王雅玲 李美蓉 宋亭亭

瘦素與腎上腺髓質(zhì)素在不同子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)及意義

王雅玲①李美蓉②宋亭亭①

目的：了解瘦素、腎上腺髓質(zhì)素在子宮平滑肌腫瘤（UMST）中的表達(dá)及意義。方法：對(duì)30例良性子宮平滑肌瘤（UL）、30例富于性子宮平滑肌瘤（CL）及10例子宮平滑肌肉瘤（LMS）應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)瘦素與腎上腺髓質(zhì)素（ADM）的表達(dá)。結(jié)果：LMS組瘦素表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于CL組和UL組（P<0.05），且CL組表達(dá)陽(yáng)性率高于UL組（P<0.05）；LMS組ADM表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于CL組和UL組（P<0.05），且CL組表達(dá)陽(yáng)性率高于UL組（P<0.05）。結(jié)論：瘦素和ADM的表達(dá)可能在UMST的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

子宮平滑肌腫瘤； 瘦素； 腎上腺髓質(zhì)素

子宮平滑肌腫瘤（UMST）是女性生殖器官最常見(jiàn)的腫瘤，由平滑肌和結(jié)締組織組成，常見(jiàn)于30～50歲婦女，且目前臨床上30歲以下的女性發(fā)病率越來(lái)越高。子宮平滑肌腫瘤有良性、交界性與惡性之分，其中惡性腫瘤表現(xiàn)為子宮平滑肌肉瘤。良性平滑肌瘤預(yù)后較好；子宮平滑肌肉瘤預(yù)后差，治療效果不佳；交界性平滑肌瘤一般預(yù)后好，但組織病理學(xué)與平滑肌肉瘤難以鑒別，容易誤診，且近年來(lái)發(fā)病率顯著增高。本文通過(guò)瘦素及腎上腺髓質(zhì)素（ADM）在不同平滑肌腫瘤中的表達(dá)為臨床病理診斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并以期為鑒別子宮平滑肌腫瘤良惡性提供新的輔助診斷指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院2006-2012年手術(shù)切除且資料完整的良性平滑肌瘤（UL）30例、富于細(xì)胞性平滑肌瘤（CL）30例、平滑肌肉瘤（LMS）10例。所有子宮平滑肌瘤的病理診斷均根據(jù)已知的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有選取的USMT組織蠟塊為4 μm切片，經(jīng)HE染色并由2位有經(jīng)驗(yàn)的婦科病理醫(yī)師在雙盲的情況下復(fù)核原診斷。

1.2 試劑 Leptin（兔抗人單克隆抗體）、ADM（兔抗人單克隆抗體）、山羊抗兔二抗均購(gòu)自武漢博士德生物公司。

1.3 免疫組化化學(xué) 石蠟標(biāo)本作4 μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟，pH 6.0枸櫞酸液高壓熱修復(fù)，3% H2O2消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶20 min，滴加一抗4 ℃過(guò)夜，滴加山羊抗兔二抗1 h后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹(shù)膠封片。每次實(shí)驗(yàn)以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 免疫組化結(jié)果判定 Leptin的效應(yīng)產(chǎn)物為棕色顆粒，分布于細(xì)胞漿，ADM效應(yīng)產(chǎn)物為棕色顆粒，分布于細(xì)胞漿及細(xì)胞膜。在400倍鏡視野下隨機(jī)選取切片中至少5個(gè)區(qū)域，計(jì)數(shù)陽(yáng)性染色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，取其平均值為該切片的陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，可分為5級(jí)：0分：染色細(xì)胞<5%；1分：染色細(xì)胞5%～25%；2分：染色細(xì)胞25%～50%；3分：染色細(xì)胞50%～75%；4分：染色細(xì)胞>75%。染色強(qiáng)度分為4級(jí)：0分：不顯色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：深棕色。兩者相加為最終免疫組化結(jié)果（0～1為-，2～3為+，4～5為++，6～7為 +++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料比較采用 檢驗(yàn)或者Fisher確切概率法，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在30例UL中，瘦素陽(yáng)性表達(dá)11例（36.7%），ADM陽(yáng)性表達(dá)10例（33.33%）；30例CL中，瘦素陽(yáng)性表達(dá)22例（73.3%），ADM陽(yáng)性表達(dá)21例（70.0%）；10例LMS中，瘦素陽(yáng)性表達(dá)10例（100%），ADM陽(yáng)性表達(dá)9例（90.0%）。CL組瘦素表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于UL組（P<0.05），LMS組瘦素表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于UL組及CL組（P<0.05；CL組ADM表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于UL組（P<0.05），LMS組ADM表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于UL組及CL組（P<0.05），見(jiàn)表1、表2。

表1 瘦素在USMT的免疫組化結(jié)果

表2 AMD在USMT的免疫組化結(jié)果

3 討論

子宮平滑肌腫瘤是婦科最常見(jiàn)的腫瘤，好發(fā)于30～50歲婦女，近年來(lái)30歲以下的患病率呈上升趨勢(shì)。子宮平滑肌腫瘤分為良性、交界性與惡性腫瘤。惡性子宮平滑肌腫瘤即平滑肌肉瘤，臨床較少見(jiàn)，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道≤1%[1]，治療效果不佳，預(yù)后差。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道，在子宮良性平滑肌瘤與肉瘤之間存在一組罕見(jiàn)的交界性腫瘤，即特殊類(lèi)型的子宮平滑肌瘤。特殊類(lèi)型的子宮平滑肌瘤包括：富于細(xì)胞性平滑肌瘤（CL）、奇異性平滑肌瘤（BL）、血管性平滑肌瘤、上皮樣平滑肌瘤、靜脈內(nèi)平滑肌瘤病、彌漫性平滑肌瘤病、良性轉(zhuǎn)移性平滑肌瘤病、脂肪平滑肌瘤、卒中性平滑肌瘤、核分裂活躍型平滑肌瘤等。子宮富于細(xì)胞型平滑肌瘤即是其中之一，占子宮平滑肌腫瘤的3.7%，具有生長(zhǎng)迅速、容易復(fù)發(fā)及具有惡變傾向的特點(diǎn)。目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。在組織病理學(xué)上，因鏡下細(xì)胞可異常豐富，甚至出現(xiàn)個(gè)別異型細(xì)胞[2-3]，與平滑肌肉瘤難以鑒別，容易誤診，且近年來(lái)發(fā)病率顯著提高，因而給日常診療工作帶來(lái)很大的困難。

瘦素是肥胖基因的表達(dá)產(chǎn)物，主要由白色脂肪組織分泌，對(duì)人體調(diào)節(jié)能量平衡和脂肪代謝起重要的作用，與人類(lèi)多種惡性腫瘤的發(fā)病存在相關(guān)性。雌激素、CCAAT∕增強(qiáng)子結(jié)合蛋白-α能使瘦素表達(dá)和分泌增多，瘦素通過(guò)與ob-R結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用，通過(guò)作用于下丘腦調(diào)節(jié)食欲和能量代謝，還可與多種激素、細(xì)胞因子、酶等組成調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，參與下丘腦-垂體-性腺軸、造血、免疫反應(yīng)、血管形成等生理和病理過(guò)程[4-5]。瘦素與血管增生密切相關(guān)，是一種血管生成刺激因子，能夠誘導(dǎo)體內(nèi)絨膜尿囊膜（CAM）和鼠角膜的血管生成[6]。瘦素促增殖的作用主要發(fā)生在血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、結(jié)腸細(xì)胞及乳腺癌細(xì)胞。瘦素可通過(guò)內(nèi)源性血管增生刺激因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子等間接促進(jìn)血管生成。瘦素通過(guò)上調(diào)凋亡抑制因子白細(xì)胞介素-2以減低微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡[7-8]。惡性腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)較快，需要大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)，故血管分布較廣，密度較高。本研究顯示瘦素在LMS組織中的表達(dá)高于UL組和CL組，推測(cè)瘦素在UL、CL的生長(zhǎng)中發(fā)揮著重要的作用。由以上可見(jiàn)，在良性腫瘤中瘦素不呈過(guò)度表達(dá)，腫瘤惡性程度越高，其表達(dá)越高，說(shuō)明CL是有別于惡性腫瘤的。

ADM主要來(lái)源于血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞，以血管內(nèi)皮細(xì)胞為主，屬于降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）家庭成員。ADM和CGRP受體、ADM特異性受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)反應(yīng)。ADM受體活化后通過(guò)Gs蛋白介導(dǎo)的腺苷酸環(huán)化酶系統(tǒng)、細(xì)胞內(nèi)鈣離子通路、NO信號(hào)途徑、絲裂原活化激酶通路和ATP依賴(lài)的K+通路實(shí)現(xiàn)其功能。ADM的促腫瘤生長(zhǎng)機(jī)制：（1）ADM是一種新的促細(xì)胞分裂的多肽，它可誘導(dǎo)細(xì)胞系中cAMP應(yīng)答，通過(guò)絡(luò)氨酸激酶和有絲分裂原活性蛋白激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡[9]；（2）通過(guò)一氧化氮依賴(lài)途徑抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，降低腫瘤細(xì)胞的凋亡率；（3）ADM抑制T淋巴細(xì)胞的分化和細(xì)胞毒性作用，抑制或下調(diào)巨噬細(xì)胞的功能，增強(qiáng)補(bǔ)體因子H的補(bǔ)體調(diào)節(jié)功能，并抑制補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)的旁路途經(jīng)，間接抑制機(jī)體免疫反應(yīng)，從而使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視[10]；（4）ADM與血管內(nèi)皮細(xì)胞的CGRP受體結(jié)合，或結(jié)合于其特異受體，通過(guò)cAMP一氧化氮途經(jīng)松弛血管、擴(kuò)張血管，也增加了腫瘤經(jīng)血液轉(zhuǎn)移的可能；（5）ADM可直接刺激腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本研究結(jié)果表明，ADM蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在LMS組顯著高于UL組和CL組﹙P<0.05），提示LMS發(fā)病機(jī)制與ADM的表達(dá)有關(guān)。ADM蛋白陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤從良性、交界性到惡性的發(fā)展而遞增，提示CL為介于子宮良惡性腫瘤間的一種特殊類(lèi)型的腫瘤。

綜上所述，瘦素、ADM的表達(dá)隨子宮平滑肌腫瘤惡性程度的增加而增加，故在USMT中應(yīng)用免疫組化檢測(cè)瘦素、ADM的表達(dá)可提示腫瘤的良惡性。另外可進(jìn)一步證明，子宮富于細(xì)胞性平滑肌瘤是一種介于良惡性子宮平滑肌腫瘤間的特殊類(lèi)型的腫瘤。瘦素、ADM在多種腫瘤中均發(fā)揮重要作用，因而有望成為腫瘤病理診斷的指標(biāo)，也可阻斷其作用途徑成為治療腫瘤的一個(gè)新靶點(diǎn)。

[1]王義忠.子宮平滑肌腫瘤臨床病理特點(diǎn)分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2013，13（7）：108.

[2]趙玉芳.376例子宮平滑肌腫瘤的病理分析及其臨床診斷[J].中外醫(yī)療，2011，30（26）：30.

[3]劉旭初.子宮富于細(xì)胞性平滑肌瘤29例臨床病理分析[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2013，71（4）：495-496.

[4] Margetic S，Gazzola C，Pegg G G.Leptin： a review of its peripheral actions and interactions[J].Jnt J Obes Rbes Relat Metab Disord，2002，26（11）：1407-1433.

[5] La Cava A，Alviggi C，Matarese G.Unraveling the multiple roles of leptin in inflammation and autoimmunity[J].J Mol Med，2004，82（1）：4-11.

[6] Bouloumie A，Drexler H C A，Lafontan M，et al.Kptin， the pmduct 0f ob gene， pmmotes angiogenesis[J].Cire Res，1998，83（12）：1059-1066.

[7] Cao R， Brakenhielm E，Estedt C.Leptin induces vascular permeability and xynergistically stimulates angiogenesis with FGF-2 and VEGF[J].Proc Natl Acad Sci USA，2001，98（11）：6390-6395.

[8] Artwohl M，Roden M，Holzenbeln T.Modulation by leptin of proliferationapoptosis in vascular endothelial cell[J].Int J Obes Relat Metab Disord，2002，26（4）：577-580.

[9]張飛月.腎上腺髓質(zhì)素與婦科惡性腫瘤[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2008，19（7）：44-45.

[10] Kubo A，Minamino N，Isumi Y，et al.Production of adrenomedullin in microphage cell line and peritoneal macrophage[J].J Bild Chem，1998，273（27）：16730-16738.

Objective:To understand the expression and significance of Leptin and ADM in human uterine smooth muscle（USMTs）.Method：Immunohistochemical technique was used to detect the expression of Leptin and ADM protein in 30 usual leiomyoma（UL）， 30 cellular leiomyoma （CL） and 10 leiomyosarcoma （LMS）. Result： The positive Leptin protein expression rate of LMS group was apparently higher than the CL group and UL group（P<0.05）， the positive Leptin protein expressin rate of the CL group was apparently higher than the UL group （P<0.05）. The positive ADM protein expression rate of LMS was apparently higher than the CL group and UL group （P<0.05）， the positive ADM protein expression rate of CL was apparently higher than the UL group （P<0.05）. Conclusion： The expression of Leptin or ADM protein may play an important role in the occurrence and development of human uterine smooth muscie tumors.

Human uterine smooth muscle tumors； Leptin； ADM

Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.10.012

①山西醫(yī)科大學(xué) 山西 太原 030001

②山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院

李美蓉

2014-01-26） （本文編輯：蔡元元）