王明明 劉慧 丁偉 劉國鳳 蔣玉紅

肺炎支原體兩種檢測方法的比對分析

王明明①劉慧①丁偉①劉國鳳①蔣玉紅①

目的：探討肺炎支原體（MP）咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清間接免疫熒光法（IIFA）兩種檢測方法的不同。方法：將198例疑似MP感染的患兒根據(jù)年齡分為兩組： A組（0～3歲，n=75）、B組（3～12歲，n=123），分別取咽拭子用PCR法測MP-DNA，取血清用IIFA法測MP-IgM，比較兩種方法的陽性率。結(jié)果：MPDNA檢測陽性率為57.07%，MP-IgM檢測陽性率為47.47%，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。A組MPDNA陽性率48.00%明顯高于同組MP-IgM陽性率25.33%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；B組MP-DNA和MPIgM陽性率分別為62.60%、60.98%比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論：PCR與IIFA聯(lián)合檢測可以提高MP感染診斷的準確性。

肺炎支原體； 聚合酶鏈反應； 間接免疫熒光法； 肺炎支原體抗體

肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，MP）是小兒呼吸道感染的常見病原體之一，主要通過呼吸道傳染，臨床表現(xiàn)多種多樣，以呼吸道感染最為多見，并可引起全身各臟器損害[1]。MP的實驗室檢測方法有很多，近年來發(fā)展的咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清間接免疫熒光法（IIFA）法均具有快速、敏感性高的優(yōu)點[2]。為了客觀評價這兩種方法的異同，本研究對198例疑似肺炎支原體肺炎患兒分別采集咽拭子和血清同時用咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清間接免疫熒光法（IIFA）檢測MP，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院兒科收治的疑似MP感染的急性呼吸道感染患兒198例，年齡0～12歲，根據(jù)年齡將其分為兩組：A組（0～3歲，n=75）、B組（3～12歲，n=123）。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 杭州博日line gene PCR擴增儀，ZEISS型熒光顯微鏡。PCR法試劑盒由凱杰生物工程有限公司生產(chǎn)提供；IIFA法檢測試劑盒由西班牙VIRCELL公司生產(chǎn)提供。

1.3 方法 用滅菌棉簽采集受試者咽部樣本用PCR法檢測MP-DNA，同時采集患兒靜脈全血，常規(guī)分離血清后用IIFA法檢測MP-IgM。操作方法均嚴格按照說明書進行。

1.4 小兒肺炎支原體肺炎臨床診斷標準 持續(xù)劇烈咳嗽；全身癥狀比胸部體征明顯；X射線所見較體征顯著，胸片可見兩肺均勻一致的片狀陰影成似大葉性肺炎改變，肺門陰影增濃；白細胞計數(shù)正?；蛏愿?，血沉多增快；應用大環(huán)內(nèi)酯類效果好，其他抗生素如青霉素、頭孢無效[3-4]。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 12.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 MP-DNA和MP-IgM檢測陽性率比較 MP-DNA檢測陽性率為57.07%（113/198），MP-IgM檢測陽性率為47.47%（94/198），兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

2.2 兩組MP-DNA和MP-IgM檢測陽性率比較 A組MPDNA陽性率明顯高于同組MP-IgM陽性率，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；B組MP-DNA和MP-IgM陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 兩組MP-DNA和MP-IgM檢測陽性率比較 例（%）

3 討論

支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，是介于細菌和病毒之間能在無活性細胞的人工培養(yǎng)基上生長繁殖的最小微生物，支原體肺炎主要通過飛沫傳播，潛伏期可達2～3周[5]。近幾年來，MP感染所致的呼吸道疾病逐年增多，非流行年份占小兒肺炎病因的10%～20%，在流行年份可達30%，并且每隔4～6年發(fā)生1次地區(qū)性流行[6-8]。學齡兒童及嬰幼兒普遍易感。臨床表現(xiàn)多種多樣，病情輕重不等，病程長，易反復，肺外并發(fā)癥較多見[1]。因其對常用抗生素不敏感，經(jīng)驗用藥易延誤病情，增加患兒痛苦和加重經(jīng)濟負擔，因此早期診斷對臨床的治療尤為重要。目前，臨床上用于MP感染早期檢測的實驗室方法有咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法測MP-DNA和血清間接免疫熒光法（IIFA）測MP-IgM，具有敏感度高、特異性強、操作簡便快速的特點，可作為早期診斷肺炎支原體感染的客觀指標，適合臨床實驗室應用[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，198例患兒，咽拭子PCR法測MP-DNA陽性率57.07%，IIFA法測血清MP-IgM陽性率47.47%，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這是因為血清MP-IgM檢測受病程影響較大，MP感染后刺激機體產(chǎn)生IgM抗體，發(fā)病后約7 d可在血清中檢出，3～6周達高峰，之后逐漸消失。PCR技術(shù)檢測MP-DNA的方法，是一種體外擴增特異DNA片段的新技術(shù)，它可以在短時間內(nèi)使極微量的核酸片斷擴增至數(shù)百萬個拷貝[11-12]，具有特異性強、靈敏度高和簡便快捷的優(yōu)點，檢測結(jié)果不受病程影響，在疾病早期即可檢出，從而明確診斷。

本研究結(jié)果表明，A組（0～3歲）中咽拭子PCR測MP-DNA的陽性率明顯高于肺炎支原體 MP-IgM的檢測（P<0.01）。這是因為嬰幼兒自身免疫系統(tǒng)尚不完善，不能對病原體產(chǎn)生正常免疫應答，在MP感染情況下也可不產(chǎn)生MP-IgM抗體或者感染MP后因MP-IgM抗體效價較低不易被檢出，導致漏診。而分子生物學方法檢測則受年齡的影響小[13]。本研究中0～3歲患兒MP-IgM陽性率僅25.33%，遠低于MP-DNA陽性率48.00%。對此年齡段患兒應首選咽拭子PCR法檢測MP–DNA，不僅取樣方便，無創(chuàng)傷，且檢出率較高。B組（3～12歲）中咽拭子PCR測MP-DNA陽性率62.60%，MP-IgM陽性率60.98%，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。PCR方法雖具有很高的敏感性，但如實驗室質(zhì)控不嚴易出現(xiàn)污染導致假陽性，同時由于目前MP在呼吸道的攜帶狀況尚不明確，也沒有一個確切的域值可以區(qū)分MP在呼吸道的攜帶與感染，因此僅依據(jù)PCR陽性結(jié)果進行診斷可能高估MP的感染率[14-15]。相對而言IIFA特異性很高，檢測結(jié)果陽性基本可以確定為MP感染。

綜上所述，PCR法和IIFA法檢測MP各有其特點，如能聯(lián)合應用兩種方法用于MP感染的早期檢測，不但有利于疾病的診斷，而且可以有效地避免漏檢，提高檢測的準確性，為臨床醫(yī)生提供快速可靠的檢驗依據(jù)。

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Objective:To compare the differences between polymerase chain reaction（PCR） and indirect immunofluorescence （IIFA） for detecting the Mycoplasma pneumoniae（MP）.Method:A total of 198 children with suspected MP infection were divided into group A （0-3 years old，n=75） and group B （3-12 years old，n=123） according to their ages.Oropharyngeal swabs and blood were collected from the children，MP-DNA was detected by PCR and MP-IgM was detected by IIFA separately.The positive rate of two methods were compared.Result:The positive rate of MP-DNA detection and MP-IgM were 57.07%，47.47%，the difference was statistically significant（P<0.01）.In group A the positivity of MPDNA（48.00%） was significantly higher than the MP-IgM（25.33%），the difference was statistically significant（P<0.01），and there was no significant difference of MP-DNA（62.60%） and MP-IgM（60.98%） in group B（P>0.05）.Conclusion:The joint detection of PCR and IIFA can improve MP detecting accuracy.

Mycoplasma pneumoniae； PCR； IIFA； MP antibody

Qingdao Women and Child Hospital，Qingdao 266012，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.10.054

①山東省青島市婦女兒童醫(yī)院 山東 青島 266012

蔣玉紅

2014-01-13） （本文編輯：歐麗）