鄭會超，黃 新，吳建良，姜俊芳，宋雪梅，蔣永清

（浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，浙江杭州310021）

據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）估計，全世界每年大約有5%～7%的糧食和飼料受霉菌侵蝕而發(fā)生霉變，營養(yǎng)價值降低，嚴(yán)重失去飼用價值。霉菌產(chǎn)生的毒性代謝產(chǎn)物還會使動物發(fā)生慢性或急性中毒，霉菌毒素殘留于動物產(chǎn)品中，通過食物鏈威脅人類健康。飼料中常見且危害較大的霉菌毒素有黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、嘔吐毒素以及伏馬毒素等。浙江省位于長江三角洲地區(qū)，高溫多雨的獨特氣候條件非常利于霉菌生長繁殖，在飼料作物生長或倉貯期間容易受到霉菌毒素的污染［1－2］。當(dāng)前對單胃動物如豬、禽等精飼料中霉菌毒素污染的報道較多，而草食家畜如奶牛、肉牛、肉羊中青粗飼料霉菌毒素殘留鮮見報道［3－4］。筆者從浙江省牛羊飼養(yǎng)量較大的金華、杭州、湖州、寧波等地抽樣采集了代表性青粗飼料樣品，檢測了黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、嘔吐毒素以及伏馬毒素B1的殘留情況，并與國內(nèi)和歐盟的飼料已生標(biāo)準(zhǔn)進行比較分析，以期為廣大草食家畜養(yǎng)殖企業(yè)和飼料生產(chǎn)企業(yè)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2012年6～12月從浙江省金華、杭州、湖州、寧波、嘉興和衢州地區(qū)的奶牛場、肉牛場和湖羊場采集了22份青粗飼料樣品，詳細(xì)采樣情況見表1。所有樣品在65 ℃鼓風(fēng)恒溫烘干后粉碎過1 mm 篩，在－20 ℃冰箱凍存待測霉菌毒素殘留。

1.2 分析方法

采用免疫親和柱凈化－柱后光化學(xué)衍生高效液相色譜法檢測青粗飼料中的黃曲霉毒素，方法的回收率在80%以上，黃曲霉毒素總量的檢出限為1.2 μg／kg。采用進口ELISA 試劑盒檢測玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、嘔吐毒素和伏馬毒素B1。ELISA 試劑盒由新加坡PRIBOLAB 提供，按試劑盒提供的方法進行測定。酶標(biāo)板孔中赭曲霉毒素A濃度高于2μg／kg、伏馬毒素B1濃度高于1μg／kg，玉米赤霉烯酮濃度高于1μg／kg，嘔吐毒素濃度高于20μg／kg視為陽性樣品。

2 結(jié)果與分析

浙江省主要青粗飼料霉菌毒素污染采樣及檢測結(jié)果見表1和表2。青粗飼料樣品中多種霉菌毒素并存的情況較為嚴(yán)重，68.2%的樣品中檢測到3種及以上霉菌毒素殘留，其中鄱陽湖草中5種霉菌毒素并存，野生谷殼中4種霉菌毒素并存。此外，杭州啤酒糟、湖州醬油渣、金華羊草、湖州稻草和嘉興發(fā)酵藥渣中并存2種不同的霉菌毒素，豆腐渣中僅檢出伏馬毒素B1殘留。

浙江省青粗飼料中黃曲霉毒素的檢出率很低，22份檢測樣品中僅在鄱陽湖草中檢出，其中黃曲霉素G2（AFG2）殘留含量3.7μg／kg，黃曲霉毒素B2（AFB2）殘留含量6.2μg／kg，未檢測到黃曲霉毒素B1（AFB1）和黃曲霉毒素G1（AFG1）殘留。目前我國尚未制定青粗飼料樣品霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)，只能參考精料標(biāo)準(zhǔn)。我國飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定以AFB1計，玉米粉，花生餅粕、棉籽餅粕，菜籽餅粕＜50μg／kg；豆粕＜30μg／kg；奶牛精料補充料＜10μg／kg；肉牛精料補充料＜50μg／kg［5］。歐盟，以AFB1計，犢牛和羔羊飼料＜10μg／kg，泌乳奶牛飼料＜5μg／kg，其他牛羊飼料＜50μg／kg［6］。聯(lián)合國糧農(nóng)組織（2003）對世界各國關(guān)于奶牛飼料中黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)整理和分析顯示，多數(shù)國家規(guī)定奶牛飼料中黃曲霉毒素總量須＜20μg／kg［7］。目前我國尚未制定青粗飼料樣品霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)，只能參考精料標(biāo)準(zhǔn)。可見鄱陽湖草中黃曲霉毒素殘留未超出我國及世界上多數(shù)國家對牛羊飼料的限量標(biāo)準(zhǔn)。

表1 浙江省主要青粗飼料中霉菌毒素殘留含量（風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Mycotoxins residual content in forages in Zhejiang（air－dry matter basis）

赭曲霉毒素的檢出率為18.2%，僅從鄱陽湖草、青貯筍殼、啤酒糟和野生谷殼中檢出赭曲霉毒素。我國飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定配合飼料和玉米中赭曲霉毒素殘留須＜100μg／kg［8］。歐盟規(guī)定配合飼料中，豬＜50μg／kg，家禽＜100μg／kg，其他飼料＜250μg／kg［9］?？梢?個陽性樣品的赭曲霉毒素殘留均低于我國及歐盟對牛羊配合飼料赭曲霉毒素殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。

玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和伏馬毒素的檢出率較高，分別為90.9%、72.7%和90.9%。我國飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定配合飼料，玉米中玉米赤霉烯酮含量須＜500μg／kg，限定嘔吐毒素犢牛配合飼料＜1 mg／kg，泌乳期動物配合飼料＜1mg／kg，牛配合飼料＜5 mg／kg，尚未對飼料伏馬毒素殘留進行限定［8－10］。歐盟規(guī)定犢牛、奶牛、綿羊、山羊補充料和完全飼料玉米赤霉烯酮含量須＜500μg／kg，限定嘔吐毒素犢牛、羔羊補充料和完全飼料＜2mg／kg，豬配合飼料＜0.9 mg／kg其他動物＜5 mg／kg，限定伏馬毒素犢牛和羔羊＜20mg／kg，成年反芻動物＜50mg／kg?？梢?，嘔吐毒素的超標(biāo)率較高，壓塊玉米秸、野生谷殼、毛豆稈和金華稻草的嘔吐毒素含量超出我國犢牛和泌乳動物配合飼料限定標(biāo)準(zhǔn)，而玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和伏馬毒素陽性樣品均低于我國及歐盟對牛羊飼料殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

表2 浙江省主要青粗飼料中霉菌毒素殘留匯總Table 2 Total residues of mycotoxins in forages in Zhejiang

3 討論

霉菌毒素在浙江省青粗飼料中的超標(biāo)率不高，人們重點關(guān)注的黃曲霉毒素的檢出率也不高，與荷蘭和捷克研究人員的調(diào)查結(jié)果相似［11－12］。不過浙江省及歐洲國家生鮮牛奶中黃曲霉毒素M1的檢出率和超標(biāo)率并不樂觀［13－14］，提示除了青粗飼料外，還需關(guān)注精飼料黃曲霉毒素污染狀況。浙江省青粗飼料中玉米赤霉烯酮的檢出率很高，玉米赤霉烯酮被微生物降解后，其代謝產(chǎn)物對奶牛的危害更大［15］，提示在草食家畜實際飼養(yǎng)中尚需要密切關(guān)注玉米赤霉烯酮含量。草食家畜能夠依靠瘤胃微生物降解嘔吐毒素、伏馬毒素和赭曲霉毒素，這三種毒素從飼料轉(zhuǎn)移到牛奶的轉(zhuǎn)化率較低［16－18］。壓塊玉米秸、野生谷殼、毛豆稈和金華稻草中嘔吐毒素含量超出我國對犢牛和泌乳動物飼料的限量標(biāo)準(zhǔn)，提示尚需關(guān)注浙江省青粗飼料的嘔吐毒素殘留。伏馬毒素和赭曲霉毒素在浙江省青粗飼料中的殘留量平均值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于飼料衛(wèi)生限定標(biāo)準(zhǔn)，表明浙江省的氣候條件不利于青粗飼料生長及儲存期間產(chǎn)毒煙曲霉和赭曲霉的生長，提示該兩種毒素在浙江省草食家畜生產(chǎn)中的暴露風(fēng)險較低。

綜上，玉米赤霉烯酮是浙江省青粗飼料霉菌毒素的首要風(fēng)險因子，嘔吐毒素次之。青貯玉米是奶牛場的當(dāng)家青粗飼料，占全混合日糧的30%以上；鄱陽湖草中5種霉菌毒素并存；壓塊玉米秸的嘔吐毒素含量超標(biāo)。因此，浙江省青粗飼料需重點關(guān)注青貯玉米、鄱陽湖草及壓塊玉米秸的霉菌毒素殘留。

［1］Nielsen K F，Mogensen J M，Johansen M，et al.Review of secondary metabolites and mycotoxins from the Aspergillus niger group［J］.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2009，395（5）：1 225－1 242.

［2］Pan A D，Wang K Q，Zeng Y，et al.Trends of temperature and precipitation variation in the Yangtze River Delta from 1961to 2006［J］.Transactions of Atmospheric Sciences，2011，34（2）：180－188.

［3］馬美蓉.奶牛場飼料霉菌毒素感染現(xiàn)狀的調(diào)查與分析［J］.家畜生態(tài)學(xué)報，2011，32（6）：95－97.

［4］敖志剛，陳代文.2006－2007年中國飼料及飼料原料霉菌毒素污染調(diào)查報告［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2008，35（1）：152－154.

［5］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB 13078－2001飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001.

［6］European Commission.Directive 2002／32／EC of the European parliament and of the council of 7 May 2002on undesirable substances in animal feed［S］.Official Journal of European Union，2002，L140：10－21.

［7］Food and Agriculture organization of the United Nations.2003年全世界食品和飼料真菌毒素法規(guī).http：／／www.fao.org／docrep／008／y5499c／y5499c00.htm.

［8］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB 13078.2－2006 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)飼料中赭曲霉毒素A 和玉米赤霉烯酮的允許量［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

［9］European Commission.Commission Recommendation of 17 August 2006On the presence of deoxynivalenol，zearalenone，ochratoxin A，T－2and HT－2and fumonisins in products intended for animal feeding（2006／576／EC）［S］.Official Journal of European Union，2006，L 229：7－9.

［10］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB 13078.3－2007 配合飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的允許量［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

［11］Zachariasova M，Dzuman Z，Veprikova Z，et al.Occurrence of multiple mycotoxins in European feedingstuffs，assessment of dietary intake by farm animals.http：／／dx.doi.org／doi：10.1016／j.anifeedsci.2014.02.007.

［12］Driehuis F，Spanjer M C，Scholten J M，et al.Occurrence of mycotoxins in feedstuffs of dairy cows and estimation of total dietary intakes［J］.Journal of Dairy Science，2008，（91）：4 261－4 271.

［13］Xiong J L，Wang Y M，Ma M R，et al.Seasonal variation of aflatoxin M1in raw milk from the Yangtze river delta region of China［J］.Food Control，2013（34）：703－706.

［14］Prandini A，Tansini G，Sigolo S，et al.On the occurrence of aflatoxin M1in milk and dairy products［J］.Food and Chemical Toxicology，2009，（47）：984－991.

［15］張永根.奶牛飼養(yǎng)過程中的物理性投入品對奶牛健康和原料奶質(zhì)量的風(fēng)險［J］.中國乳業(yè)，2011，（110）：32－35.

［16］European Food Safety Authority.Opinion of the Scientific Panel on Contaminants in the Food Chain on a request from the Commission related to Deoxynivalenol（DON）as undesirable substance in animal feed［S］.The EFSA Journal，2004，73：1－41.

［17］European Food Safety Authority.Opinion of the Scientific Panel on Contaminants in the Food Chain on a request from the Commission related to ochratoxin A（OTA）as undesirable substance in animal feed［S］.The EFSA Journal，2004，101：1－36.

［18］European Food Safety Authority.Opinion of the Scientific Panel on Contaminants in the Food Chain on a request from the Commission related to fumonisins as undesirable substances in animal feed［S］.The EFSA Journal，2005，235：1－32.