■王虹玲 劉丹丹 姜詩文 王家慶 汪 琢 孫天利

(1.沈陽工學院生命工程學院，遼寧撫順113122；2.沈陽農業(yè)大學食品學院，遼寧沈陽110161)

隨著集約化畜牧業(yè)和工業(yè)化養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴大，防病促生長的化學藥物及抗生素被廣泛應用于飼料添加劑中?？股氐臑E用使細菌耐藥性增強，并且造成畜產品中抗生素殘留增加，直接危害人類健康。微生態(tài)制劑是新型的、無公害的飼料添加劑，具有調整并維持腸道菌群平衡、增強機體免疫力、促進畜禽生長發(fā)育的作用，使用方便且無藥物殘留[1]。目前，單一微生態(tài)制劑在肉雞飼養(yǎng)中應用的報道較多。王全溪等[2]研究表明，在肉雞飼糧中添加100 mg/kg的乳酸菌素可提高肉雞的生長性能和抗氧化功能。Kala?vathy等[3]用由12種乳酸桿菌的混合制劑飼喂肉雞，結果顯示，肉雞的日增重和飼料消化率均有所提高，并且乳酸菌制劑有效降低了肉雞腹脂的沉積。關于單一的免疫增強因子的報道也較多，大量的研究表明，黃芪多糖具有調節(jié)免疫，抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗氧化及降低血糖作用[4]。試驗證實，在飼料中添加黃芪多糖可促進肉雞生長、提高免疫器官指數，具有廣闊的研發(fā)前景[5]。但是將多種益生菌組成的復合微生態(tài)制劑與免疫增強因子聯合應用在肉雞養(yǎng)殖中的報道并不多。為此，本文將復合微生態(tài)制劑與黃芪多糖聯合使用飼喂肉雞，旨在探討由酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌和黃芪多糖組成的復合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能、腸道菌群、新城疫抗體效價及免疫器官指數的影響，為其在肉雞養(yǎng)殖中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復合微生態(tài)制劑：酵母菌2×108CFU/g、枯草芽孢桿菌 3×108CFU/g、乳酸菌 1×108CFU/g、黃芪多糖2.5%。其中，酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌購自中國農業(yè)微生物菌種保藏管理中心，黃芪多糖購自北京生泰爾生物科技有限公司。

1.2 試驗設計與飼糧組成

將400只1日齡雌性健康肉雞隨機分為4組，每組4個重復，每個重復25只。試驗預試期5 d，飼喂基礎飼糧，正試期37 d。I組為對照組，飼喂基礎飼糧；II、III、IV組為試驗組，在基礎飼糧中分別添加0.1%、0.2%、0.4%的復合微生態(tài)制劑及2.5%黃芪多糖。

基礎日糧為參照《家禽營養(yǎng)需要》（NRC，1994）中肉雞的營養(yǎng)標準配制的玉米-豆粕型日糧，其日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試雞各組分籠飼養(yǎng)，自由飲水，人工喂養(yǎng)。嚴格控制雞舍內的光照、溫度和濕度，按常規(guī)方法進行飼養(yǎng)管理和消毒工作，并以常規(guī)免疫程序對試雞進行新城疫及法氏囊免疫。詳細記錄試驗期間各組飼料的消耗情況以及試雞的體重、健康狀況。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質基礎）

1.4 測定指標和方法

1.4.1 生產性能

分別于14、21、28、35、42日齡對禁食12 h的試雞稱重，詳細記錄各階段的飼料消耗量，計算出肉雞的平均日增重、采食量和料重比。

1.4.2 腸道菌群數量

于試雞14、28、42日齡時，每個重復中隨機抽取3只（禁食12 h）稱重，宰殺后無菌操作取盲腸內容物，置于滅菌生理鹽水中搖勻，梯度稀釋。其中大腸桿菌采用麥康凱培養(yǎng)基，乳酸菌采用MRS培養(yǎng)基，置于恒溫培養(yǎng)箱，37℃下分別培養(yǎng)24 h和48 h，采用平板培養(yǎng)計數法分別對腸道大腸桿菌和乳酸菌進行計數。

1.4.3 免疫器官指數

于試雞14、28、42日齡時，每個重復中隨機抽取2只（禁食12 h）稱重，宰殺后立即無菌解剖，摘取脾臟、胸腺和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮重，計算脾臟、法氏囊和胸腺的免疫器官指數。

免疫器官指數（mg/g）=免疫器官重量/活體重。

1.4.4 新城疫抗體效價

于試雞14、28和42日齡時，每個重復隨機選取2只，采頸動脈血，分離血清，并進行倍比稀釋，采用V型血凝板檢測血清中的血凝抑制抗體效價[6]。

1.5 數據統(tǒng)計與處理

應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件中的ANOVA過程進行單因子方差分析，采用LSD法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著，結果用“平均值±標準誤”表示。

2 結果分析

2.1 復合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響(見表2)

表2 復合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響

由表2可知，復合微生態(tài)制劑的添加對肉雞平均日增重和料重比有不同程度的影響。其中，試驗Ⅱ組在試驗初期對肉雞平均日增重作用效果不明顯，隨著日齡的增加，效果逐漸顯著（P＜0.05）。試驗各階段，與對照組相比，各試驗組有提高平均日增重降低料重比(各別組的數值除外)的趨勢；其中，試驗組Ⅲ對肉雞生長性能的作用效果最好，平均日增重、提高了4.93%～14.41%（P＜0.05）；料重比降低了6.23%～16.57%（P＜0.05）。與對照相比，試驗 IV 組除 14～21 d，21～28 d外，在其他日齡階段均可顯著提高肉雞平均日增重（P＜0.05），但在降低料重比方面無明顯作用趨勢。

由此可見，在提高肉雞平均日增重和降低料重比方面，Ⅲ組的效果最好。

2.2 復合微生態(tài)制劑對肉雞盲腸菌群數量的影響(見表3)

從表3可知，添加復合微生態(tài)制劑以后，肉雞盲腸內乳酸菌的數量均高于對照組，其中，Ⅱ組在各試驗階段乳酸菌數量與對照相組比分別提高了14.68%、6.65%和1.77%；Ⅲ組與對照組相比分別提高了16.12%、7.74%和4.30%；復合微生態(tài)制劑Ⅱ組和Ⅲ組均能顯著降低肉雞盲腸大腸桿菌的數量（P＜0.05），在14、28、42日齡階段分別比對照組降低了5.81%、3.47%、2.05%和5.18%、4.59%、3.98%。除14 d外，試驗Ⅳ組在改善肉雞腸道菌群方面作用效果不顯著（P＞0.05）。由此可見，試驗Ⅲ組在改善肉雞腸道菌落平衡方面效果最好。

表3 復合微生態(tài)制劑對肉雞盲腸乳酸菌和大腸桿菌數量的影響(lg CFU/g)

2.3 復合微生態(tài)制劑對肉雞免疫器官指數的影響(見表4)

由表4可知，復合微生態(tài)制劑Ⅲ組可顯著提高肉雞的免疫器官指數（P＜0.05）。Ⅱ組在提高肉雞脾臟和法氏囊指數方面具有顯著作用（P＜0.05）。在試驗末期（42日齡），Ⅱ組脾臟指數、法氏囊指數和胸腺指數分別比對照組提高了14.10%、30.88%和6.29%。Ⅲ組與對照組相比，分別提高了16.03%、54.41%和21.71%。復合微生態(tài)制劑Ⅳ組能夠提高肉雞脾臟指數，但作用效果不顯著（P＞0.05）；在法氏囊指數和胸腺指數方面，Ⅳ組和對照組相比有下降的趨勢。試驗結果表明，添加的復合微生態(tài)制劑濃度過高反而會影響肉雞免疫器官的發(fā)育，Ⅲ組作用效果最好。

表4 復合微生態(tài)制劑對肉雞脾臟指數、法氏囊指數和胸腺指數的影響(mg/g)

2.4 復合微生態(tài)制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響(見表5)

表5 復合微生態(tài)制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響(mg/g)

從表5可知，復合微生態(tài)制劑試驗Ⅱ組和Ⅲ組均能提高肉雞血清新城疫抗體效價，且Ⅲ組作用效果最好。在試驗各日齡階段，Ⅲ組數值均顯著高于對照組（P＜0.05），比對照組提高了14.62%～30.17%。Ⅱ組與對照組相比提高了2.51%～11.81%。試驗Ⅳ組對肉雞新城疫抗體效價的影響有下降的趨勢。由此可見，一定濃度復合微生態(tài)制劑可以提高肉雞新城疫抗體表達水平，且Ⅲ組效果最好。

3 討論

3.1 復合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響

本研究將不同濃度的復合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖配伍添加到肉雞飲水中，結果表明，0.2%的復合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖有助提高肉雞的平均日增重，降低料重比。這是因為復合微生態(tài)制劑中存在的有益微生態(tài)成分可有效地補充各種消化酶，加強機體對飼料中營養(yǎng)成分的消化吸收，提高飼料利用率[7]；改善腸道微生態(tài)環(huán)境，進而提高肉雞的生長性能[8]。胡順珍等[9]將乳酸菌和芽孢桿菌組成的復合微生態(tài)制劑添加到肉雞飼糧中，飼喂42 d后，肉雞的平均日增重顯著高于對照組（P＜0.05），料重比顯著低于對照組（P＜0.05）。金鹿等[10]也通過試驗證實，在飼料中添加復合微生態(tài)制劑與抗生素能使試驗組肉雞的平均日增重提高13.97%，顯著高于對照組（P＜0.05），均與本試驗的研究結果一致。

3.2 復合微生態(tài)制劑對肉雞腸道菌群數量的影響

復合微生態(tài)制劑中的酵母菌和枯草芽孢桿菌可以為乳酸菌的生長創(chuàng)造有利的厭氧環(huán)境，乳酸菌代謝產生的乳酸會降低腸道pH值，進而抑制腸道中大腸桿菌等病原微生物的定植和生長，在動物腸道內建立正常的微生物區(qū)系，促進動物生長繁殖。董秀梅等[11]研究顯示，飼糧中添加復合微生態(tài)制劑可顯著地增加肉雞腸道內乳酸菌和腸球菌的數量，抑制腸道內大腸桿菌的增殖。黃芪多糖作為免疫增強因子，具有增強免疫力、抗氧化、抗病毒等作用。黃芪多糖與復合微生態(tài)制劑聯合使用時，可作為糖類物質被乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌所利用，使腸道內有益菌大量繁殖；同時黃芪多糖進入腸道后會和大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌搶占有利的定植位點，從而抑制病原菌的定植。魏炳棟等[12]研究表明，飼糧中添加黃芪多糖能夠顯著促進三黃肉雞盲腸雙歧桿菌和乳桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長。本試驗將復合微生態(tài)制劑與黃芪多糖配伍飼喂肉雞，結果顯示，0.2%的復合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖能在14日齡和28日齡時顯著提高肉雞盲腸內乳酸菌的數量（P＜0.05），并且顯著降低了腸道中大腸桿菌的數量（P＜0.05）。

3.3 復合微生態(tài)制劑對肉雞免疫器官指數的影響

免疫器官的發(fā)育狀態(tài)及機能強弱直接決定著禽類的免疫水平[13]，脾臟、法氏囊和胸腺分別是機體重要的外周免疫器官、體液免疫器官和淋巴器官，參與全身的細胞免疫和體液免疫，是體內產生抗體的重要器官。免疫器官指數可以作為衡量禽類機體免疫能力的重要指標，免疫器官重量的增加表明機體免疫能力的增強。本試驗結果表明，添加0.2%復合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖后，14、28日齡和42日齡肉雞的脾臟指數、法氏囊指數和胸腺指數均顯著高于對照組（P＜0.05），與柳志余[14]所報道的結果相符。

3.4 復合微生態(tài)制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響

多年來，新城疫一直是嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)的主要傳染病之一。目前，通常選用新城疫血凝抑制抗體水平來評價肉雞的體液免疫情況。新城疫抗體水平反映雞新城疫疫苗免疫后機體特異性體液免疫反應[15]。研究表明，在基礎飼糧基礎上添加黃芪多糖、益生菌制劑后，可明顯提高雛雞血清新城疫抗體效價[16]。黃芪多糖可通過升高細胞蛋白激酶活性來影響機體免疫細胞的信號轉導，進而發(fā)揮其免疫調節(jié)作用[17]。試驗證實，復合微生態(tài)制劑中的有效成分可刺激機體免疫系統(tǒng)，使機體的免疫功能始終處在較高的活性狀態(tài)，從而延長B細胞抗體分泌能力，延緩抗體滴度下降速度[18]。本試驗結果表明，飼喂0.2%的復合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖，能顯著提高肉雞血清新城疫抗體效價（P＜0.05），增強肉雞免疫力。

4 結論

①0.2%的復合微生態(tài)制劑和2.5%的黃芪多糖添加在肉雞試驗中應用效果最好，能增強肉雞的生長性能，顯著提高平均日增重，降低料重比。并且在改善腸道菌群結構方面具有明顯效果，可增加益生菌的數量，抑制腸道病原菌的生長。

②適量添加復合微生態(tài)制劑可以提高肉雞法氏囊、胸腺以及脾臟等免疫器官指數，增加新城疫抗體效價，從而提高肉雞免疫力。