■王 珅 畢聰明 梁軍生 肖銀霞

(遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州121001)

鉬(Mo)是黃嘌呤氧化酶的組成成分,參與和影響機(jī)體內(nèi)多種物質(zhì)的代謝,是動(dòng)物必需的微量元素，具有重要的生物學(xué)作用。同時(shí)，Mo也是動(dòng)物消化道微生物的生長(zhǎng)因子，被微生物吸收，適量的Mo可以促進(jìn)消化。動(dòng)物一般不出現(xiàn)Mo缺乏癥，但易出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。目前，關(guān)于鉬對(duì)羊、小鼠、雞的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝影響以及鉬中毒對(duì)免疫功能的影響的研究報(bào)道較多[1-3]。鋅、銅合理的營(yíng)養(yǎng)水平可強(qiáng)化動(dòng)物的防御和免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)疾病的抵抗能力，但有關(guān)鋅、銅對(duì)小鼠高鉬的免疫保護(hù)的研究未見詳細(xì)報(bào)道。本研究擬以小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，探討高M(jìn)o添加水平對(duì)小鼠免疫功能的影響，以期為鉬中毒的免疫保護(hù)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

鉬酸鈉、硫酸銅、硫酸鋅，粉末狀固體，飼料級(jí)，由遼寧凱為生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì)

采用完全隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用100只昆明小鼠，日齡和體重相近，試驗(yàn)前基礎(chǔ)日糧預(yù)飼1周，隨機(jī)分為5個(gè)組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只，試驗(yàn)分組見表1，試驗(yàn)期為30 d。

表1 試驗(yàn)分組

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，在試驗(yàn)前，對(duì)飼養(yǎng)室進(jìn)行全面刷洗，消毒，自然光照通風(fēng)，正試期小鼠自由采食，水槽供水。

1.4 試驗(yàn)方法

定期采血，作全血涂片，福爾馬林-丙酮緩沖液固定。醋酸染色液常溫染色浸染2 h，水洗晾干，1%甲基綠溶液復(fù)染1 min，沖洗晾干。油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中有褐紅色顆粒為T淋巴細(xì)胞，沒(méi)有褐紅色顆粒的為B淋巴細(xì)胞。計(jì)算出T、B淋巴細(xì)胞的百分率，并根據(jù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì)算其絕對(duì)值。球蛋白含量的測(cè)定采用美國(guó)IDEXX全自動(dòng)血液生化分析儀測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件中的One-way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，LSD進(jìn)行多重比較，P＜0.01為差異極顯著，P＜0.05為差異顯著，數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 外周血T淋巴細(xì)胞百分率變化（見表2）

表2 外周血T淋巴細(xì)胞百分率變化(%)

從表2結(jié)果可以看出，30 mg/kg鉬添加劑量能降低小鼠外周血T淋巴細(xì)胞百分率，試驗(yàn)Ⅰ組小鼠26 d與1 d相比T淋巴細(xì)胞百分率下降了12.2%；試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組26 d與1 d相比小鼠T淋巴細(xì)胞百分率分別降低了7.3%、3.1%、1.1%。26 d試驗(yàn)Ⅳ組與試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明銅鋅聯(lián)合組能有效地拮抗鉬酸鈉引起的外周血T淋巴細(xì)胞百分率下降，并且其效果優(yōu)于單獨(dú)添加銅和鋅。

2.2 外周血B淋巴細(xì)胞百分率變化(見表3)

表3 外周血B淋巴細(xì)胞百分率變化(%)

從表3可以看出，30 mg/kg鉬添加劑量能降低小鼠外周血B淋巴細(xì)胞的百分率，試驗(yàn)I組小鼠26 d B淋巴細(xì)胞百分率比1 d下降了15.1%；26 d與1 d相比，銅添加的試驗(yàn)II組、鋅添加的試驗(yàn)Ⅲ組和銅鋅聯(lián)合添加的試驗(yàn)Ⅳ組B淋巴細(xì)胞分別下降了5.6%、3.8%、2.3%，試驗(yàn)26 d試驗(yàn)Ⅳ組與試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），與對(duì)照組比較差異不顯著（P＞0.05）,說(shuō)明銅鋅聯(lián)合添加能很好地對(duì)抗鉬酸鈉的免疫損傷。

2.3 血清球蛋白含量的變化(見表4)

表4 血清球蛋白含量的變化(g/l)

由表4可知，試驗(yàn)Ⅰ組（30 mg/kg鉬添加劑量）在第16 d開始降低小鼠血清中球蛋白的含量，與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組也是從16 d開始大幅度降低血清球蛋白的濃度，與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），但Ⅰ組和Ⅱ、Ⅲ組之間差異不顯著，說(shuō)明單獨(dú)添加銅和鋅對(duì)小鼠鉬中毒造成的免疫損傷不能起到很好的保護(hù)作用；試驗(yàn)Ⅳ組和對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明銅與鋅聯(lián)合使用能夠協(xié)同保護(hù)鉬中毒小鼠的免疫損傷。

3 討論

3.1 鉬對(duì)小鼠免疫功能的影響

微量元素鉬是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中必需微量元素，具有許多生物學(xué)功能，能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，對(duì)動(dòng)物的免疫、代謝及發(fā)育等都起著重要的作用[4]。動(dòng)物缺鉬時(shí)發(fā)育受阻，幼齡動(dòng)物尤其表現(xiàn)明顯。研究證實(shí)，適量的鉬對(duì)肉牛有促生長(zhǎng)作用，對(duì)乳牛有促進(jìn)產(chǎn)奶量的效果。適量的鉬能提高機(jī)體細(xì)胞的免疫力，試驗(yàn)證明，適量的鉬可以提高雛雞和小鼠免疫器官的質(zhì)量、生長(zhǎng)指數(shù)，而過(guò)量的鉬可以引起免疫器官的病理?yè)p傷[5]。試驗(yàn)表明，飼料中添加30 mg/kg的鉬對(duì)小鼠造成了免疫損傷，降低了小鼠外周血中的淋巴細(xì)胞比率，并且降低血清中的免疫球蛋白含量。

3.2 銅與鋅對(duì)小鼠免疫功能的影響

銅缺乏可以引起胸腺、脾臟的萎縮，淋巴細(xì)胞減少，脾臟生產(chǎn)IL-1、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1B和IL-6的能力以及淋巴細(xì)胞合成IL-2的能力減弱。本試驗(yàn)表明，添加15 mg/kg銅在一定程度上降低了鉬所致的免疫損傷，但保護(hù)作用不明顯。研究表明，銅與鉬有吸收拮抗作用，但添加銅未見到明顯的保護(hù)。鋅是動(dòng)物免疫系統(tǒng)發(fā)育和維持功能的關(guān)鍵物質(zhì)，研究表明，補(bǔ)鋅可以提高外周淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。本試驗(yàn)證明，補(bǔ)鋅可以降低由于鉬中毒所致的淋巴細(xì)胞減少幅度，但單獨(dú)補(bǔ)鋅對(duì)血清球蛋白的降低未見明顯的保護(hù)作用。試驗(yàn)表明，在飼料中同時(shí)添加銅和鋅對(duì)鉬中毒所致的淋巴細(xì)胞減少和血清球蛋白降低有很好的保護(hù)作用。

4 結(jié)論

每千克飼料中同時(shí)添加15 mg的銅與鋅能有效保護(hù)鉬中毒小鼠的免疫損傷，鋅在蛋白質(zhì)中與巰基結(jié)合比較穩(wěn)定，在其他元素間的調(diào)控中起著主導(dǎo)作用。鋅能作用于造血系統(tǒng)的不同環(huán)節(jié)，協(xié)同完成造血功能，從而在對(duì)抗鉬中毒中發(fā)揮提升外周血T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的作用。鋅也能抑制鉬在腸道的吸收，降低鉬毒性，鋅有競(jìng)爭(zhēng)性置換鉬的作用，從而治療中毒。