陳冬金，陳巖鋒，謝喜平，孫世坤，桑 雷

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建福州350013）

兔球蟲?。╮abbit coccidiosis）是一種由艾美耳屬（Eimeria）的球蟲寄生于家兔肝膽管及腸上皮細(xì)胞的寄生性原蟲病，是兔最常見的疾病之一，流行極為普遍，1～3月齡的幼兔易感染，感染率高達(dá)90%以上，患病的幼兔死亡率高達(dá)70%，成年兔也常表現(xiàn)為帶蟲者。兔球蟲基本寄生于腸粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)除斯氏艾美爾球蟲（寄生于膽管上皮細(xì)胞內(nèi)）外，發(fā)病兔大部分是混合感染，而且是同時(shí)感染幾種球蟲。對(duì)兔養(yǎng)殖戶造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，阻礙了兔業(yè)的健康發(fā)展。對(duì)兔球蟲病的防治工作，是每個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的必要工作，目前主要是靠藥物和環(huán)境衛(wèi)生進(jìn)行預(yù)防，但極易產(chǎn)生耐藥性，所以有針對(duì)性地對(duì)兔場(chǎng)進(jìn)行兔球蟲感染的情況和種類調(diào)查，對(duì)兔球蟲病防治具有指導(dǎo)意義，目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的家兔球蟲有16 個(gè)種。福建省過(guò)去尚未對(duì)家兔球蟲進(jìn)行較大面積的普查，對(duì)兔球蟲的感染情況不甚了解，為該省球蟲病的有效防治與研究提供科學(xué)依據(jù)，開展了該省家兔主要球蟲種類及感染率的調(diào)查研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

2012～2013年，在福州市連江縣，泉州市德化縣，南平市，三明市，龍巖市上杭縣、連城縣、武平縣，寧德市，福鼎市等地開展球蟲病感染情況的調(diào)查。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

Olympus倒置顯微鏡、顯微攝影機(jī)、顯微細(xì)胞圖像處理系統(tǒng)軟件、鋼絲圈糞篩（120目）、燒杯、玻璃棒、蓋玻片、載玻片；飽和鹽水、生理鹽水、2.5%重鉻酸鉀溶液等。

1.3 糞樣采集

以個(gè)體采樣法隨機(jī)采集了上述八個(gè)地區(qū)的不同兔場(chǎng)幼兔和種兔的糞樣，每個(gè)糞樣10g左右，將所采兔糞放入潔凈的自封袋中，做好記號(hào)，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 蟲卵的收集與鑒定

取新鮮兔糞5 克，置于容量為100 mL 燒杯中，加入少量飽和食鹽溶液攪拌溶解后，再加飽和食鹽水（鹽水總量約為糞量的10倍）攪勻。用120目孔網(wǎng)篩，將上述糞液過(guò)濾到另一個(gè)燒杯內(nèi)，棄去糞渣。將濾液靜置30min后，卵囊浮在液面上，再用金屬環(huán)平著接觸液面，沾取一層水膜，抖落到載玻片上，加蓋玻片后鏡檢，每個(gè)樣品制作三個(gè)玻片。制片后于光學(xué)顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊者判為陽(yáng)性并按下列標(biāo)準(zhǔn)判定其感染強(qiáng)度：每個(gè)糞樣鏡檢時(shí)，若平均每個(gè)視野不超過(guò)5 個(gè)卵囊記為“＋”，6～10個(gè)卵囊記為“＋＋”，11～20個(gè)卵囊個(gè)記為“＋＋＋”，≥21 個(gè)以上卵囊記為“＋＋＋＋”，未發(fā)現(xiàn)卵囊記為“－”。

以兔場(chǎng)為單位，將每個(gè)兔場(chǎng)的球蟲陽(yáng)性糞便收集到干凈燒杯中，用飽和氯化鈉溶液漂浮法收集卵囊，然后用2.5%重鉻酸鉀溶液懸浮卵囊，放到干凈培養(yǎng)皿中，混勻，液面高度小于5mm，做好標(biāo)記，放于28 ℃搖床內(nèi)孢子化培養(yǎng)48～72h，每隔12h觀察孢子化情況，使其孢子化率達(dá)80%以上，收集孢子化卵囊放于4 ℃冰箱內(nèi)保存。在光鏡下利用顯微測(cè)微尺測(cè)量卵囊的大小，每一種球蟲測(cè)量10 個(gè)卵囊；觀察卵囊的形態(tài)、顏色、孢子囊的形態(tài)、卵膜孔的有無(wú)、內(nèi)外殘?bào)w和斯氏體的有無(wú)等。在高倍鏡（400×）下對(duì)對(duì)孢子化卵囊進(jìn)行顯微拍照。然后根據(jù)卵囊特征，參照文獻(xiàn)［1－6］對(duì)孢子化卵囊進(jìn)行初步蟲種鑒定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

利用Excel對(duì)各個(gè)兔場(chǎng)家兔球蟲的感染率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)和不同階段家兔球蟲病的感染率

在調(diào)查福建省九個(gè)縣市的不同兔場(chǎng)中的909只兔中有400只感染，球蟲感染率平均為44.00%，種兔的平均感染率為4.71%，幼兔的平均感染率為59.33%，其中福鼎兔場(chǎng)的球蟲病感染率最高，達(dá)100%，見表1、表2。

表1 不同地區(qū)家兔球蟲病的感染率Table 1 Infection rate of rabbit coccidia in various areas

表2 不同階段家兔球蟲感染率Table 2 Infection rate of rabbit coccidian

2.2 不同品種家兔感染情況的比較

從表3 可見，福建黃兔的感染率最高，高達(dá)51.52%，福建白兔的感染率最低為4.41%。

2.3 不同年度家兔感染情況

由表4可知，種兔和幼兔的感染率2013年度分別為15.63%、89.26%，明顯高于2012年度的3.14%和32.85%。

2.4 球蟲卵囊的形態(tài)學(xué)觀察

經(jīng)過(guò)調(diào)查分類鑒定.本次共發(fā)現(xiàn)12種艾美耳球蟲，分別為斯氏艾美耳球蟲、中型艾美耳球蟲、大型艾美耳球蟲、黃艾美耳球蟲、新兔艾美耳球蟲、野兔艾美耳球蟲、納格浦爾艾美耳球蟲、無(wú)殘艾美耳球蟲、長(zhǎng)形艾美耳球蟲、穿孔艾美耳球蟲、梨形艾美耳球蟲、腸艾美耳球蟲。具體各種球蟲的形態(tài)學(xué)觀察見圖1（400×）。

3 討論

本試驗(yàn)共調(diào)查了福建省福州、龍巖、三明、寧德等地區(qū)的12個(gè)兔場(chǎng)，均有球蟲感染，上述所調(diào)查的縣市家兔球蟲病平均感染率為44.00%，最高的達(dá)100%，最低的4.41%，且均為多種球蟲的混合感染。本次調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除了南平和武平地區(qū)的感染率較低，其原因是南平兔場(chǎng)飼養(yǎng)管理水平水平較高，武平兔場(chǎng)是新場(chǎng)有關(guān)。其他的無(wú)論是規(guī)?；脠?chǎng)還是農(nóng)戶散養(yǎng)的兔均感染球蟲，福建省家兔普遍存在球蟲感染現(xiàn)象，而且感染率較高。所調(diào)查家兔中幼兔的感染率較高，平均達(dá)59.33%，種兔的感染率相對(duì)較低，平均為4.71%；幼齡兔球蟲感染率較高，且危害嚴(yán)重。姜英等［7］調(diào)查河南省幼兔感染率最高，達(dá)83.0%。連為茂等［8］對(duì)建甌市小橋鎮(zhèn)家兔球蟲的調(diào)查發(fā)現(xiàn)31～60日齡感染最高達(dá)85.23% ，其次是61～90日齡達(dá)83.71%。吳小華［9］調(diào)查寧化縣的結(jié)果是幼兔（2月齡至4月齡）的感染率最高，為87.77%，斷乳36日齡至2月齡和4月齡至5

月齡的兔感染率次之，分別是66.15%和61.36%。崔平等［10］調(diào)查結(jié)果顯示，河北省45～60日齡幼兔球蟲感染率最高達(dá)96.7%；90～120日齡的青年兔球蟲感染率為75.1%。祖尼薩等［11］報(bào)道，陜西楊凌1～2月齡的幼兔球蟲感染率達(dá)99.4%，12～24月齡的成年兔感染率最低，為38.9%，2～3月齡兔球蟲感染率最高，為75.3%，12月齡以上的兔球蟲感染率最低，為51.7%，球蟲感染率隨兔年齡增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明球蟲對(duì)幼兔危害嚴(yán)重。

表3 不同品種家兔球蟲感染情況Table 3 Infection rate of rabbit coccidian in different breeds

表4 不同年度家兔球蟲感染情況Table 4 Infection rate of rabbit coccidian in different years

圖1 福建省兔球蟲的種類Fig.1 Species of rabbit coccidial in Fujian

本試驗(yàn)顯示，福建地方家兔福建黃兔、福建白兔、閩西南黑兔與新西蘭白兔四個(gè)品種間球蟲的感染情況不同，福建黃兔球蟲的感染率最高達(dá)51.52%，福建白兔球蟲的感染率最低為4.41%。史柯等［12］在河南省部分地區(qū)兔腸道寄生蟲感染情況調(diào)查中結(jié)果顯示兔球蟲的感染率最高，為64.11%，且兔腸道寄生蟲感染在品種間差異顯著，以獺兔感染率最高，達(dá)85.5%。劉杰等［13］發(fā)現(xiàn)，兔球蟲感染率在不同品種間差異極顯著，獺兔和肉兔感染率高于長(zhǎng)毛兔，這與獺兔和肉兔飼養(yǎng)周期比較短，用藥不嚴(yán)格，且大部分在粗放條件下飼養(yǎng)有關(guān)。

本次調(diào)查福建省地區(qū)共l2個(gè)兔場(chǎng)，均有球蟲感染，以幼兔感染率和感染強(qiáng)度最高，多呈中度或重度感染。說(shuō)明目前兔場(chǎng)球蟲病控制重點(diǎn)依然是幼兔階段。本研究參照國(guó)際兔球蟲有效種的新分類標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)，福建地區(qū)兔場(chǎng)存在12種兔球蟲。本次調(diào)查出的9種兔艾美耳球蟲種類與對(duì)國(guó)內(nèi)不同省市地區(qū)兔場(chǎng)球蟲感染調(diào)查結(jié)果相近，崔平等［10］根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察共鑒定出16個(gè)蟲種，即：除了本試驗(yàn)的12種外，還有兔艾美耳球蟲、微小艾美耳球蟲、盲腸艾美耳球蟲、松林艾美耳球蟲。Jing等［14］等報(bào)道國(guó)內(nèi)流行率最高的球蟲種類為穿孔艾美耳球蟲，其次為中型艾美耳球蟲，再次為大型艾美耳球蟲、無(wú)殘艾美耳球蟲、腸艾美耳球蟲。宋鴻雁［15］等報(bào)道測(cè)出10 種艾美耳屬的球蟲，而馬永華等［16］報(bào)道甘肅蘭州地區(qū)發(fā)現(xiàn)了12種兔球蟲，除以上10種艾美耳球蟲，還報(bào)道了松林艾美耳球蟲和新兔艾美耳球蟲，程寶艷等［17］也報(bào)道了安徽地區(qū)發(fā)現(xiàn)那格浦耳艾美耳球蟲。

Cere等［18］根據(jù)球蟲的基因特性鑒別球蟲，Oliveira［19］等運(yùn)用PCR 方法鑒別了11種兔艾美耳球蟲，這些方法的運(yùn)用有利于從分子水平鑒定蟲種。本次調(diào)查從形態(tài)學(xué)方面對(duì)兔球蟲的蟲種進(jìn)行鑒定，為保證球蟲種類鑒定結(jié)果的真實(shí)可靠性，應(yīng)進(jìn)一步結(jié)合分子生物學(xué)和人工感染手段進(jìn)行鑒定，并擴(kuò)大調(diào)查群體，獲得更加可靠的數(shù)據(jù)。

4 小結(jié)

福建省2013年家兔球蟲感染率比2012年明顯上升，應(yīng)引起各養(yǎng)殖戶的高度重視。為了控制球蟲病的發(fā)生，兔舍建筑應(yīng)選擇向陽(yáng)、干燥的地方并要保持環(huán)境的清潔衛(wèi)生。食具要勤清洗消毒，兔籠尤其是籠底板要定期用火焰消毒，以殺死卵囊。斷奶以后至3月齡的兔應(yīng)用藥物控制球蟲病的發(fā)生，且不分季節(jié)。一旦發(fā)病，應(yīng)將病兔隔離，注意選擇敏感藥物進(jìn)行防治。為防止產(chǎn)生抗藥性，可采用幾種抗球蟲藥物輪換使用。

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