賈美群 陳曾燕 施玲燕 趙 斌 吳 霞 吳銀芳

IGF1信號通路IGF1IGF1R及AKT在卵巢癌順鉑耐藥中表達的研究*

賈美群①陳曾燕①施玲燕②趙 斌③吳 霞①吳銀芳②

目的：檢測IGF信號通路關(guān)鍵蛋白IGF1、IGF1R及AKT在卵巢癌患者血清及組織中的表達。方法：ATP-TCA法對卵巢癌標(biāo)本進行藥敏試驗，ELISA法檢測順鉑耐藥和敏感組患者血清中IGF1、IGF1R及P-AKT的表達，免疫組織化學(xué)檢測卵巢癌組織中IGF1、IGF1R、Akt的表達。自患者完成化療出院后每個月復(fù)查CA125，如CA125有異常則行影像學(xué)檢查，隨訪時間1年。結(jié)果：IGF1、IGF1R及AKT在卵巢癌順鉑耐藥組的表達顯著高于敏感組（P=0.000 1），免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示順鉑耐藥組和敏感組IGF1、IGF1R及AKT的表達相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。隨訪順鉑敏感組24例中有18例患者超過1年CA125處于正常值；6例患者超過半年CA125處于正常值；耐藥組中有16例患者化療結(jié)束后半年內(nèi)CA125上升高于正常值，彩超或MRI檢查提示有復(fù)發(fā)病灶。結(jié)論：IGF信號通路關(guān)鍵蛋白可能參與卵巢癌順鉑耐藥，IGF1可能作為卵巢癌靶向治療的新靶點。

卵巢腫瘤 胰島素生長因子1 胰島素生長因子1受體 蛋白激酶B 多藥耐藥蛋白 順鉑耐藥

胰島素生長因子1（insulin-like growth factor 1，IGF1）及其受體（IGF1 receptor）促進細(xì)胞增殖并抑制凋亡，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用是當(dāng)前研究的熱點。IGF1的生物學(xué)功能由其表面的特異性靶細(xì)胞受體（IGF1R）介導(dǎo)，IGF1R在包括卵巢在內(nèi)的很多組織中對細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生起重要作用，它能激活MAPK和PI3K/AKT信號通路。AKT即蛋白激酶B，對細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期起調(diào)控作用。最近發(fā)現(xiàn)，IGF1信號通路在卵巢癌耐藥過程中可能起重要作用，其中的關(guān)鍵蛋白有望成為治療卵巢癌的有效靶點［1］。盡管越來越多的證據(jù)表明IGF1/IGF1R/AKT在諸多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，但其在腫瘤患者血液及組織中的表達尚不清楚，其關(guān)鍵蛋白在耐藥的卵巢患者血中的表達情況及與多藥耐藥蛋白表達的相關(guān)性鮮見報道。本研究采用ELISA方法及檢測對順鉑耐藥及敏感患者血清中IGF1、IGF1R、AKT以及MRP2的表達，并進行相關(guān)性分析，免疫組織化學(xué)方法檢測對順鉑耐藥及敏感患者血清中IGF1、IGF1R、AKT的表達，探究IGF信號通路是否參與順鉑耐藥，旨在為卵巢癌治療找出新的治療靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 臨床資料 南通市腫瘤醫(yī)院2009年1月至2010年1月收治的40例卵巢上皮性惡性腫瘤（包括漿液性腫瘤、黏液性腫瘤、子宮內(nèi)膜樣腫瘤）患者，年齡35～68歲，平均年齡52歲，中位年齡48歲。所有患者均經(jīng)手術(shù)后病理證實且術(shù)前未經(jīng)過化療、放療、內(nèi)分泌及生物治療。所有研究對象近半年內(nèi)未服用過免疫調(diào)節(jié)劑和激素類藥物。手術(shù)病理分期按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO2009年）標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ～Ⅱ期3例，Ⅲ～Ⅳ期37例?；颊呷朐汉缶邮苣[瘤細(xì)胞減滅手術(shù)+鉑類為主的化療。手術(shù)當(dāng)日留取新鮮標(biāo)本供順鉑耐藥試驗使用。全部患者術(shù)后6個正規(guī)療程化療結(jié)束后1個月內(nèi)留取血清標(biāo)本，4 000 r/min離心5～10 min，取上層血清，-80℃低溫冰箱凍存，供檢測用。

1.1.2 主要試劑和儀器 ATP-TCA試劑盒，包括完全培養(yǎng)液（CAM），腫瘤組織消化酶（TDE），ATP抽提劑（TCE），熒光素-熒光素酶（LU-LU），稀釋緩沖液（DB），ATP標(biāo)準(zhǔn)液均購自湖州海創(chuàng)生物科技有限公司。OrionⅡ發(fā)光分析儀，Airtech生物安全柜購于德國Berthold公司。311型CO2培育箱購自美國Thernic公司。Olympus CKX-41倒置顯微鏡購自日本。離心機、單道/多道可調(diào)式移液器，96孔無菌微孔培養(yǎng)板購自德國Eppendorf公司。各種化療藥物的100%血漿峰值濃度（peak plasma concentration，PPC）及生產(chǎn)公司如下：江蘇恒瑞藥業(yè)產(chǎn)阿霉素（Doxorubicin，ADM），100%PPC為3 μg/mL；山東齊魯制藥產(chǎn)順鉑（cisplatin，DDP），100%PPC為6.3 μg/mL；山東齊魯制藥產(chǎn)卡鉑（Carboplatin，CBP），100%PPC為25 μg/mL。

人胰島素樣生長因子1（IGF-1），人胰島素樣生長因子1受體（IGF-1R），人磷酸化的Akt蛋白（P-Akt）和人多藥耐藥相關(guān)蛋白2（MRP2）檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法，試劑購自GBD公司。酶標(biāo)儀和洗板機均購自美國伯樂公司，型號分別為Bio-RAD1575和Bio-RAD680，操作步驟嚴(yán)格按說明書進行操作。

人胰島素樣生長因子1（IGF-1）免疫組化試劑盒一抗購自北京中杉金橋生物有限公司。人胰島素樣生長因子1受體（IGF-1R）免疫組化試劑盒一抗，型號為T2634，人磷酸化的Akt蛋白（P-Akt）購自EPITMICS公司。型號為2118-1，二抗購自北京中杉金橋生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 ATP-TCA法操作步驟 主要步驟如下：術(shù)后0.5 h內(nèi)無條件下切取新鮮的實體瘤標(biāo)本（0.5～2.0 mm2）并剪碎洗，經(jīng)酶解液酶解，檢測培養(yǎng)基孵育2～6 h，離心成胞懸液，制備腫瘤細(xì)胞懸液。根據(jù)待測藥物的臨床使用劑量及其所對應(yīng)的血漿峰值濃度（peak plasma concentration，PPC），設(shè)定6個檢測濃度，即200%、100%、50%、25%、12.5%、6.25%的PPC。每個濃度作3個平行孔。同時設(shè)定MO：無藥對照孔，MI：最大抑制孔。腫瘤細(xì)胞懸液加入含化療藥的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)1周左右，加入ATP提取液抽提腫瘤細(xì)胞的ATP，混勻后再加入熒光素-熒光素酶試劑OrionⅡ發(fā)光分析儀上檢測其熒光值。

1.2.2 腫瘤生長抑百分率的計算 TGI=1.0-（Test-MI）/（MO-MI）×100%（Test：被測藥物孔的平均熒光值；MI：最大ATP生成抑制對照孔的平均熒光值；MO：無藥物對照孔的平均熒光值）。利用系統(tǒng)軟件描繪藥物劑量-抑制曲線，并據(jù)曲線得出IC50（抑制50%腫瘤生長的藥物濃度）、IC90（抑制90%腫瘤生長的藥物濃度）、抑制率曲線下面積（AUC），和抑制參數(shù)Index［Index＝600-Σ（TGI6.25+…+TGI200）］。藥物敏感度分級定義：強敏感：AUC≥12 500或Index＜300；IC90≤90%PPC；IC50≤25%PPC。部分敏感：AUC≥12 500或Index＜300；IC90＞90%PPC；IC50≤25%TDC。弱敏感：AUC≥12 500或Index＜300。耐藥：AUC＜12 500或Index≥300。

1.2.3 ELISA法操作步驟 IGF1、IGF1R、Akt和MRP2實驗步驟類似，操作過程如下：加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品，加入反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50 μL的生物素標(biāo)記的抗體。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。每孔加入100 μL的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30 min。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。每孔加入底物50 μL，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5 min。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50 μL終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.2.4 免疫組織化學(xué)法操作步驟 上述40例手術(shù)標(biāo)本10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片HE染色，由病理科醫(yī)師診斷核實。二步法檢測IGF1；SP法檢測AKT；PV9000法檢測IGF1R，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進行。結(jié)果判定表達結(jié)果以細(xì)胞染成黃色、黃褐色及棕褐色為陽性，計算陽性細(xì)胞數(shù)所占總細(xì)胞的百分比，取5個視野的算出平均值。1）根據(jù)顯色細(xì)胞的比例計分：0分（顯色細(xì)胞為0%）；1分（顯色細(xì)胞＜10%）；2分（顯色細(xì)胞10%～50%）；3分（顯色細(xì)胞51%～80%）；4分（顯色細(xì)胞＞80%）。2）根據(jù)細(xì)胞染色強度計分：0分（細(xì)胞無顯色）；1分（淺黃色）；2分（棕黃色）；3分（黃褐色）。積分=染色強度×陽性細(xì)胞數(shù)，積分范圍0～12分，≥4分定義為陽性表達。

1.2.5 臨床隨訪 自患者完成化療出院后囑每月復(fù)查CA125，如CA125有異常則復(fù)查彩超或者CT或者MRI，隨訪時間為1年，至本院檢驗科了解患者CA125變化情況，如有異常則至影像科了解是否進行CT或者MRI檢查，電話形式隨訪了解患者自訴癥狀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本資料采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，用t檢驗分析相關(guān)數(shù)據(jù)，采用±s表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ATP-TCA法對40例卵巢癌患者手術(shù)標(biāo)本進行順鉑藥敏檢測

40例卵巢癌藥敏結(jié)果發(fā)現(xiàn)16例出現(xiàn)順鉑耐藥，24例無耐藥（圖1）。

2.2 耐藥組和敏感組患者血清中IGF1表達比較

16例順鉑耐藥組患者血清中IGF1表達值為35.869 4±4.559 7，24例順鉑敏感組患者血清中IGF1表達值為20.717 5±3.745 9，耐藥組明顯高于敏感組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000 1）。

2.3 耐藥組和敏感組患者血清中IGF1R表達比較

16例順鉑耐藥組患者血清中IGF1R表達值為182.613±19.392 1，24例順鉑敏感組患者血清中IGF1R表達值為127.671 5±22.989 9，耐藥組明顯高于敏感組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000 1）。

2.4 耐藥組和敏感組患者血清中AKT表達比較

16例順鉑耐藥組患者血清中AKT表達值為48.605 0±6.662 9，24例順鉑敏感組患者血清中AKT表達值為29.738 0±6.807 9，耐藥組明顯高于敏感組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000 1）。

2.5 耐藥組和敏感組患者血清中MRP2表達比較

16例順鉑耐藥組患者血清中MRP2表達值為35.869 4±4.559 7，24例順鉑敏感組患者血清中MRP2表達值為20.7175±3.7459，耐藥組明顯高于敏感組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000 1）。

2.6 IGF1、IGF1R、AKT和MRP2兩兩相關(guān)性分析

IGF1與IGF1R相關(guān)（P=0.000 1，r=0.755），IGF1與AKT相關(guān)（P=0.000 1，r=0.812），IGF1R與AKT相關(guān)（P=0.000 1，r=0.643），IGF1與MRP2相關(guān)（P=0.018，r=0.493），IGF1R與MRP2無相關(guān)性（P=0.173，r=0.231），AKT和MRP2無相關(guān)性（P=0.106，r=0.274）。

2.7 免疫組織化學(xué)結(jié)果

IGF1表達于細(xì)胞漿，耐藥組呈強陽性表達，敏感組呈弱陽性或者陰性表達，順鉑耐藥組和敏感組IGF1的表達相比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖2A、B）；IGF1R表達于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，耐藥組呈強陽性表達，敏感組呈弱陽性表達，兩者相比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖2C、D）；AKT表達于細(xì)胞漿，耐藥組呈強陽性表達，敏感組呈弱陽性表達，兩者相比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖2E、F）。

2.8 臨床隨訪結(jié)果

隨訪40例患者化療結(jié)束（化療方案為紫杉醇+鉑類）后每月復(fù)查CA125情況，順鉑敏感組24例中有18例患者超過一年CA125一直處于正常值范圍；6例患者超過半年CA125處于正常值范圍；耐藥組中有16例患者化療結(jié)束后半年內(nèi)CA125上升高于正常值，彩超或者MRI檢查提示有復(fù)發(fā)病灶。

3 討論

IGF1信號通路主要發(fā)揮促進細(xì)胞增殖和抗凋亡作用。目前研究證明，IGF1信號通路在子宮內(nèi)膜癌［2］、肺癌［3-4］、乳腺癌和結(jié)直腸癌等眾多惡性腫瘤的發(fā)展中起關(guān)鍵作用。在卵巢癌方面的研究開展較少，高華等［5］研究胰島素生長因子1及其受體在卵巢癌細(xì)胞增殖中的作用，提示IGF1信號通路參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。而在卵巢癌化療耐藥方面的研究甚少，研究IGF1信號通路關(guān)鍵蛋白與多藥耐藥蛋白之間的相關(guān)性鮮見報道。本研究利用ATP-TCA法對卵巢癌手術(shù)標(biāo)本進行藥敏檢測，ATP-TCA技術(shù)是目前較為理想、且惟一被藥品監(jiān)督管理部門許可使用的體外藥敏檢測方法［6］。Neubauer等［7］研究61例原發(fā)卵巢上皮癌ATP-TCA結(jié)果和臨床化療敏感性的相關(guān)性，該方法的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為90.0%、43.0%、62.0%和81.0%。本研究同時測定卵巢癌化療方案中常用藥物順鉑、阿霉素、卡鉑進行藥物敏感性測定。免疫組化檢測手術(shù)標(biāo)本組織中IGF1、IGF1R及AKT水平，因為患者術(shù)后化療后標(biāo)本獲取困難，所以采取患者術(shù)后化療后血清進行實驗。檢測耐藥組和敏感組術(shù)后正規(guī)6個療程化療結(jié)束后血清中IGF1、IGF1R及AKT水平，分析其與多藥耐藥蛋白MRP2的相關(guān)性，旨在探討IGF1信號通路是否參與耐藥，為耐藥卵巢癌的治療尋找新的靶點。

卵巢癌預(yù)后差，其根本原因在于其化療后易產(chǎn)生耐藥，卵巢癌鉑類耐藥機制非常復(fù)雜，各個環(huán)節(jié)異常均有可能產(chǎn)生耐藥，耐藥的卵巢癌細(xì)胞表現(xiàn)均為細(xì)胞凋亡的明顯減少［8］。本研究顯示，ATP-TCA法檢出原發(fā)性順鉑耐藥和敏感患者，臨床隨訪研究結(jié)果證明與實驗研究結(jié)果相似，但是由于樣本量小，以及隨訪時間較短，如能得出3年或者5年生存率更有說服力。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示耐藥組中IGF1、IGF1R及AKT均為強陽性表達，與敏感組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。ELISA法顯示順鉑耐藥組患者正規(guī)6個療程化療結(jié)束后血清中IGF1表達耐藥組和敏感組相比，IGF1表達水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；IGF1R表達耐藥組和敏感組相比，IGF1R表達水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；AKT表達耐藥組和敏感組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與張曄等［9］研究AKT和p-AKT蛋白高表達與p-gp介導(dǎo)的胃癌MDR有關(guān)相似。Tas等［10］測定了上皮性卵巢癌患者血清中IGF1及IGFBP-3的表達情況，非耐藥患者的表達，與本研究結(jié)果不同。Eckstein等［11］使用順鉑作用于卵巢癌A2780及BG-1細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，耐藥性的出現(xiàn)與IGF-1R及其下游PI3K/AKT的活化有關(guān)，純化的IGF-1可以激活I(lǐng)GF-IR，使多個卵巢癌細(xì)胞系出現(xiàn)對順鉑耐藥大致相符。推測鉑類藥物的耐藥與IGF1信號通路異?；罨嘘P(guān)，順鉑原發(fā)耐藥的患者在整個化療過程中IGF1信號通路一直處于開放狀態(tài)，影響化療療效。但是，對于順鉑敏感的患者在化療過程中IGF1信號通路是否參與作用導(dǎo)致繼發(fā)性耐藥有待進一步研究。

多藥耐藥相關(guān)蛋白家族導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的化療藥物濃度降低，使腫瘤細(xì)胞對多種抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥［12］。MRPs是一類跨膜轉(zhuǎn)運蛋白，廣泛分布于正常組織中，但表達水平低，而在腫瘤組織中呈高水平表達。MRP2是MRPS家族一員，MRP2耐藥譜特征對順鉑耐藥［13］。ELISA法顯示順鉑耐藥組患者正規(guī)6個療程化療結(jié)束后血清中MRP2表達耐藥組和敏感組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。陳亮等［14］研究提示MRP2與上皮性卵巢癌的耐藥顯著相關(guān)，對初治上皮性卵巢癌患者鉑類為基礎(chǔ)的化療療效的預(yù)測具有一定價值。且IGF1與MRP2有明顯的相關(guān)性［15］，再次證實IGF1與順鉑耐藥有關(guān)，從患者血清中IGF1與IGF1R，IGF1與AKT有顯著相關(guān)性來推斷，IGF-I與IGF-IR結(jié)合并激活I(lǐng)GF-IR，導(dǎo)致自身磷酸化，激活下游的AKT信號通路，最后作用于與耐藥相關(guān)的蛋白及因子。理論而言，IGF1R與MRP2有相關(guān)性，AKT和MRP2有相關(guān)性，但是本研究顯示IGF1R與MRP2無相關(guān)性，AKT和MRP2無相關(guān)性，分析可能的原因為選取的標(biāo)本例數(shù)不足，有待擴大樣本量進一步深入研究；IGF信號通路錯綜復(fù)雜，可能另一條或者幾條通路異?；罨粚嶒炚`差；化療藥物的影響。

綜上所述，IGF1信號通路關(guān)鍵分子IGF1、IGF1R和AKT在卵巢癌順鉑耐藥患者中過表達并與耐藥相關(guān)蛋白相關(guān)聯(lián)，提示這些分子可能參與順鉑耐藥，有關(guān)耐藥分子機制有待進一步深入研究。

1 Li R,Pourpak A,Morris SW,et al.Inhibition of the insulin-like growth factor-1 receptor(IGF1R)Tyosine kinase as a novel cancer therapy approach[J].J Med Chem,2009,52(16)：4981-5004.

2 Zhang G,Li XP,Wang JL,et al.Preliminary investigation of the expression and functions of insulin receptor isoforms in endometrial carcinoma[J].Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi,2012,47(11)：839-845.

3 Liao YD,Zhou S,Zhao JP,et al.Expression and significance of IGF1,IGF1R and AKT,the components of IGF signaling pathway, in primary adenocarcinoma of the lung[J].J Prac Onco,2006,21(1)：15-19.[廖永德,周 晟,趙金平,等.IGF信號通路關(guān)鍵蛋白IGF1、IGF1R和AKT在原發(fā)性肺癌中的表達及意義[J].實用腫瘤雜志, 2006,21(1)：15-19.]

4 Sun Y,Zheng S,Torossian A,et al.Role of insulin-like growth factor-1 signaling pathway in cisplatin-resistant lung cancer cells[J]. Int J Radiat Oncol Biol Phys,2012,82(3)：563-572.

5 Gao H,Shi J,Ge SF,et al.Effects of insulin-1ike growth factor 1 and its receptor on proliferation of ovarian cancer cells[J].J Shanghai Jiaotong University(Medi Sci),2008,28(3)：270-272.[高 華,施 君,葛盛芳,等.胰島素生長因子1及其受體在卵巢癌細(xì)胞增殖中的作用[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2008,28(3)：270-272.]

6 Zhang W.The clinical application of bioluminescence ex vivo tumor chemosensitivityassay techniques[J].Chin J Lab Medi,2005,28 (12)∶1316-1319.[張 偉.生物熒光腫瘤體外藥敏檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(12)∶1316-1319.]

7 Neubauer H,Stefanova M,Solomayer E,et al.Predicting resistance to platinum-containing chemotherapy with the ATP tumor chemosensitivity assay in primary ovarian cancer[J].Anti Res,2008,28 (2A)∶949-955.

8 Bhutani J,Sheikh A,Niazi AK.Akt inhibitors：mechanism of action and implications for anticancer therapeutics[J].Infect Agent Cancer. 2013,8(1)：49.

9 Zhang Y,Qu XJ,Liu YP,et al.Correlations between the expressions of Akt,p-Akt and P-gp,Gst-pi in gastric cancer[J].Chin J Can Pre Tre,2009,16(8)：565-567.[張 曄,曲秀娟,劉云鵬,等.胃癌組織Akt和p-Akt蛋白及耐藥相關(guān)蛋白表達臨床意義的研究[J].中華腫瘤防治雜志,2009,16(8)：565-567.]

10 Tas F,Karabulut S,Serilmez M,et al.Clinical significance of serum insulin-like growth factor-1(IGF-1)and insulinlike growth factor binding protein-3(IGFBP-3)in patients with epithelialovarian cancer[J].Tumour Biol,2013,20.[Epub ahead of print].

11 Eckstein N,Servan K,Hildebrandt B,et al.Hyperactivation of the insulin-like growth factor receptor I signaling pathway is an essential event for cisplatin resistance of ovarian cancer cells[J].Can Res, 2009,69(7)：2996-3003.

12 Sedláková I,Laco J,To?ner J,et al.Drug resistance proteins LRP, Pgp,MRP1,MRP3 and MRP5 in ovarian cancer patients[J].Ceska Gynekol,2013,78(6)：545-553.

13 Ke SZ,Ni XY,Zhang YH,et al.Camptothecin and cisplatin upregulate ABCG2 and MRP2 expression by activating the ATM/NF-κB pathway in lung cancer cells[J].Int J Oncol,2013,42(4)：1289-1296. 14 Chen L,Sheng XG,Li JD,et al.Expressions and clinical significance of EDD and MRP2 in epithelial ovarian cancer tissues[J].Chin J Can Pre Tre,2010,17(11)：847-850.[陳 亮,盛修貴,李俊東,等.上皮性卵巢癌組織EDD和MRP2蛋白表達臨床意義的研究[J].中華腫瘤防治雜志,2010,17(11)：847-850.]

15 Benabbou N,Mirshahi P,Cadillon M,et al.Hospicells promote upregulation of the ATP-binding cassette genes by insulin-like growth factor-I via the JAK2/STAT3 signaling pathway in an ovarian cancer cell line[J].Int J Oncol,2013,43(3)：685-694.

（2013-08-02收稿）

（2013-10-21修回）

（本文編輯：賈樹明）

Key protein expressions in the insulin-like growth factor-1 signal pathway involved in the resistance of ovarian cancer to cisplatin

Meiqun JIA1,Zengyan CHEN1,Lingyan SHI2,Bin ZHAO3,Xia WU1,Yinfang WU2
Correspondence to Meiqun JIA;E-mail:jmq_sk@163.com

1Department of Gynecology,2Scientific Institutes,3Department of Pathology,Nantong Tumor Hospital,Nantong 226361,China.

This study was supported by the Municipal Project of Science and Technology for Social Development of Nantong(Grant No.2010016).

Objective:This study aimed to detect the expression levels of the key proteins involved in the insulin-like growth factor signaling pathway of patients with ovarian cancer.These proteins include insulin-like growth factor-1(IGF1),insulin-like growth factor-1 receptor(IGF1R),and protein kinase B(AKT).Methods:Ovarian cancer tissues were subjected to drug resistance tests using the ATP-TCA method.IGF1,IGF1R,AKT,and multidrug resistance protein2(MRP2)expressions were detected in the sera of patients with ovarian cancer by conducting enzyme-linked immunosorbent assay.IGF1,IGF1R,and AKT protein expressions were detected in the surgical specimens by immunohistochemistry.Patients were instructed to monitor their cancer antigen 125(CA125)levels monthly from the date a patient was discharged to the last day of chemotherapy(or until chemotherapy was completed).A color Doppler ultrasound,CT,or MRI scan was required if CA125 value is abnormal.The total follow-up time was one year.Results:IGF1,IGF1R,and AKT expressions were significantly higher in the cisplatin-resistant group than in the cisplatin-sensitive group(P=0.000 1).Immunohistochemical results showed that IGF1,IGF1R,and AKT expressions were significantly higher in the cisplatin-resistant group than in the cisplatin-sensitive group(P＜0.05).The monthly CA125 values of 40 patients were obtained after chemotherapy.In the cisplatin-sensitive group,18 of the 24 cases exhibited normal CA125 values for more than one year,and the remaining 6 cases maintained normal values for more than half a year.In the cisplatin-resistant group,16 cases revealed higher than normal CA125 values for half a year after chemotherapy.Recurrent lesions were observed in their color Doppler ultrasound results or MRI scans.Conclusion:Cisplatin resistance in ovarian cancer is strongly correlated with the expressions of IGF1,IGF1R andAKT.IGF1 is a potential candidate for the targeted therapy of ovarian cancer.

ovarian neoplasm,insulin-like growth factor-1,insulin-like growth factor-1 receptor,AKT,multi-drug resistance-associated protein,cisplatin resistance

10.3969/j.issn.1000-8179.20131238

賈美群 碩士研究生。研究方向為婦科腫瘤的臨床研究。

①南通市腫瘤醫(yī)院婦瘤科（江蘇省南通市226000）；②南通市腫瘤醫(yī)院科研所

*本文課題受南通市社會發(fā)展科技項目（編號：2010016）資助

賈美群 jmq_sk@163.com

E-mail：jmq_sk@163.com