松治療后緩解期蛋白尿轉(zhuǎn)陰后1周內(nèi)復(fù)測上述指標(biāo)。SSNS組保留治療前以及緩解期血清，置于－70℃保存，待檢測細(xì)胞因子。

1.3 免疫球蛋白以及細(xì)胞因子檢測方法 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM采用OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀檢測，試劑盒為溫州伊利康生物技術(shù)有限公司。IL-4、IL-5、IL-10以及TGF-β均采用ELISA法檢測，ELISA試劑盒購自美國R＆D公司;嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行檢測。

2 結(jié)果

2.1 SSNS血清白蛋白、膽固醇、免疫球蛋白水平SSNS組治療前與緩解期的肝功、血脂檢測結(jié)果表明，活動期血清白蛋白水平顯著下降、膽固醇水平明顯升高;而緩解期白蛋白和膽固醇水平逐漸恢復(fù)正常，與健康對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。免疫球蛋白檢測結(jié)果表明，活動期IgG及IgA水平顯著降低，而緩解期IgG及IgA水平與健康對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)?；顒悠贗gM與緩解期、健康對照組的IgM水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。結(jié)果如表1所示。

2.2 SSNS細(xì)胞因子變化 SSNS組活動期與緩解期的 IL-4、IL-5、IL-10以及TGF-β檢測結(jié)果表明，腎病活動期的血清IL-4、IL-5顯著高于緩解期以及健康對照組(P＜0.01);與健康對照組比，緩解期血清IL-4、IL-5水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。而各組之間的血清IL-10水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。腎病活動期的血清TGF-β顯著低于緩解期以及健康對照組(P＜0.01)，與健康對照組比，緩解期血清TGF-β水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)果如表1所示。

表1 SSNS組和對照組的白蛋白、膽固醇、免疫球蛋白及細(xì)胞因子水平(±s)Tab.1 Levels of albumin，cholesterol，immunoglobulin and cytokines of in serum of SSNS and control group( ± s)

表1 SSNS組和對照組的白蛋白、膽固醇、免疫球蛋白及細(xì)胞因子水平(±s)Tab.1 Levels of albumin，cholesterol，immunoglobulin and cytokines of in serum of SSNS and control group( ± s)

Note:Compared to remission phase of SSNS，1)P ＜0.05.

Nephrotic phase(n=36) Remission phase(n=36) Normal controls(n=20)F P 35.14 ±8.46 30.75 ±9.75 32.34 0.00 34.78 ±9.57 39.45 ±7.45 22.23 0.00 Cholesterol(mmol/L) 7.68 ±2.471) 3.57 ±1.11 2.78 ±0.75 19.28 0.00 IgG(g/L) 0.90 ±0.241) 6.51 ±1.24 7.01 ±1.45 21.45 0.00 IgA(g/L) 0.32 ±0.081) 1.05 ±0.37 1.34 ±0.52 11.34 0.00 IgM(g/L) 0.79 ±0.24 1.13 ±0.47 0.07 ±0.19 4.65 0.12 IL-4(pg/ml) 4.52 ±1.081) 1.87 ±0.24 1.95 ±0.47 7.34 0.00 IL-5(pg/ml) 3.47 ±0.681) 1.21 ±0.45 1.18 ±0.36 6.96 0.01 IL-10(pg/ml) 1.54 ±0.33 1.35 ±0.45 1.75 ±0.24 4.98 0.09 TGF-β(pg/ml) 5.78 ±0.871) Albumin(g/L) 16.87 ±3.511)

2.3 SSNS活動期的細(xì)胞因子與血清白蛋白、血膽固醇的相關(guān)性 線性回歸分析結(jié)果表明，SSNS活動期的血清IL-4水平與血清白蛋白水平負(fù)相關(guān)(R2=－0.694，P=0.000);與血清膽固醇呈正相關(guān)(R2= 0.658，P=0.000);見圖 1;血清 TGF-β 表達(dá)水平與血白蛋白呈正相關(guān)(R2=0.838，P=0.000)，與血膽固醇呈負(fù)相關(guān)(R2= －0.722，P=0.000)見圖2。血清IL-5表達(dá)水平與血白蛋白、膽固醇無顯著相關(guān)性(分別為:R2=0.091，P=0.599;R2= －0.151，P= 0.378);血清IL-10表達(dá)水平與血白蛋白、膽固醇無顯著相關(guān)性(分別為:R2= －0.115，P=0.504;R2=－0.54，P=0.753)。

圖1 線性回歸分析血清IL-4水平和白蛋白(A)、膽固醇(B)水平的相關(guān)性Fig.1 Correlations between serum IL-4 and albumin levels(A)and cholesterol levels(B)by linear regression analysis

圖2 線性回歸分析血清TGF-β水平和白蛋白(A)、膽固醇(B)水平的相關(guān)性Fig.2 Correlations between TGF-β and albumin levels (A)and cholesterol levels(B)by linear regression analysis

3 討論

NS發(fā)病機制復(fù)雜，與免疫因子、免疫紊亂有關(guān)[3-5]。研究證實，NS的Th1/Th2細(xì)胞平衡傾向于Th2表型方向[4]。IL-4、IL-5是 Th2 細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子。本研究中治療前IL-4、IL-5水平顯著升高，而緩解期下降;而且IL-4與血清白蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，與血清膽固醇水平呈正相關(guān)。相關(guān)研究證實，IL-4可與IL-4受體結(jié)合，作用于腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，維護腎小球滲透性[8]。分析IL-4可能與腎病綜合征的蛋白尿產(chǎn)生有關(guān)，是腎病綜合征疾病活動性、嚴(yán)重程度的判斷的標(biāo)志物之一。在 Ohtomo等[9]研究中，靶向抑制IL-4、IL-5分泌的藥物能有效減少SSNS激素用量。也有研究證實，腎病綜合征的治療前血清IL-5水平高于緩解期[4]。

Treg細(xì)胞是一類具有免疫抑制作用的T細(xì)胞亞群，通過釋放IL-10、TGF-β等發(fā)揮抗炎作用以及維持自身免疫耐受功能[10]。本研究表明，SSNS治療前與緩解期、健康對照組的血清IL-10水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);而SSNS活動期的血清TGF-β顯著低于緩解期以及健康對照組(P＜0.01)，與健康對照組比，緩解期血清TGF-β水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。動物實驗證明，Treg細(xì)胞功能紊亂和急性腎損傷等腎病有關(guān)[11，12]。局部Treg細(xì)胞比例減少導(dǎo)致組織炎癥，與蛋白尿和腎病綜合征啟動有關(guān)[13]。成人腎病綜合征Th17/Treg比例增加，血清TGF-β水平升高與尿蛋白增加、血白蛋白下降有關(guān)，在腎臟表現(xiàn)出促炎、促纖維化的作用[14]。蛋白尿增加促進TGF-β分泌，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化[15]。另一方面，有研究證實，血清的低水平TGF-β、IL-10可通過增加Treg細(xì)胞的比例對腎臟產(chǎn)生保護作用[7]。本研究中，SSNS治療前的血清TGF-β表達(dá)水平與血清白蛋白呈正相關(guān)(R2=0.838，P=0.000)，與血清膽固醇呈負(fù)相關(guān)，也提示TGF-β可能是SSNS的保護因素。

總之，SSNS治療前Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-5顯著升高，Treg T細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子TGF-β顯著下降;且IL-4與血清白蛋白呈負(fù)相關(guān)，與血清膽固醇呈正相關(guān);TGF-β與血清白蛋白呈正相關(guān)，與血清膽固醇呈負(fù)相關(guān)，這提示IL-4、IL-5與 TGF-β參與了SSNS的發(fā)病過程。

[1]中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會腎臟病學(xué)組.兒童常見腎臟疾病診治循證指南(一):激素敏感、復(fù)發(fā)/依賴腎病綜合征診治循證指南(試行)[J].中華兒科雜志，2009，47(3):167-170.

[2]Ulinski T，Aoun B.Pediatric idiopathic nephrotic syndrome: Treatment strategies in steroid dependent and steroid resistant forms[J].Current Medicinal Chemistry，2010，17(9): 847-853.

[3]丁 楠，郝 麗，黎 淮，等.原發(fā)性腎病綜合征患者免疫指標(biāo)變化的臨床意義探討[J].中國免疫學(xué)雜志，2011，27(4): 356-359，381.

[4]Kanai T，Shiraishi H，Yamagata T，et al.Th2 cells predominate in idiopathic steroid-sensitive nephrotic syndrome[J].Clinical and Experimental Nephrology，2010，14(6):578-583.

[5]Ohta K，Shimizu M，Yokoyama T，et al.Evaluation of t-cell receptor diversity in pediatric patients with minimal change nephrotic syndrome[J].Clinical Nephrology，2012，77(4):296-304.

[6]Le Berre L，Herve C，Buzelin F，et al.Renal macrophage activation and th2 polarization precedes the development of nephrotic syndrome in buffalo/mna rats[J].Kidney Int，2005，68(5): 2079-90.

[7]Liu LL，Qin Y，Cai JF，et al.Th17/treg imbalance in adult patients with minimal change nephrotic syndrome[J].Clin Immunol，2011，139(3):314-320.

[8]Van den Berg JG，Aten J，Chand MA，et al.Interleukin-4 and interleukin-13 act on glomerular visceral epithelial cells[J].J Am Soci Nephrol，2000，11(3):413-422.

[9]Ohtomo Y，F(xiàn)ujinaga SI，Hattori M.Suplatast tosilate dimethylsulfonium treatment for steroid-dependent nephrotic syndrome[J].Pediatrics International，2005，47(2):230-231.

[10]Weaver CT，Hatton RD.Opinion interplay between the t(h)17 and t-reg cell lineages:A(co-)evolutionary perspective[J].Nature Reviews Immunology，2009，9(12):883-889.

[11]Wang YM，McRae JL，Robson SC，et al.Regulatory t cells participate in cd39-mediated protection from renal injury[J].Eur J Immunol，2012，42(9):2441-2451.

[12]Monteiro RMM，Camara NOS，Rodrigues MM，et al.A role for regulatory t cells in renal acute kidney injury[J].Trans Immunol，2009，21(1):50-55.

[13]Shao XS，Yang XQ，Zhao XD，et al.The prevalence of th17 cells and foxp3 regulate t cells(treg)in children with primary nephrotic syndrome [J].Pediatric Nephrol，2009，24(9): 1683-1690.

[14]de Mik SML，Hoogduijn MJ，de Bruin RW，et al.Pathophysiology and treatment of focal segmental glomerulosclerosis:The role of animal models[J].BMC Nephrol，2013，14(1):74.

[15]Qi W，Chen XM，Holian J，et al.Transforming growth factor-beta(1)differentially mediates fibronectin and inflammatory cytokine expression in kidney tubular cells[J].Am J Physiol-Renal Physiol，2006，291(5):1070-1077.

[收稿2013-11-21]

(編輯 張曉舟)

ChangesofIL-4，IL-5，TGF-β and IL-10 in pediatricsteroid-sensitive nephrotic syndrome

ZHOU Fa-Wei，YOU Wen-Zhong，TAN Shi-Feng，TANG Sheng-Rao.Department of Department of Clinical Laboratory，University Hospital of Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China

Objective:To clarify the dynamics of Th2 related cytokines IL-4、IL-5 and the Treg T cell related cytokines TGF-β、IL-10 in children with primary steroid-sensitive nephrotic syndrome(SSNS)from the nephrotic phase before steroid treatment to the remission phase.MethodsAll 36 SSNS patients and 18 healthy controls matched for age，gender，body weight and height were enrolled，and their clinical characteristics were evaluated.Serum cytokine level was measured by ELISA assay.The serum levels of interleukin (IL)-4，IL-5，IL-10 and transforming growth factor(TGF)-β were compared and correlated with serum albumin and cholesterol.ResultsSerum IL-4 and IL-5 levels in SSNS of nephrotic phase were higher than serum IL-4 and IL-5 levels of SSNS of remission phase and the healthy control，respectively.The serum TGF-β levels of the nephrotic phase were significantly lower than those of remission phase or control group，whereas the serum IL-10 levels showed no significant difference between nephrotic phase and remission phase of SSNS or control group.The serum IL-4 levels had a negative correlation with serum albumin(R2= －0.694，P=0.000)，and a positive correlation with serum albumin levels(R2=0.658，P=0.000)，whereas the serum TGF-β levels had a positive correlation with serum albumin(R2=0.838，P=0.000)，and a negative correlation with serum albumin levels，had(R2= － 0.722，P=0.000).ConclusionThis study indicates that IL-4，IL-5 and TGF-β level is related to the pathogenesis of pediatric SSNS.

Nephrotic syndrome;Steroid-sensitive;Children;IL-4;IL-5;TGF-β;IL-10

R725

A

1000-484X(2014)05-0673-04

10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.023

①湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院兒科，恩施445000。

周發(fā)為(1971年－)，副主任技師，檢驗科主任，主要從事檢驗工作方面的研究，E-mail:zfwmdyyy@sina.com。

book=676,ebook=132