張 元 文紹敦

（青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系，西寧，810001）

酸脂清膠囊對(duì)尿酸性腎病大鼠腎功能及TNF-α的影響

張 元 文紹敦

（青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)系，西寧，810001）

目的：觀察酸脂清膠囊對(duì)尿酸性腎病大鼠腎功能及TNF-α的影響，探討其作用的機(jī)理。方法：將6周齡SD雄性大鼠分為5組，分別為正常組、模型組、生理鹽水組、酸脂清治療組、別嘌醇治療組。后4組用腺嘌呤、乙胺丁醇造模，成功后分別給予生理鹽水、酸脂清、別嘌醇灌胃給藥，3周后檢測(cè)各組大鼠血中尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA），同時(shí)用酶聯(lián)反應(yīng)法（Elisa法）測(cè)量各組腎臟組織中腫瘤壞死因子α（TNF-α）的含量。結(jié)果：1）造模2周后，與正常組比較，模型組大鼠血中BUN、Cr、UA均明顯升高（P＜0.05），證實(shí)造模成功。2）治療3周后，與生理鹽水組相比，酸脂清治療組、別嘌醇治療組大鼠血中BUN、UA均明顯下降（P＜0.05），酸脂清治療組和別嘌醇治療組Cr均有下降，但只有酸脂清治療組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3）酸脂清治療組和別嘌醇治療組血中BUN、Cr、UA相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4）Elisa法測(cè)定各組TNF-α的濃度，與正常組相比，生理鹽水組TNF-α明顯升高（P＜0.05）；與生理鹽水組相比，酸脂清治療組、別嘌醇治療組TNF-α含量明顯減少（P＜0.05）；5）腎組織病理切片顯示：與模型組相比，酸脂清治療組、別嘌醇治療組尿酸鹽結(jié)晶沉積、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均明顯減少，腎小管擴(kuò)張改善。結(jié)論：酸脂清膠囊能夠降低尿酸性腎病大鼠血中BUN、Cr、UA的含量，減少尿酸鹽結(jié)晶在腎小管中沉積及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，降低TNF-α在腎組織中的含量，從而達(dá)到治療的作用。

酸脂清膠囊；尿酸性腎病；腎功能；腫瘤壞死因子α

尿酸是人體細(xì)胞代謝及飲食中嘌呤代謝的終末產(chǎn)物。痛風(fēng)是由于嘌呤代謝異常和或體內(nèi)尿酸濃度持續(xù)性升高而引起的以關(guān)節(jié)和腎臟損害為主要表現(xiàn)的代謝性疾病，嚴(yán)重者可能發(fā)展為腎功能衰竭而危及生命。尿酸性腎病也稱(chēng)為痛風(fēng)性腎病，是由于尿酸鹽在血中呈現(xiàn)過(guò)飽和狀態(tài)后沉積在腎組織、特別是腎髓質(zhì)和椎體部而導(dǎo)致的慢性間質(zhì)性腎炎[1]。隨著我國(guó)人民生活水平的改善和飲食結(jié)構(gòu)的改變，特別是富含蛋白質(zhì)和嘌呤的食物攝人增加，本病的發(fā)病率也在逐年提高。流行病學(xué)資料顯示痛風(fēng)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢(shì)[2]。由于腎臟既是排泄尿酸的重要器官，也是高尿酸血癥的靶器官，有文獻(xiàn)報(bào)道[3]長(zhǎng)期痛風(fēng)有顯著腎損害者占41%，25%死于腎衰竭，痛風(fēng)尸檢幾乎都有腎損害。酸脂清膠囊是文紹敦教授治療痛風(fēng)的名方，治則以“清熱祛濕，化瘀祛濁”為主，主要藥物有大黃、姜黃、土茯苓。本實(shí)驗(yàn)采用酸脂清膠囊治療尿酸性腎病大鼠，觀察其臨床療效同時(shí)探討其作用機(jī)理，以尋找一種療效好、不良反應(yīng)小、特別是能保護(hù)腎功能的有效的治療方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 44只健康SPF級(jí)雄性SD大鼠，體重（180±20）g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK（甘）2011-0001。飼養(yǎng)于青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房，正常飲食，自由飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 主要藥物與試劑 腺嘌呤，Am resco公司分裝產(chǎn)品，購(gòu)于北京研威恒達(dá)科技有限公司；鹽酸乙胺丁醇片，沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為21022349；別嘌醇片，合肥久聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為34021248；酸脂清膠囊，青海醫(yī)學(xué)院中藥實(shí)驗(yàn)室提供；TNF-αELISA試劑盒，美國(guó)R＆D公司分裝，購(gòu)自北京研威恒達(dá)科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型的建立與分組 將44只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，然后隨機(jī)分為5組，即正常組、模型組、生理鹽水組、酸脂清治療組、別嘌醇治療組。正常組每天給予生理鹽水2 mL灌胃，其余4組以腺嘌呤（200 mg/kg）、乙胺丁醇（250 mg/kg）灌胃給藥造模[4-5]，連續(xù)14 d后，通過(guò)測(cè)量正常組與模型組BUN、Cr、UA的水平來(lái)確定造模成功。然后生理鹽水組每日以生理鹽水2 mL灌胃、酸脂清治療組以酸脂清浸膏以1.83 g/（kg·d）加生理鹽水制成2 mL液體灌胃、別嘌醇治療組[6]以別嘌醇20.833 mg/（kg·d）加生理鹽水制成2 m L液體灌胃，各組均持續(xù)給藥21 d。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè) 模型組造模2周后，生理鹽水組、酸脂清治療組、別嘌醇治療組治療3周后，每組大鼠均按體重腹腔注射20%烏拉坦麻醉，經(jīng)腹腔靜脈采血，檢測(cè)大鼠血BUN、Cr、UA水平。酶聯(lián)反應(yīng)法測(cè)定腎組織中TNF-α的吸光度（OD值）。取腎臟組織，固定，包埋，切片，HE染色，顯微鏡下觀察腎臟組織病理改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05表示為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 正常組大鼠體重增長(zhǎng)明顯，狀態(tài)良好，活動(dòng)自如，體毛光澤；模型組大鼠體重明顯減輕，多尿、多飲、逐漸出現(xiàn)食少，精神萎靡、畏寒蜷縮、活動(dòng)減少，稀便，體毛大片脫落，尾巴濕冷，外陰周?chē)鷿衩F(xiàn)象；酸脂清組和別嘌醇組以上癥狀明顯改善，體重逐漸恢復(fù)，大便成形。

2.2 各組生化檢測(cè)情況及體重、腎重、腎平均重量變化情況 造模2周后，與正常組比較，模型組大鼠血中BUN、Cr、UA均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），體重明顯減輕（P＜0.05），腎平均重量明顯增大（P＜0.05），證實(shí)造模成功。詳見(jiàn)表1。治療后，與生理鹽水組相比，酸脂清治療組、別嘌醇治療組大鼠血中BUN、UA均明顯下降（P＜0.05或P＜0.01），但是其中酸脂清組和別嘌醇組Cr雖均下降，只有酸脂清組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），體重的增加和腎臟平均重量的減輕只有西藥組有意義（P＜0.05）。酸脂清治療組和別嘌醇治療組血中BUN、Cr、UA等相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表2。

表1 造模前后腎功能、體重及腎臟變化的比較

表2 生理鹽水組與治療組腎功能、體重及腎臟變化的比較

2.3 各組TNF-α測(cè)量結(jié)果（OD值表示） 與正常組相比，生理鹽水組TNF-α明顯升高（P＜0.05）；與生理鹽水組相比，酸脂清組、別嘌醇組TNF-α含量明顯減少（P＜0.05），酸脂清、別嘌醇組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組TNF-α在腎組織中OD值的比較

2.4 大鼠腎臟病理改變

2.4.1 肉眼觀 正常組大鼠腎臟呈紅褐色，表面光滑，無(wú)異常表現(xiàn)。模型組腎臟體積明顯增大、充血，顏色變深，表面可見(jiàn)彌漫分散在白色小點(diǎn)，切面皮質(zhì)變薄、髓質(zhì)和錐體內(nèi)可見(jiàn)放射狀白線。酸脂清組和別嘌醇組腎臟顏色明顯變白，體積仍較大，白色小點(diǎn)分布減少。

2.4.2 鏡下觀 顯微鏡下觀察正常大鼠腎組織結(jié)構(gòu)正常，無(wú)尿酸鹽結(jié)晶；模型組腎小球毛細(xì)血管閉鎖、無(wú)充盈，腎小管擴(kuò)張，腎小管可見(jiàn)淡黃色不規(guī)則針狀尿酸鹽結(jié)晶沉積，多分布在近曲小管，同時(shí)伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；生理鹽水組腎小球毛細(xì)血管充盈，部分包曼氏囊擴(kuò)張，腎小管擴(kuò)張，有尿酸鹽結(jié)晶沉積、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；酸脂清組、別嘌醇組尿酸鹽結(jié)晶、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均明顯減少，腎小管擴(kuò)張改善，別嘌醇組腎小管周?chē)馨图?xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖1。

圖1

3 討論

TNF-α是機(jī)體免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子，同時(shí)也被認(rèn)為是炎癥細(xì)胞因子鏈鎖中的第1個(gè)細(xì)胞因子[7]，激活T細(xì)胞，促進(jìn)IL-1、IL-2、IL-6的產(chǎn)生及分泌，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，也可以激活的單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有多種生物活性的多肽細(xì)胞因子，因此與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。同時(shí)TNF-α也是高效的細(xì)胞因子代表，在多數(shù)炎癥、感染和免疫性疾病中細(xì)胞因子的表達(dá)是紊亂的[8]。目前認(rèn)為心、肝、肺、腎是TNF-α的生物合成場(chǎng)所[9-10]，同時(shí)在多種腎臟疾病患者血、尿及腎臟組織中TNF-α水平明顯高于正常[11]，因此它在腎臟疾病的發(fā)病機(jī)制中的作用日益受到重視[12]。而且TNF-α又與尿酸鹽密切相關(guān)。尿酸在血液中物理溶解度很低，高尿酸血癥時(shí)，尿酸鹽結(jié)晶容易析出，沉積于血管壁，損傷血管內(nèi)膜，造成慢性炎性損害，損傷的動(dòng)脈內(nèi)有大量的單核細(xì)胞黏附于內(nèi)膜上，它可釋放TNF-α，使血液中TNF-α水平增加[137]。也有研究表明尿酸鹽本身作為啟動(dòng)白細(xì)胞釋放炎癥因子的始動(dòng)因素[14]，可能不僅引起炎性損傷，還參與炎性損傷的發(fā)生、發(fā)展。同時(shí)尿酸也可刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放TNF -α，TNF-α對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有直接細(xì)胞毒作用，引起內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，促進(jìn)炎性細(xì)胞聚集，最終引起炎癥反應(yīng)的級(jí)聯(lián)放大，形成損傷血管內(nèi)皮[15]。說(shuō)明TNF -α是尿酸性腎病的一個(gè)重要影響因子。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，尿酸性腎病大鼠血中BUN、Cr、UA明顯升高，光鏡下可見(jiàn)腎小管以近曲小管為主有大量尿酸鹽結(jié)晶的沉積、同時(shí)伴有炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，腎組織中TNF-α含量明顯增加。酸脂清藥物治療后，大鼠血中BUN、Cr、UA明顯下降，特別是降Cr水平較別嘌醇組明顯，腎臟病理改變減輕，尿酸鹽沉積減少，腎組織中TNF-α水平降低。由此可見(jiàn)，酸脂清膠囊對(duì)尿酸性腎有治療作用，其機(jī)制與其降低血尿酸，減少尿酸鹽在腎小管沉積，同時(shí)降低腎組織TNF-α的水平，減少相關(guān)的炎性反應(yīng)，從而減輕腎臟損害有關(guān)，從而達(dá)到治療尿酸性腎病的目的。

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（2013-05-24收稿 責(zé)任編輯：徐穎）

Effect of Suanzhiqing Capsule on Renal Function and TNF-αlevel in Nephropathy Ratsw ith Uric Acid

Zhang Yuan，Wen Shaodun
（Department of TCM，Medicine School of Qinghai University，Xining 810001，China）

Objective：To observe the effectand explore themechanism of Suanzhiqing capsule on renal function and TNF-αlevel in Nephropathy Ratswith Uric Acid.Methods：Male SD rats were divided into five groups including normal group，model group，sodium chloride group，suanzhiqing capsule treatment group，and allopurinol treatment group.Nephropathy ratwith uric acid were established by giving adenine and ethambuto.Thenmodel ratswere administered intragastrically with sodium chloride，suanzhiqing capsule，or allopurinol for three weeks.The blood urea nitrogen（BUN），creatinine（Cr），uric acid（UA）in blood and tumor necrosis factor alpha（TNF-α）in renal tissue were determined.Results：（1）Compared with the normal group，the levels of BUN.Cr，and UA in blood in model group significantly increased（P＜0.05）.（2）Compared with the sodium chloride group，the levelsof BUN，and UA in blood in suanzhiqing capsule treatment group and allopurinol treatmentgroup significantly decreased（P＜0.05）.Although the levels of Cr in allopurinol treated group decreased，only in suanzhiqing capsule treated group were significantly.（3）Comparing the levels of BUN.Cr，and UA in suanzhiqing capsule treatment group with those in allopurinol treatment group，there was no significant difference between the two groups（P＞0.05）.（4）The optical density value of TNF-αin renal tissue of the sodium chloride group was significantly higher than that in normalgroup（P＜0.05）.Theoptical density value of TNF-αin renal tissue of suanzhiqing capsule treatmentgroup and allopurinol treatment group were significantly lower than that in sodium chloride group（P＜0.05）.（5）Compared with the model group，uratic crystallization and inflammatory cell infiltration were significantly reduced，and tubular expansion had been relieved in both suanzhiqing capsule treatment group and allopurinol treatmentgroup.Conclusion：Suanzhiqing capsule could reduce the levels of BUN.Cr，and UA in blood of nephropathy ratswith uric acid，decrease uratic crystallization and inflammatory cell infiltration，and lower TNF-αlevel in renal tissue，thus it could have a beneficial effect on uric acid nephropathy rats.

Suanzhiqing capsule；Uric acid nephropathy；SRenal function；Tumor necrosis factor alpha（TNF-α）

R243；R256.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.01.027

2012年度青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中青年教師科研基金團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：2012-KYT-01）

張?jiān)?988—），女，碩士研究生，從事中西醫(yī)結(jié)合代謝性疾病研究，E-mail：748894196＠qq.com