郭時(shí)金，王艷萍，付石軍，張志美，楊麗梅，張 穎，徐倩倩，沈志強(qiáng)＊

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600；2.山東綠都安特動(dòng)物藥業(yè)有限公司，山東濱州256600）

清瘟敗毒顆粒是一種新顆粒制劑，由石膏、黃連、黃芩、梔子、知母、玄參等14味中草藥按一定比例組成。獸醫(yī)臨床主要治療豬高熱綜合征、豬鏈球菌病、鴨傳染性漿膜炎、豬附紅細(xì)胞體病、牛流行性感冒和犬瘟熱等［1］。為了探討該制劑的穩(wěn)定性、了解影響其穩(wěn)定性的因素，對(duì)清瘟敗毒顆粒進(jìn)行了加速穩(wěn)定性試驗(yàn)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器設(shè)備 KDM 型調(diào)溫電熱套（山東鄄城華魯電熱儀器有限公司）RE－52AAA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海嘉鵬科技有限公司）SHB－B95型循環(huán)水式多用真空泵（上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司）500L提取罐（浙江溫兄機(jī)械閥協(xié)有限公司）多功能提取濃縮機(jī)組（浙江溫兄機(jī)械閥協(xié)有限公司）YK－160搖擺式顆粒機(jī)（常州天力干燥設(shè)備有限公司）槽型混合器（常州天力干燥設(shè)備有限公司）熱封循環(huán)烤箱（北京飛龍制藥機(jī)械設(shè)備廠）薄層色譜展開缸（上海信宜儀器設(shè)備廠）ZF－2型三用紫外分析儀（天津市富蘭斯電子科貿(mào)有限公司）301型電熱恒溫干燥箱（龍口市先科儀器公司）電熱恒溫培養(yǎng)箱（DH400）（天津市泰斯特儀器有限公司）AL－210.3 型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）BT·25S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.1.2 試劑和藥品 清瘟敗毒顆粒各味藥材均購(gòu)自安國(guó)伊康藥業(yè)有限公司。清瘟敗毒顆粒由山東綠都安特動(dòng)物藥業(yè)有限公司研制，批號(hào)：20120207、20120210、20120213。相對(duì)濕度為75%的恒濕溶液的配制：30.14%硫酸、18.61%氫氧化鈉及24.95%氯化鈣（W／V）的混合水溶液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 清瘟敗毒顆粒的制備

1.2.1.1 處方 石膏、地黃、水牛角、黃連、梔子、牡丹皮、黃芩、赤芍、玄參、知母、連翹、桔梗、甘草、淡竹葉。

1.2.1.2 輔料 葡萄糖。

1.2.1.3 工藝優(yōu)選 按照處方稱取黃連1份，進(jìn)行如下因素水平的正交試驗(yàn)篩選工藝：10 倍、9 倍、8倍量水，煎煮1.5h、1.5h、1h，提取次數(shù)1、2、3次，以鹽酸小檗堿含量為指標(biāo)進(jìn)行結(jié)果分析；取黃芩1份，10倍、10倍、10倍量水，煎煮時(shí)間2h、1h、1h，煎煮次數(shù)1、2、3次，以黃芩苷得率為指標(biāo)進(jìn)行正交優(yōu)選工藝；除上述的黃連和黃芩兩味藥外，剩余的藥味按處方量的1／10稱取，加水溫浸1h后，回流提取4次，第一次加水10倍量，提取2h，第二次加水8倍量，提取1h，第3次加水8倍量，提取1h，第4次加水8倍量，提取1h，分別濾過，每份樣品濃縮并定容于100mL量瓶中，作為儲(chǔ)備液，備用。精密吸取上述儲(chǔ)備液各50mL，置干燥的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，然后放在105 ℃再干燥3h，放到干燥器中冷卻0.5 h，快速稱重，計(jì)算干膏得率。

1.2.1.4 藥液與輔料用量的考察試驗(yàn)

（1）輔料及其用量的選擇。按2010年版《中華人民共和國(guó)獸藥典》第二部［2］要求，輔料用量不超過清膏量的5倍?？紤]選用葡萄糖、乳糖和糊精三種輔料進(jìn)行顆粒成型工藝的篩選，分別稱取浸膏和三種輔料，分別混合均勻。考察浸膏與輔料混合后的吸濕性、流動(dòng)性、以及制成顆粒后的成形性為指標(biāo)，來選定成型輔料。同時(shí)也考慮到臨床輔料用量以少為佳的原則，參照實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，最終確定浸膏與葡萄糖用量。

（2）選擇潤(rùn)濕劑。由于本制劑浸膏為水煎煮劑，具有較強(qiáng)粘性，故乙醇被用作潤(rùn)濕劑，從而達(dá)到降低粘性和吸濕性的效果。本試驗(yàn)比較了分別添加50%、75%、95%和99%等幾種不同濃度的乙醇時(shí)軟材的情況，觀察其對(duì)制粒的影響。

（3）制粒。按照各味藥最佳提取工藝，合并所有稠膏和黃芩苷粉，加適量葡萄糖和潤(rùn)濕劑，制成軟材，制粒，烘干，整粒。

（4）顆粒制備的驗(yàn)證試驗(yàn)。以最佳制備工藝重復(fù)制備顆粒3個(gè)批次，同樣以顆粒性狀、鑒別、粒度、水分含量等作為指標(biāo)，考察該制備工藝的穩(wěn)定性。

1.2.2 清瘟敗毒顆粒穩(wěn)定性研究 性狀按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案性狀描述進(jìn)行考察，觀察內(nèi)容物色澤、氣味等。按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案鑒別項(xiàng)下的方法考察。粒度檢查按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010年版二部附錄81頁粒度和粒度分布測(cè)定法第二法中雙篩分法測(cè)定，不能通過小號(hào)篩和能通過大號(hào)篩的顆粒及粉末，不得超過15%。水分檢查按照文獻(xiàn)［1］所示方法測(cè)定，不得超過6.0%。

溶化性檢查：取本品10g，加熱水200mL，攪拌5min，立即觀察，允許有輕微混濁，但不得有焦屑等異物；微生物限度檢查按文獻(xiàn)［1］所示微生物限度檢查法檢查。

1.2.2.1 常溫留樣穩(wěn)定性 取三批的供試品：20120207、20120210、20120213，在常溫（25℃±2℃）、相對(duì)濕度60%±10%條件下放置，分別于l月、2月、3月、6月、12月對(duì)外觀性狀，鑒別、粒度、水分、溶化性、微生物限度進(jìn)行考察，并將結(jié)果與初始0月相比較。

1.2.2.2 加速留樣穩(wěn)定性 取三批供試品：20120207、20120210、20120213，在干燥器下部放置恒濕溶液，上部放置供試品。將干燥器置于恒溫箱中［3－6］，在40 ℃±2 ℃，相對(duì)濕度為（75士5）%條件下分別于1月、2月、3月、6月對(duì)外觀性狀、定性鑒別、粒度、水分、溶化性、微生物限度進(jìn)行考察，并將結(jié)果與初始0月相比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 清瘟敗毒顆粒的制備

2.1.1 工藝優(yōu)選結(jié)果

2.1.1.1 黃連提取工藝優(yōu)化結(jié)果 黃連加10倍、8倍、8倍水，分別煎煮1.5h、1.5h、1h，將煎液合并，濾液，減壓濃縮至密度為1.08～1.10的濃縮液。

2.1.1.2 黃芩提取工藝優(yōu)化結(jié)果 取黃芩，加8倍水，煎煮三次，每次各為1h，將煎液合并，濾過，并濃縮至80 ℃時(shí)加入2mol／L鹽酸溶液，將pH 調(diào)節(jié)至1.0～2.0，保溫約1h，靜置12h，濾過，沉淀加6～8倍量水，用40% NaOH 溶液將pH 調(diào)至7.0，再加等量乙醇，攪拌使之溶解，濾過，濾液用2 mol／L鹽酸調(diào)pH 至2.0，60℃保溫30min，靜置12h，濾過，沉淀加乙醇洗至pH 至7.0，揮盡乙醇，得黃芩提取物，備用；

2.1.1.3 其余12味藥材提取工藝優(yōu)化結(jié)果 其余12味藥，加水溫浸1h，煎煮2次，第一次10倍水煎煮2h，第二次加8倍水煎煮1h，濾過，合并濾液，減壓濃縮至密度為1.08～1.10；

2.1.2 潤(rùn)濕劑的確定和劑量 以50%和75%乙醇為潤(rùn)濕劑制備的軟材黏度偏大、較軟，95%和99%乙醇試用效果良好，究其生產(chǎn)成本考慮，確定以95%乙醇作為潤(rùn)濕劑。

2.1.3 輔料及其用量的選擇 最終選擇輔料為葡萄糖，其與藥材總得膏量比例約為3∶1。

2.1.4 制粒 合并所有稠膏和黃芩苷粉，加輔料適量并以潤(rùn)濕劑調(diào)和制成軟材，制粒，烘干，整粒，即得。

2.1.5 顆粒制備的驗(yàn)證結(jié)果 根據(jù)以上試驗(yàn)，篩選出清瘟敗毒顆粒配比如表1所示。

2.2 清瘟敗毒顆粒穩(wěn)定性結(jié)果

2.2.1 加速穩(wěn)定性試驗(yàn) 由表2、3、4 可知，在高濕、高熱條件下，對(duì)清瘟敗毒顆粒進(jìn)行6個(gè)月的加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，各項(xiàng)指標(biāo)均符合2010年版《中華人民共和國(guó)獸藥典》獸藥典規(guī)定，與0月相比較，無明顯變化，表明顆粒穩(wěn)定性不受影響。

表1 中試驗(yàn)證結(jié)果Table 1 The results of pilot test

表2 加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)（批號(hào)：20120207）Table 2 Acceleration stability tests（batch number：20120207）

表3 加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)（批號(hào)：20120210）Table 3 Acceleration stability tests（batch number：20120210）

2.2.2 長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn) 溫條件下，三個(gè)批次的清瘟敗毒顆粒性狀均為棕黃色顆粒；氣微，味苦，微甜。薄層鑒別時(shí)黃連中的鹽酸小檗堿、連翹、梔子苷和菝葜皂苷元均斑點(diǎn)清晰。粒度分別在8.3%、8.5%和8.5%左右，符合規(guī)定，水分含量在3.2%、4.3%和4.0%左右，稍有浮動(dòng)，但在誤差允許范圍內(nèi)。在做溶化性檢查時(shí)，全部溶化，均沒有發(fā)現(xiàn)焦屑等各類異物。雜菌總數(shù)均小于1000個(gè)，約為650個(gè)、640個(gè)和630個(gè)左右，沒有檢出霉菌、致病菌和活螨。

表4 加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)（批號(hào)：20120213）Table 4 Acceleration stability tests（batch number：20120213）

3 討論

3.1 藥材的提取

本方由石膏、黃連、黃芩、地黃、水牛角、梔子、牡丹皮等十四味藥材組成，主要含有鹽酸小檗堿、黃芩苷等有效成分?！对鲇唫钊珪分斜痉接梅橄戎笫鄶?shù)十沸，后下諸藥，犀牛角磨汁和服，因石膏、地黃、水牛角、梔子、連翹、桔梗、赤芍、玄參、牡丹皮、知母和甘草等所含有效成分間不存在相互作用情況，同時(shí)提取，可縮短提取時(shí)間，節(jié)約成本。通過對(duì)《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010年版二部666頁“清瘟敗毒散”及相關(guān)文獻(xiàn)資料的研究進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以提取時(shí)間、提取次數(shù)、加水量為因素，通過對(duì)各個(gè)指標(biāo)的綜合考察，優(yōu)選最佳提取方法。

根據(jù)王志華等［3］以浸膏得率和鹽酸小檗堿含量為指標(biāo)，取黃連單味藥材粗粉10g及復(fù)方藥材240 g（其中黃連10g），分別加10、8、8倍量水，回流提取3次，提取時(shí)間分別為1.5、1.5、1h，合并提取液，濃縮，定容至200mL，測(cè)得浸膏得率和鹽酸小檗堿含量。黃連單提和混提的浸膏得率分別為25.25g／100g生藥和21.04g／100g生藥，鹽酸小檗堿含量分別為2.28%和0.47%，即黃連單提鹽酸小檗堿的含量遠(yuǎn)高于混提的含量，且黃連單提的浸膏得率與水提藥材的浸膏得率也明顯高于混提藥材的浸膏得率。所以對(duì)黃連進(jìn)行單提法進(jìn)行提取。其余十二味藥材用混合提取的方法，以出膏率及出膏百分比篩選出最佳的提取工藝。待各藥材確定最佳的提取工藝后，再對(duì)輔料、輔料用量及濕潤(rùn)劑進(jìn)行研究，最終確定清瘟敗毒顆粒的制備工藝［4］。

3.2 軟材的制備

軟材的制備是顆粒劑制備過程中最重要的步驟，因?yàn)檐洸钠焚|(zhì)的好壞是顆粒劑制劑是否成功的關(guān)鍵［5］。本試驗(yàn)考察了浸膏用量和輔料用量的配比關(guān)系對(duì)軟材的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，浸膏與輔料之比為1∶2時(shí)，得到的軟材濕度大太大，不能順利制粒，浸膏與輔料之比為1∶3時(shí)，軟材符合“握之成團(tuán)，壓之即散”的標(biāo)準(zhǔn)。本試驗(yàn)過程中，所選用制備顆粒的主要輔料為葡萄糖，故在考察浸膏與輔料配比時(shí)，僅考慮它們之間的關(guān)系。葡萄糖分子量較小，性質(zhì)穩(wěn)定，甜度較高，能較好地矯正中藥的苦味，因此在獸藥制備領(lǐng)域中多被選用為輔料。

3.3 中藥穩(wěn)定性影響因素

藥品的穩(wěn)定性除受光照、溫度、濕度等主因素的影響外，像包裝［7］、貯存及運(yùn)輸?shù)葪l件也會(huì)影響藥品的有效成分，進(jìn)而影響藥效；聚酯／鋁／聚乙烯藥品包裝用復(fù)合膜，材料性質(zhì)穩(wěn)定，密封性好，不會(huì)與藥品及發(fā)料發(fā)生任何反應(yīng)。

3.4 中藥穩(wěn)定性測(cè)定指標(biāo)的選擇

以往文獻(xiàn)報(bào)道［6－9］的藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)主要以藥物含量等為考察依據(jù)，未涉及鑒別、微生物限度等考察方法，本試驗(yàn)則將性狀、薄層鑒別、粒度、溶化性、雜菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、致病菌和活螨均作為考察指標(biāo)，對(duì)清瘟敗毒顆粒進(jìn)行全面的指標(biāo)考察。

綜上所述，本研究?jī)?yōu)化了清瘟敗毒顆粒的制備條件，并發(fā)現(xiàn)制備的顆粒在聚酯／鋁／聚工烯藥品包裝用復(fù)合膜的包裝下，藥品穩(wěn)定性良好。

［1］中國(guó)獸藥典委員會(huì).清瘟敗毒散［M］∥中華人民共和國(guó)獸藥典獸藥使用指南中藥卷.北京：農(nóng)業(yè)出版社，2010.

［2］中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，2011.

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［5］李雪晴.扶正健血顆粒制備工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［D］.湖北武漢：湖北中醫(yī)學(xué)院，2007.

［6］徐倩倩.抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑組方篩選及制備［D］.黑龍江哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［7］楊 璐，王 亮，李福杏，等.“加味白頭翁”顆粒劑的制備及穩(wěn)定性考察［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，10（39）：238－241.

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［9］木巴拉克.伊明江，賀冰，迪力努爾.艾合買提.不同包裝材料對(duì)宣肺清熱顆粒劑穩(wěn)定性的影響研究［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，9（32）：1 240－1 246.