林滇恬，李曉琳，齊晨越，袁琳，夏麗萍，沈暉，魯靜

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，沈陽(yáng) 110001）

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種慢性炎性疾病，主要侵犯骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織及外周關(guān)節(jié)。臨床主要表現(xiàn)為腰、背、頸、臀、髖部疼痛以及關(guān)節(jié)腫痛，嚴(yán)重者可發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直，影響人們健康和生活質(zhì)量。到目前為止尚沒(méi)有有效的治療方法，特別是以中軸受累為主的AS患者治療效果更不理想。因而，如何針對(duì)AS病因的靶向治療成為國(guó)內(nèi)、外學(xué)者普遍關(guān)注又亟待解決的難題。現(xiàn)已證實(shí)［1］AS的發(fā)病和HLA?B27密切相關(guān)，并有明顯家族聚集傾向。近年來(lái)對(duì)于AS免疫異常方面的發(fā)病機(jī)制研究非?；钴S，有研究［2］發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子參與了疾病的發(fā)生發(fā)展。白細(xì)胞介素27（interleukin?27，IL?27）作為IL?12家族的成員之一，是由EB病毒誘導(dǎo)蛋白3（EBV induced pro?tein 3，EB3）和P28亞基組成的異二聚體細(xì)胞因子［2］，通過(guò)獨(dú)特的IL?27Rα細(xì)胞（WSX ?1/T）和T細(xì)胞細(xì)胞因子受體（T cell cytokine receptor，TCCR）組成的受體復(fù)合物與gp130進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［3］。因此，IL?27與IL?12家族的其他成員的受體在結(jié)構(gòu)上以及參與Th1細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)控中有相似性［4］，但在發(fā)揮調(diào)節(jié)NK細(xì)胞活性、T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生以及抗體類(lèi)別轉(zhuǎn)換等方面的功能相互重疊但又不完全相同。有報(bào)道［5～7］指出，IL?27可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)抑制某些自身免疫性疾病。Gabay等［4］報(bào)道IL?27在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythemato?sus，SLE）患者外周血中水平較低；Shen等［6］報(bào)道IL?27在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）患者發(fā)病過(guò)程中起著重要作用；Xia等［7］報(bào)道IL?27在原發(fā)性干燥綜合征（primary Sjogren’s syndrome，pSS）患者血清中明顯增高。但I(xiàn)L?27在AS發(fā)病中的作用如何至今未見(jiàn)報(bào)道。本項(xiàng)研究通過(guò)檢測(cè)AS患者血清中的IL?27水平，并與疾病活動(dòng)度及炎性指標(biāo)比較，探討其在AS中的臨床意義，為AS的靶向治療藥物的研究提供試驗(yàn)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

選取2010年8月至2012年4月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院及門(mén)診AS患者90例，所有患者均符合修訂的紐約標(biāo)準(zhǔn)（1984年）。其中男72例，女18例，年齡15～67歲，平均（32±10）歲。并同期收集健康對(duì)照者30名，其中男22例，女8例，年齡16～65歲，平均（30±14）歲。入選患者均排除感染、腫瘤及其他風(fēng)濕性疾病，在年齡、性別上與實(shí)驗(yàn)組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＆gt;0.05）。同時(shí)記錄及檢測(cè)AS患者有無(wú)髖關(guān)節(jié)受累、有無(wú)外周關(guān)節(jié)炎及眼受累，紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、C?反應(yīng)蛋白（C reactive protein，CRP）、人體組織相容性抗原 B27（human leucocyte antigen?B27；HLA?B27）、完成Bath強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)指數(shù)（Bath AS disease activity index，BASDAI）調(diào)查表并記錄用藥情況。該研究經(jīng)過(guò)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均已知情同意并簽訂知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 血清IL?27水平測(cè)定：清晨采集AS患者及健康對(duì)照組患者空腹靜脈全血，自然凝固后3 000 r/min離心5 min，分離血清，分裝后于-80℃低溫冰箱保存，應(yīng)用ELISA檢測(cè)血清IL?27水平。IL?27試劑盒購(gòu)自美國(guó)R＆D公司，按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行操作。用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處的吸光度（A）值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本IL?27濃度。

1.2.2 HLA?B27檢測(cè)：采用流式細(xì)胞儀方法檢測(cè)。儀器及試劑HLA?B27檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自BD公司。取EDTA抗凝全血標(biāo)本（50 μL）加10 μLHLA?B27抗體標(biāo)記，均加入12 mm×75 mm試管中，混勻，室溫避光孵育15 min后，直接將試管放入標(biāo)本前處理樣本臺(tái)上，用全血溶解試劑，裂解紅細(xì)胞。設(shè)置陰性對(duì)照：除抗體改為標(biāo)記小鼠外，其余步驟同上。充分洗滌固定后上機(jī)檢測(cè)。

1.2.3 其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)：ESR采用魏氏法，CRP采用免疫比濁法，均由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)中心檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)性分析，以P＆lt;0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AS患者與健康對(duì)照組血清IL?27水平比較

AS患者血清IL?27水平為（603.4±76.2）pg/mL，健康對(duì)照組患者為（63.4±5.9）pg/mL。AS患者血清IL?27水平明顯高于健康對(duì)照組（P＆lt;0.001）。

2.2 AS患者血清IL?27水平與BASDAI、ESR、CRP相關(guān)性分析

在AS患者中髖關(guān)節(jié)受累24例，外周關(guān)節(jié)受累28例，眼部受累12例；HLA?B27陽(yáng)性者有76例。AS患者BASDAI均數(shù)為5.5±0.2，其中77例≥4，13例＆lt;4。AS患者ESR（33.7±2.8）mm/h，CRP（25.6±2.5）mg/L。AS患者血清IL?27水平與疾病活動(dòng)指數(shù)及炎性指標(biāo)相關(guān)分析顯示，AS患者血清IL?27水平與BAS?DAI、ESR及CRP水平均呈明顯正相關(guān)（r分別為0.306、0.299、0.218，P分別為0.003、0.004、0.040）。

3 討論

AS是一種病因未明的慢性自身免疫性疾病，與遺傳因素和環(huán)境因素關(guān)系密切。如早期得不到及時(shí)的診斷及有效治療，極易造成關(guān)節(jié)的功能障礙、關(guān)節(jié)強(qiáng)直，喪失工作和生活自理能力，致殘率高，嚴(yán)重影響患者的身心健康。因此，關(guān)于AS病因、發(fā)病機(jī)制的研究備受關(guān)注。目前研究表明，多種細(xì)胞因子參與了AS的發(fā)病，其中腫瘤壞死因子α（tumor ne?crosis factor?α，TNF?α）、IL?17等多種細(xì)胞因子在AS的發(fā)病過(guò)程中起著重要作用［8，9］。IL?27在AS疾病中的作用如何，目前未見(jiàn)報(bào)道。

IL?27主要是由抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生，是IL?12家族的新成員，在免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中，具有促進(jìn)炎性和抑制炎性的雙重作用［10］，一方面IL?27可以誘導(dǎo)na?ve T 細(xì)胞向Th1方向分化，促進(jìn)其IFN ?γ的產(chǎn)生［11］，通過(guò)激活細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，起到抗病毒和抗腫瘤的效果；另一方面，IL?27也可以抑制Th2型和Thl7型免疫反應(yīng)。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在AS患者血清中IL?27水平明顯增高，但其增高的機(jī)制還不清楚。目前認(rèn)為，Th17細(xì)胞與Th1細(xì)胞在AS的發(fā)病中起著重要作用。有研究報(bào)道，在Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠模型中，IL?17可誘導(dǎo)IL?27的表達(dá)增多［12］。我們推測(cè)在AS發(fā)病過(guò)程中IL?27增高可能通過(guò)以下途徑：（1）在AS發(fā)病過(guò)程中由于Th17增多，IL?17分泌增加，誘導(dǎo)IL?27的產(chǎn)生增多；（2）通過(guò)刺激Th1細(xì)胞的免疫應(yīng)答和IFN?γ與幼稚T細(xì)胞的表達(dá)，上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞TNF?α和IL?1β受體和免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的基因，刺激成纖維樣滑膜細(xì)胞對(duì)趨化因子（如CXCL9、CX?CL10、CX3CL1）的表達(dá)，影響?zhàn)じ椒肿右种苿┑谋磉_(dá)和細(xì)胞趨化因子的釋放，從而導(dǎo)致了免疫炎性反應(yīng)。

目前研究表明，IL?27與多種風(fēng)濕免疫性疾病的發(fā)病有關(guān)，且RA患者血清中IL?27的濃度增高，并與疾病活動(dòng)度相關(guān)［6］。我們的研究結(jié)果顯示在AS患者血清中IL?27水平與炎癥指標(biāo)ESR、CRP及BASDAI呈正相關(guān)，與上述報(bào)道一致，進(jìn)一步說(shuō)明IL?27在AS的發(fā)病中起著一定的作用，也有可能成為評(píng)價(jià)AS疾病活動(dòng)度的一個(gè)新的生物學(xué)標(biāo)志物。

關(guān)于AS的治療，特別是針對(duì)以中軸受累為主的AS患者的治療困擾著廣大風(fēng)濕科醫(yī)生。目前主要采用非甾體抗炎藥及抗風(fēng)濕病慢作用藥，但療效不佳，對(duì)AS的致殘率沒(méi)有明顯的改善。近年來(lái)先后出現(xiàn)針對(duì)TNF?α及IL?6為靶點(diǎn)的生物制劑，使AS的治療和預(yù)后有了明顯的改善，但仍有一部分AS患者療效甚微，甚至無(wú)效。我們的研究結(jié)果顯示IL?27有可能是AS發(fā)病中一個(gè)重要的細(xì)胞因子。因此，IL?27可能成為一個(gè)AS治療的新靶點(diǎn)。

綜上所述，IL?27在AS患者血清中明顯增高，但在AS發(fā)病中的作用如何還不清楚，仍需要進(jìn)一步研究，特別是利用IL?27或干預(yù)IL?27R/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑方面的研究，為其臨床應(yīng)用開(kāi)啟新的篇章。

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