何惠華 張芳華

HPV不同高危亞型在宮頸腺癌、宮頸鱗癌中的表達(dá)及臨床意義研究

何惠華①?gòu)埛既A②

目的：研究HPV不同的高危亞型在宮頸腺癌和宮頸鱗癌中的表達(dá)差異，從而得出在宮頸癌的醫(yī)學(xué)治療中HPV所發(fā)揮的作用。方法：采用引物及多重型特異聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)60例門診宮頸癌患者（其中宮頸腺癌30例，宮頸鱗癌30例）在石蠟包埋組織中HPV六種高危亞型（HPV16、18、31、33、45、16/18）的感染情況，分析不同HPV高危型在宮頸癌與宮頸鱗癌中的存在意義。結(jié)果：對(duì)60例宮頸癌患者檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)：其包埋組織中HPV感染率分別為71.7%、80.0%；通過引物聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)感染有脫漏的現(xiàn)象，HPV在宮頸癌中的比例較高占主要地位。HPV高危亞型存在不同的表達(dá)形式：HPV18與宮頸腺癌最具相關(guān)性，HPV16則與宮頸鱗癌密切相關(guān)，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高危型HPV感染與宮頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小、臨床分析、及組織學(xué)分級(jí)均無關(guān)（P>0.05）。HPV18感染與年齡及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05）。結(jié)論：HPV亞型在不同組織類型中的表達(dá)差異，在一定程度上解釋了宮頸腺癌不同組織的發(fā)病機(jī)制，在臨床和指導(dǎo)預(yù)測(cè)預(yù)后方面發(fā)揮了重要作用。

宮頸鱗癌； 宮頸癌； 聚合酶鏈反應(yīng)

由于現(xiàn)代女性角色的轉(zhuǎn)變導(dǎo)致的壓力增大以及生活快節(jié)奏導(dǎo)致分泌的紊亂，女性的生殖健康受到了社會(huì)的廣泛關(guān)注，其中以宮頸癌最常見[1-2]。本文從HPV不同高危亞型在宮頸腺癌、宮頸鱗癌中的表達(dá)進(jìn)行分析，從而得出其在臨床上所發(fā)揮的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 根據(jù)Maier和Norris提出的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3-4]，隨機(jī)選取2000-2010年間在同一醫(yī)院收治的60例宮頸癌患者，其中鱗癌30例，內(nèi)膜癌15例，腺鱗癌6例，透明細(xì)胞癌7例，子宮內(nèi)膜樣腺癌2例，并取其臘塊標(biāo)本，保留患者完整的病歷資料，并根據(jù)FIGO提出的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，所有患者的一般資料見表1。

表1 60例患者一般資料

1.2 方法 依據(jù)科學(xué)的原理，在試驗(yàn)室的試管內(nèi)對(duì)提取的60塊蠟塊標(biāo)本進(jìn)行DNA聚合酶以及特型引物下PCR擴(kuò)增的研究。對(duì)60例患者石蠟包埋組織中的HPV感染情況應(yīng)用兩種檢測(cè)方法，即引物、多重型特異性酶鏈聚合反應(yīng)[5]。石蠟標(biāo)本脫蠟水化，超純水洗滌后自然風(fēng)干，然后按照DNA提取試劑盒說明書來提取DNA，對(duì)DNA濃度及純度進(jìn)行測(cè)定，DNA電泳分析，PCR擴(kuò)增的引入，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種引物擴(kuò)增陽(yáng)性率比較 應(yīng)用通用引物和多重型特異性聚合酶鏈反應(yīng)中HPV的感染率分別為71.7%（43/60）、80.0%（48/60），通過引物聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)感染有脫漏的現(xiàn)象，因此在結(jié)果統(tǒng)計(jì)時(shí)以多重型引物擴(kuò)增的HPV感染率為準(zhǔn)。

2.2 高危型HPV不同亞型在宮頸癌中的表達(dá)情況HPV18在宮頸腺癌與宮頸鱗癌的陽(yáng)性率分別為40.0%、13.3%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPV16在宮頸腺癌與宮頸鱗癌中的陽(yáng)性率分別為33.3%、66.7%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPV16與宮頸鱗癌密切相關(guān)，HPV18與宮頸腺癌密切相關(guān)；其他數(shù)據(jù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 高危型HPV亞型與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 HPV陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小、病理分級(jí)、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P>0.05），見表3。

2.4 高危型HPV18與宮頸腺癌患者的病理關(guān)系 高危型HPV18型在宮頸腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表 4。

表2 高危型HPV不同亞型在宮頸癌中的表達(dá)情況 %

表3 高危型HPV亞型與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 例

表4 高危型HPV18與宮頸腺癌患者的病理關(guān)系 例

3 結(jié)論

HPV感染是宮頸癌的主要致病因素之一，HPV感染與組織癌的進(jìn)展和分化無關(guān)聯(lián)，只存在于與其他基因的協(xié)同作用來影響宮頸癌的進(jìn)展及預(yù)后[7]。感染中最常見的HPV16在不同組織中人乳頭瘤病毒高危亞型感染情況具有差異性，HPV18型和HPV16型在宮頸腺癌與宮頸鱗癌中的差異較明顯，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。只是相關(guān)的對(duì)象不同，前者為宮頸腺癌，后者為宮頸鱗癌。HPV亞型在宮頸腺癌中的表達(dá)不同，透明細(xì)胞癌中為檢測(cè)到HPV感染[8-9]。HPV屬于性傳播性疾病，HPV18為其提供相關(guān)依據(jù)。檢測(cè)宮頸癌組織中在HPV感染情況，更適用于針對(duì)高危型引物，而通過引物才使用與早期病變的粗查以及普通人群的篩選[10-11]。綜上所述，宮頸腺癌類型的不同，在很大程度上引起HPV亞型的表達(dá)差異。本文對(duì)于HPV亞型在不同組織類型中的表達(dá)差異，在一定程度上解釋了宮頸腺癌不同組織的發(fā)病機(jī)制，以利于學(xué)者研究其臨產(chǎn)病理特征的不同，在臨床和指導(dǎo)預(yù)測(cè)預(yù)后方面發(fā)揮了重要作用。

[1]褚宏雁.HPV感染與宮頸癌及癌前病變相關(guān)性臨床分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2013，15（4）：153-154.

[2]李慧紅，肖長(zhǎng)義，袁太寧，等.宮頸癌HeLa細(xì)胞內(nèi)HPV L1蛋白表達(dá)的觀察[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2013，29（3）：260-264.

[3]張杰東，向麗，周鐵軍，等.宮頸腺癌中高危型HPV病毒感染與NF-κBp65、P16表達(dá)的相關(guān)性研究術(shù)[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，36（1）：27-30.

[4]陳文.宮頸腺癌和宮頸鱗癌中HPV型別感染及其與發(fā)病年齡的關(guān)系：一項(xiàng)來自多中心的研究[J].中國(guó)腫瘤，2012，21（12）：951-955.

[5]彭孝蓮，吳宜林，孟杰，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3表達(dá)及D2-40標(biāo)記的微淋巴管密度與宮頸鱗癌淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2010，9（12）：19.

[6]丁永慧，徐永輝.MDM2和p53在宮頸鱗癌中的表達(dá)及與高危型HPV感染的關(guān)系[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（1）：26-28.

[7]朱麗娜.子宮頸細(xì)胞學(xué)ASC-US并高危型HPV檢查陽(yáng)性病例組織病理學(xué)分析[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2013，29（3）：334-337.

[8]粱勇，劉菁，李惠容.高危型HPV病毒負(fù)荷量與宮頸病變的相關(guān)性研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（8）：115-116.

[9]周靜，肖松舒，鄧新糧，等.HPVI6型E6蛋白在外陰上皮內(nèi)非瘤樣病變和外陰鱗癌中的表達(dá)[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，10（9）：225-230.

[10]黨裔武.HPV在廣西宮頸疾病中的感染及其亞型分布的研究[D].廣西醫(yī)科大學(xué)，2010.

[11]劉金艷.HIF-1α、Ki-67和P27在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[D].蘇州大學(xué)，2012.

Objective:To study the different high-risk subtypes of HPV in cervical adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the uterine cervix expression，so that the medical treatment of cervical cancer in the role of HPV.Method:60 patients with cervical cancer outpatients （including 30 cases of cervical adenocarcinoma，30 cases of cervical squamous cell carcinoma） were detected by specific primers and more severe polymerase chain reaction in paraffin embedded tissues six risk HPV subtypes （HPV16，18，31，33，45，16/18） of infection，the different highrisk HPV types in cervical cancer and cervical squamous cell carcinoma of the meaning of existence were analyzed.Result：60 cervical cancer patients after inspection found that the organization of the embedding of HPV infection rates were 71.7% and 80.0%，by primer polymerase chain reaction detection of infection with the phenomenon of ellipsis，the higher percentage of HPV in cervical cancer.The high-risk HPV subtypes had different forms：the relationship between HPV18 and cervical cancer，HPV16 was closely associated with cervical squamous cell carcinoma，the differences were statistically significant（P<0.05）.High risk HPV infection and cervical lymph node metastasis，tumor size，clinical analysis，and histological grade were independent（P>0.05），HPV18 infection was related to age and lymph node metastasis closely（P<0.05）.Conclusion:HPV subtypes expression differences in different tissue types，to some extent，explain the pathogenesis of cervical adenocarcinoma different organizations，in clinical play an important role in predicting prognosis and guiding clinical.

Cervical cancer； Cancer； Polymerase chain reaction

Tongji Hospital Affiliated to Xiaogan Central Hospital of Huazhong University of Science and Technology，Xiaogan 432100，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.14.002

①華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院附屬孝感市中心醫(yī)院 湖北 孝感432100

②湖北市孝感市婦幼保健院

張芳華

2014-03-21） （本文編輯：歐麗）