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（中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島266032）

無高致病性禽流感生物安全隔離區(qū)監(jiān)測指南

劉俊輝，張衍海，范欽磊，鄭增忍，蔣正軍

（中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島266032）

本文根據(jù)OIE《動物衛(wèi)生法典》關于禽流感監(jiān)測總則的有關內容，參考泰國生物安全隔離區(qū)建設經驗，提出了無高致病性禽流感生物安全隔離區(qū)監(jiān)測的主要方法和要求，以期對我國生物安全隔離區(qū)建設企業(yè)提供參考。

生物安全隔離區(qū)；監(jiān)測；方法

生物安全隔離區(qū)在重大動物疫病防控和促進動物及動物產品國內外貿易中發(fā)揮重要作用，已被越來越多的國家認可[1-2]。隨著生物安全隔離區(qū)建設理念的普及和農業(yè)部的推動，吉林、山東、河南和福建等多個省份獸醫(yī)行政主管部門，采取了多種推進措施，在生物安全隔離區(qū)建設方面開展了一些積極的探索。同時，國內很多基礎條件好、管理水平高，對生物安全隔離區(qū)的認識比較到位的企業(yè)，積極開展生物安全隔離區(qū)建設，取得了重大進展[3]。

“證明無疫靠監(jiān)測”，開展有效監(jiān)測是獲得無疫生物安全隔離區(qū)國家評估的重要基礎。本文在總結一些地方成功經驗的基礎上，就如何對高致病性禽流感生物安全隔離區(qū)開展監(jiān)測，為開展生物安全隔離區(qū)建設的養(yǎng)禽企業(yè)提供借鑒和參考。

1 監(jiān)測的基本要求

1.1 進行生物安全隔離區(qū)建設的企業(yè)應與當?shù)孬F醫(yī)機構共同建立生物安全隔離區(qū)監(jiān)測體系，制定監(jiān)測計劃和監(jiān)測方案，共同承擔禽流感監(jiān)測工作。

1.2 生物安全隔離區(qū)和緩沖區(qū)的禽流感監(jiān)測應綜合運用臨床監(jiān)測、血清學監(jiān)測和病原學監(jiān)測方法。

1.3 樣品采集、保存和運輸應按照國家相關標準的規(guī)定進行。

1.4 承擔禽流感監(jiān)測、診斷的實驗室可以是企業(yè)自控的實驗室，也可以是指定的第三方實驗室，但該實驗室必須要由官方指定，并按照ISO/ IEC17025要求運行，而且該實驗室要建立向獸醫(yī)機構快速報告檢測結果的程序。

1.5 樣品檢測方法應是國家發(fā)布的標準檢測方法；沒有標準檢測方法時，可采用OIE規(guī)定的國際標準或診斷試劑提供的方法進行檢測，但需到國家有關部門進行備案、獲得認可。

1.6 開展生物安全隔離區(qū)建設的企業(yè)和所在地獸醫(yī)機構應分別建立抽樣、檢測、報告和檢測結果分析等記錄。

1.7 禽類出欄實行檢疫申報制度。養(yǎng)禽場應在商品禽出欄前3天向獸醫(yī)機構報檢，由官方獸醫(yī)到養(yǎng)禽場采取適宜樣品，送官方指定的實驗室進行禽流感檢測，結合臨床健康狀況出具檢疫合格證明。

2 監(jiān)測方案的制定

生物安全隔離區(qū)建設企業(yè)應制定完善的高致病性禽流感監(jiān)測方案，監(jiān)測方案應明確監(jiān)測類型、監(jiān)測對象和范圍、監(jiān)測方法、抽樣原則及數(shù)量等，抽樣數(shù)量應根據(jù)設計流行率和置信水平進行確定。

2.1 監(jiān)測類型

生物安全隔離區(qū)禽流感監(jiān)測主要包括兩種類型：一是評估養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實施的最初的強化監(jiān)測，二是維持養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實施的持續(xù)的日常監(jiān)測。

2.2 監(jiān)測對象和范圍

生物安全隔離區(qū)包括種禽、商品禽在內的所有養(yǎng)殖單元均應納入監(jiān)測范圍。生物安全隔離區(qū)設有緩沖區(qū)的，還應對緩沖區(qū)內的易感禽只進行禽流感監(jiān)測。

2.3 監(jiān)測方法

監(jiān)測方法包括臨床監(jiān)測、血清學監(jiān)測和病原學監(jiān)測。

2.3.1 臨床監(jiān)測

發(fā)現(xiàn)禽類急性死亡，并且出現(xiàn)腳鱗皮下出血，或雞冠出血或發(fā)紺、頭部水腫，或肌肉和其他組織器官廣泛性嚴重出血就可以懷疑為禽流感。任何人發(fā)現(xiàn)可疑病例，須遵照《動物防疫法》要求向當?shù)孬F醫(yī)行政主管部門、動物衛(wèi)生監(jiān)督機構或動物疫病預防控制機構報告。

2.3.2 血清學監(jiān)測

用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（間接ELISA）或血凝抑制試驗（HI）檢測血清抗體。如果出現(xiàn)間接ELISA陽性，或H5或H7的HI效價達到1∶16以上，須進行現(xiàn)場調查并采樣進行病原學檢測。如生物安全隔離區(qū)實施禽流感免疫，則不宜采用血清學監(jiān)測。

2.3.3 病原學監(jiān)測

用SPF雞胚分離病原或用RT—PCR檢測禽流感病原。如果發(fā)現(xiàn)病原，應將樣品送指定實驗室進一步檢驗。

2.4 抽樣原則及數(shù)量

采用隨機抽樣的原則，簡單隨機抽樣可采用抽簽法或隨機數(shù)表法。血清學監(jiān)測采集禽血清，病原學監(jiān)測每只禽需同時采集咽喉棉拭子和泄殖腔棉拭子。

確定抽樣數(shù)量應綜合考慮監(jiān)測目的、預期患病率（設計流行率）、置信水平和檢測方法敏感性等因素。

3 監(jiān)測要求

3.1 生物安全隔離區(qū)禽流感監(jiān)測

根據(jù)泰國生物安全隔離區(qū)建設經驗[4]，生物安全隔離區(qū)禽流感監(jiān)測分為兩個階段：一確認養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實施的最初的強化監(jiān)測，二維持養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實施的持續(xù)日常監(jiān)測。

3.1.1 評估養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實施的強化監(jiān)測

在過去至少12個月內對生物安全隔離區(qū)的每個養(yǎng)禽場實施臨床監(jiān)測和實驗室監(jiān)測相結合的強化監(jiān)測。

3.1.1.1 臨床監(jiān)測

養(yǎng)禽場管理人員每天應進行日常臨床監(jiān)視。當觀察到任何疑似禽流感臨床癥狀的禽只時，養(yǎng)禽場管理者應按規(guī)定向當?shù)孬F醫(yī)機構進行報告。

當?shù)孬F醫(yī)機構在接到禽流感疑似疫情報告后，應立即開展流行病學調查，并采集5～10只病死禽的適宜樣品送實驗室進行檢測。

3.1.1.2 實驗室監(jiān)測

在每批禽只出欄前3～5天，由地方獸醫(yī)機構在每個養(yǎng)禽場的每個禽舍隨機抽取15個泄殖腔棉拭子樣品和15個血清樣品，送指定實驗室進行禽流感檢測。

這種監(jiān)測可以在等于或高于20%患病率，以及在95%置信水平上檢測到禽流感感染。只有所有臨床監(jiān)測和實驗室主動監(jiān)測結果均為禽流感陰性時，才可認可該生物安全隔離區(qū)為無禽流感生物安全隔離區(qū)。

3.1.2 維持養(yǎng)禽場無禽流感狀態(tài)所實施的日常監(jiān)測

當一個生物安全隔離區(qū)被認可為無禽流感狀態(tài)后，地方獸醫(yī)機構和企業(yè)應對養(yǎng)禽場進行持續(xù)的日常監(jiān)測，以確信該生物安全隔離區(qū)保持無禽流感狀態(tài)。日常監(jiān)測包括：

3.1.2.1 臨床監(jiān)測

臨床監(jiān)測內容同3.1.1。

3.1.2.2 實驗室監(jiān)測

在禽只出欄前3～5天，由地方獸醫(yī)機構在每個養(yǎng)禽場隨機抽取5個禽舍，每個禽舍隨機抽取20個泄殖腔棉拭子樣品和20個血清樣品，送指定實驗室進行禽流感檢測。每出欄兩批禽只進行一次實驗室監(jiān)測。

只有臨床監(jiān)測和實驗室主動監(jiān)測結果均為禽流感陰性時，才可認為該生物安全隔離區(qū)保持無禽流感狀態(tài)。

3.2 緩沖區(qū)禽流感監(jiān)測

地方獸醫(yī)機構應與養(yǎng)禽場管理者共同對緩沖區(qū)內的家禽及易感動物進行禽流感監(jiān)測。

3.2.1 臨床監(jiān)測

臨床監(jiān)測內容同3.1.1。

3.2.2 實驗室監(jiān)測

當一個生物安全隔離區(qū)被認可為無禽流感狀態(tài)時，地方獸醫(yī)機構應每季度在緩沖區(qū)內隨機抽取5個鄰近的農戶/小規(guī)模飼養(yǎng)場，每個農戶/小規(guī)模飼養(yǎng)場隨機抽取20只禽的泄殖腔棉拭子樣品和血清樣品（不足20只的全部抽?。?，送指定實驗室進行禽流感檢測。

3.3 監(jiān)測結果的處理

出現(xiàn)疑似禽流感病例，或經實驗室確認為禽流感病例時，應立即按《高致病性禽流感疫情處置技術規(guī)范》的規(guī)定，實施禽流感疫情處置。

4 說明

“證明無疫靠監(jiān)測”。疫病監(jiān)測是及時發(fā)現(xiàn)疫病風險，維持生物安全隔離區(qū)無疫狀況的重要手段。生物安全隔離區(qū)及緩沖區(qū)監(jiān)測工作是生物安全隔離區(qū)建設管理的一項重要內容。開展疫病監(jiān)測，需要根據(jù)當?shù)匾?guī)定動物疫病的流行病學特點和生物安全隔離區(qū)及周邊地區(qū)的風險因素，制定監(jiān)測方案，明確監(jiān)測范圍、監(jiān)測方法、監(jiān)測頻率、抽樣原則、樣本數(shù)量、檢測方法等。本文討論的生物安全隔離區(qū)無高致病性禽流感監(jiān)測方法，是根據(jù)OIE《動物衛(wèi)生法典》關于禽流感監(jiān)測總則的有關要求提出的，該方法也征求了OIE有關專家的意見，但不作為國家評估的正式評估依據(jù)，僅對生物安全隔離區(qū)建設企業(yè)提供參考。

生物安全隔離區(qū)建設需要地方獸醫(yī)部門和企業(yè)共同進行，但是如何開展生物安全隔離區(qū)及緩沖區(qū)的監(jiān)測工作，尤其是如何確定監(jiān)測的實施主體，目前還存在一定變數(shù)。有專家認為生物安全隔離區(qū)及緩沖區(qū)的監(jiān)測工作應納入到國家監(jiān)測計劃中，由政府統(tǒng)一組織對生物安全隔離區(qū)的監(jiān)測工作，企業(yè)配合政府承擔部分抽樣工作。這樣的好處是：一方面可以獲得較為可靠的監(jiān)測數(shù)據(jù)，便于準確把握生物安全隔離區(qū)內的動物疫病狀況；另一方面是獲取的監(jiān)測數(shù)據(jù)屬于官方數(shù)據(jù)，更容易獲得外界認可，具有較強的說服力。另外一種觀點認為，企業(yè)是生物安全隔離區(qū)建設的主體，也是最直接的受益者，所以企業(yè)應作為監(jiān)測工作的實施主體。但是，不管如何，企業(yè)和獸醫(yī)機構在生物安全隔離區(qū)建設管理中都發(fā)揮著重要作用，二者應相互配合，充分發(fā)揮各自優(yōu)勢，共同做好生物安全隔離區(qū)監(jiān)測工作。

[1] 劉俊輝，張衍海，范欽磊，等.國內外生物安全隔離區(qū)建設概況[J].動物醫(yī)學進展，2012，33（12）：178-182.

[2] 陳國勝. 關于生物安全隔離區(qū)建設試點的幾點思考[J]. 中國動物檢疫，2009，26（7）：1-3.

[3] 劉俊輝，張衍海，鄭增忍，等.我國生物安全隔離區(qū)建設調查研究[J]. 中國動物檢疫，2013，30（8）：14-18.

[4] 陳萍，黃保續(xù). 家禽生產中的風險減輕方法——生物安全隔離區(qū)[J]. 中國動物檢疫，2011，28（8）：4-9.

S851.33文獻識別碼：B

：1005-944X（2014）04-0056-03