屈 瑋，陳彥光，吳祖強(qiáng)，王 鑫

（合肥工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院，安徽 合肥 230009）

苦瓜提取物抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞脂肪沉積研究

屈 瑋，陳彥光，吳祖強(qiáng)，王 鑫

（合肥工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院，安徽 合肥 230009）

研究表明苦瓜具有一定減肥效果，但其確切分子機(jī)理尚未闡明，因此本實(shí)驗(yàn)研究苦瓜正丁醇提取物抑制脂肪沉積活性及其作用機(jī)制。針對3T3-L1脂肪細(xì)胞，利用噻唑藍(lán)法檢測苦瓜正丁醇提取物對細(xì)胞活性影響；采用油紅O染色檢測苦瓜正丁醇提取物對細(xì)胞脂肪沉積的影響；利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測苦瓜提取物對脂肪沉積轉(zhuǎn)錄因子和脂肪酸代謝關(guān)鍵基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控作用。結(jié)果表明：相對空白對照組，苦瓜提取物能明顯減少3T3-L1細(xì)胞脂肪沉積，抑制轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表達(dá)，對脂肪酸代謝基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表達(dá)抑制明顯（P＜0.05）。總之，苦瓜正丁醇提取物對脂肪沉積具有一定抑制作用，可能通過下調(diào)脂肪沉積相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)起作用。

苦瓜；脂肪沉積；3T3-L1細(xì)胞

肥胖作為一種代謝疾病已成為危害全球公眾健康的主要問題之一，它與高血壓、二型糖尿病、冠心病和中風(fēng)等多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)[1]。治療肥胖的藥物主要有西布曲明（Sibutramine）和奧利司他（Orlistat），上述兩種藥物均具有毒副作用，其中西布曲明可能增加服用者患嚴(yán)重心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，其制劑和原料藥已經(jīng)停止生產(chǎn)和銷售[2]。因此，尋求安全有效的抑制或延緩肥胖發(fā)生、發(fā)展的天然產(chǎn)物，對解決肥胖防治問題具有十分重要的意義。

脂肪沉積被認(rèn)為是肥胖發(fā)展的關(guān)鍵步驟，控制這一步驟將能夠有效地控制肥胖的進(jìn)程[2]。脂肪沉積包括脂肪組織中脂肪細(xì)胞的增殖和前脂肪細(xì)胞分化，其中單個(gè)脂肪細(xì)胞的體積及其分化程度與細(xì)胞內(nèi)甘油三酯積累量密切相關(guān)。脂肪的過度沉積是肥胖病理生理過程的核心[3]。3T3-L1脂肪細(xì)胞是當(dāng)前國際上研究脂肪沉積分子機(jī)制的重要模型。前脂肪細(xì)胞3T3-L1來源于17～19 d Swiss 3T3小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，經(jīng)克隆擴(kuò)增而成，在體外誘導(dǎo)后可分化為成熟的脂肪細(xì)胞，是目前國際上公認(rèn)的研究脂肪沉積過程的細(xì)胞株，廣泛用于天然產(chǎn)物抗肥胖活性研究[4]。

苦瓜（Momordica charantia L.）為葫蘆科苦瓜屬植物，是一種廣為種植的常用蔬菜，富含三萜類化合物、甾體、生物堿、多酚等多類活性次生代謝產(chǎn)物[5]。已有研究表明苦瓜具有減肥作用，苦瓜能夠有效抑制高脂飲食小鼠體質(zhì)量的增加[6]；減少體內(nèi)脂肪組織的質(zhì)量和甘油三酯含量[7]；改善肥胖引起的胰島素抵抗[8-9]；苦瓜提取物能夠抑制肥胖大鼠內(nèi)臟脂肪聚積和附睪脂肪細(xì)胞肥大起到減肥作用[10-11]；苦瓜還可以降低肥胖小鼠脂肪組織中巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞的募集，減少脂肪組織分泌炎性因子，從而降低脂肪 組織和系統(tǒng)炎性[12-13]?？喙咸崛∥锟梢砸种?T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖、降低脂肪細(xì)胞中甘油三酯含量[14]，但是苦瓜抑制脂肪沉積作用機(jī)理尚需進(jìn)一步確認(rèn)和完善。因此，本研究利用苦瓜的提取物，研究其對3T3-L1細(xì)胞脂肪沉積相關(guān)基因的調(diào)控作用，為基于苦瓜的抗肥胖功能食品開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

苦瓜購買于合肥周谷堆蔬菜批發(fā)市場，樣本經(jīng)安徽大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院周忠澤教授鑒定；小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞株來源于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心。

胎牛血清 杭州四季青生物工程材料有限公司；Dulbecco’s Modified Eagle Medium（DMEM）高糖培養(yǎng)基、四甲基偶氮唑藍(lán) 美國Sigma公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒美國Invitrogen公司；Trizol試劑盒、RT-PCR試劑盒 寶生物工程（大連）有限公司；C/EBPα、PPARγ、SREBP-1c、GLUT4、ACC1、Fasn、AP2、LPL和β-actin引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；其他試劑為分析純。

Forma 3111 CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 美國熱電公司；MyiQ2 Real-time PCR儀 美國伯樂公司；TS100-F倒置熒光顯微鏡 日本尼康公司。

1.2 方法

1.2.1 苦瓜提取物制備

將苦瓜冷凍干燥后粉碎，使用乙醇萃取3次，合并乙醇提取液，然后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，將正丁醇相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到苦瓜正丁醇提取物[8]。

1.2.2 3T3-L前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)

將3T3-L1前脂肪細(xì)胞置于含10%體積分?jǐn)?shù)胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基（25 mmol/L）中，37℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2飽和濕度，1%雙抗（80 U/mL青霉素，0.08 mg/mL鏈霉素）條件培養(yǎng)，長滿80%時(shí)傳代，選取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 細(xì)胞活力檢測

采用噻唑藍(lán)法測定細(xì)胞活力。取3T3-L1前脂肪細(xì)胞按照5×103個(gè)/mL接種于96孔板，100 ?L/孔，培養(yǎng)12 h后分別加入不同質(zhì)量濃度的苦瓜提取物溶液（0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL），連續(xù)培養(yǎng)48 h后加入20 ?L 5 mg/mL的噻唑藍(lán)培養(yǎng)液，培養(yǎng)4 h后將培養(yǎng)液吸干，每孔加入200 ?L二甲基亞砜，振蕩10 min溶解紫色結(jié)晶，然后用酶標(biāo)儀在550 nm波長處測定光密度值（以650 nm為參考波長）[15]。

1.2.4 苦瓜提取物對3T3-Ll前脂肪細(xì)胞分化的影響

將3T3-L1前脂肪細(xì)胞接種于24孔板，使用DMEM高糖培養(yǎng)基（含10%體積分?jǐn)?shù)胎牛血清）培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞完全融合后，加入胰島素分化誘導(dǎo)劑（10 ?g/mL胰島素、0.5 mol/L 3-異丁基1-甲基黃磦呤和1 μmol/L 地塞米松）誘導(dǎo)48 h；然后更換DMEM高糖培養(yǎng)液（含10 ?g/mL胰島素）培養(yǎng)48 h；隨后用DMEM高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2次，每次48 h。自誘導(dǎo)開始，實(shí)驗(yàn)組加入不同質(zhì)量濃度（0.2、0.4 mg/mL）苦瓜提取物。最后1 d將細(xì)胞使用4 g/100 mL多聚甲醛固定后，使用油紅O染色觀察胞漿中脂肪的聚集，染色后觀察拍照；并用無水乙醇洗出油紅O，于脫色搖床搖晃5 min。每孔吸出后加入96孔板中，用酶標(biāo)儀在510 nm波長處測定光密度值，計(jì)算分化后脂肪細(xì)胞甘油三酯相對含量[14]。

1.2.5 RNA提取和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real time-polymerase chain reaction，RT-PCR）

收集不同質(zhì)量濃度苦瓜提取物處理8d后的3T3-L1細(xì)胞，使用RNAiso Plus試劑盒提取其總RNA，合成第一鏈cDNA，然后取合成產(chǎn)物進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)。使用β-actin作為內(nèi)參基因，利用比較Ct法分析基因表達(dá)，選取空白對照組表達(dá)量為1，相對表達(dá)量表示為其余喂養(yǎng)條件下表達(dá)量與其比值百分比。3T3-L1細(xì)胞測定基因包括：C/EBPα基因，上下游引物分別是：5’-CAAGAACAGCAACGAGTACCG-3’和5’-G T C AC T G G T C A AC T C C AG C AC-3’；PPARγ基因：5’-GCATGGTGCCTTCGCTGA-3’和5’-TGGCATCTCTGTGTCAACCATG-3’；SREBP-1c基因：5’-GGAGCCATGGATTGCACATT-3’和5’-GGCCCGGGAAGTCACTGT-3’；GLUT4基因：5’-GTGACTGGAACACTGGTCCTA-3’和5’-C C AG C C AC G T T G C AT T G TAG-3’；A C C 1基因：5’-ATCCAGGCCATGTTGAGACG-3’和5’-AGATGTGCTGGGTCATGTGG-3’；Fasn基因：5’-GCTGGCATTCGTGATGGAGTCGT-3’和5’-AGGCCACCAGTGATGATGTAACTCT-3’；AP2基因：5’-AAGGTGAAGAGCATCATAACCT-3’和5’-TCACGCCTTTCATAACACATTCC-3’；LPL基因：5’-TGTGTCTTCAGGGGTCCTTAG-3’和5’-GGGAGTTTGGCTCCAGAGTTT-3’。β-actin基因上下游引物分別是5’-GACATGGAGAAAATCTGGCA-3’和5’-AATGTCACGCACGATTTCCC-3’。

1.3 數(shù)據(jù)分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0分析，所得數(shù)據(jù)采用±s表示，采用單項(xiàng)方差分析，鄧肯氏多重檢驗(yàn)用來確定數(shù)據(jù)間的顯著性差異，顯著水平設(shè)定為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦瓜提取物抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞生長

圖1 苦瓜提取物對3T3-L1前脂肪細(xì)胞活力影響Fig.1 Cytotoxic effect of bitter melon extracts on 3T3-L1 cells

如圖1所示，苦瓜提取物對3T3-L1前脂肪細(xì)胞有明顯抑制增殖作用，隨著提取物質(zhì)量濃度的升高（0.1～0.8 mg/mL），其抑制細(xì)胞能力增強(qiáng)，劑量效應(yīng)關(guān)系明顯；0.2 mg/mL正丁醇提取物處理組細(xì)胞存活率為79.2%，0.4 mg/mL質(zhì)量濃度時(shí)存活率為53.2%，與空白對照組相比差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）；其中IC50劑量是（0.54±0.02）mg/mL；因而選擇0.2、0.4 mg/mL兩個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

2.2 苦瓜提取物抑制3T3-L1細(xì)胞分化

3T3-L1細(xì)胞在分化成熟后會在細(xì)胞內(nèi)聚集大量脂滴，油紅O染色可以直觀反應(yīng)脂肪細(xì)胞的分化程度。由圖2可知，與空白對照組相比，苦瓜提取物處理可以明顯抑制脂肪細(xì)胞的分化，成熟的脂肪細(xì)胞中油紅O染色的脂滴減少顯著。對脂肪細(xì)胞的油紅O染料定量結(jié)果表明（圖3），苦瓜處理組可以顯著減少3T3-L1細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量（P＜0.05），其中0.2 mg/mL苦瓜提取物處理組細(xì)胞脂肪含量只有空白對照組的57.1%。以上結(jié)果表明苦瓜提取物顯著抑制3T3-L1細(xì)胞分化，且其抑制作用不是細(xì)胞毒性引起的。

圖2 苦瓜提取物對3T3-L1脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響（×100）Fig.2 Morphological micrographs of 3T3-L1 adipocytes after incubation with bitter melon extracts (× 100)

圖3 不同質(zhì)量濃度苦瓜提取物對3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的影響Fig.3 Effect of different concentrations of bitter melon extracts on differentiation of 3T3-L1 adipocytes

2.3 苦瓜提取物對3T3-L1細(xì)胞脂肪沉積相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控

圖4 苦瓜提取物對3T3-L1細(xì)胞中脂肪沉積相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因表達(dá)的影響Fig.4 Effects of treatment with bitter melon extracts on mRNA expression of genes associated with transcriptional regulation during differentiation of 3T3-L1 adipocytes

利用RT-PCR，檢測苦瓜提取物處理對3T3-L1細(xì)胞脂肪沉積相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)作用。如圖4所示，C/EBPα和PPARγ是前脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子；苦瓜正丁醇提取物可以顯著下調(diào)兩種基因mRNA表達(dá)量，其中0.2 mg/mL苦瓜提取物處理組分別下降為空白對照組的16%和42%，差異顯著（P＜0.05）?？喙咸崛∥镞€可以顯著降低SREBP-1c基因表達(dá)，其中0.2 mg/mL苦瓜提取物處理組下降為空白對照組的8%，差異顯著（P＜0.05）。

2.4 苦瓜提取物對3T3-L1細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)基因的調(diào)控

圖5 苦瓜提取物對3T3-L1細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.5 Effects of treatment with bitter melon extracts on mRNA expression of genes associated with lipid metabolism during differentiation of 3T3-L1 adipocytes

如圖5所示，與空白對照組相比，不同質(zhì)量濃度苦瓜提取物處理均可顯著下調(diào)細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)，差異顯著（P＜0.05）。其中0.4 mg/mL苦瓜提取物處理組對脂肪酸合成基因GLUT4（為空白對照組8%）、ACC1（為空白對照組13%）和Fasn（為空白對照組21%）的mRNA表達(dá)抑制明顯；對脂肪酸吸收基因AP2（為空白對照組11%）和LPL（為空白對照組14%）下調(diào)顯著。通過抑制脂肪酸合成基因表達(dá)，減少脂肪的形成；同時(shí)，抑制脂肪酸吸收關(guān)鍵基因AP2和LPL表達(dá)可以減少機(jī)體對飲食來源的脂肪酸的吸收。

3 討 論

近年來研究表明，苦瓜具有明顯減肥功效，其中正丁醇相提取物具有抑制脂肪沉積活性?？喙险〈继崛∥镏饕钚猿煞质侨祁惢衔?，而三萜類化合物具有抗炎、抗糖尿病、抗肥胖、抗氧化、抗菌等生物和藥理活性[16]。本研究中，苦瓜正丁醇提取物主要含有各種三萜類化合物[11]，它可以顯著降低3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖；并顯著減少分化的脂肪細(xì)胞中脂肪沉積，降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量。脂肪沉積包括脂肪組織中脂肪細(xì)胞的增殖和前脂肪細(xì)胞分化，抑制脂肪沉積可以有效減少細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量，起到減肥的效果[2]。Popovich等[14]流式細(xì)胞術(shù)研究表明苦瓜正丁醇提取物能將3T3-L1前脂肪細(xì)胞阻滯在G2/M期，從而抑制脂肪沉積；而苦瓜種子提取物可以抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和減少脂肪細(xì)胞中的脂肪沉積[17]；Nerurkar等[18]證實(shí)苦瓜汁可以顯著降低人脂肪細(xì)胞中脂肪含量。

在3T3-L1細(xì)胞分化研究已發(fā)現(xiàn)，脂肪沉積是一個(gè)高度精細(xì)的調(diào)控過程，多種轉(zhuǎn)錄因子（如C/EBPα、PPARγ、SREBP-1c等）和脂質(zhì)代謝蛋白（如Fasn、ACC1、GLUT4、LPL和AP2等）[3,18]在其中發(fā)揮重要的作用。其中C/EBPα和PPARγ的過表達(dá)可以誘導(dǎo)并加快脂肪細(xì)胞分化，而SREBP-1c在前脂肪細(xì)胞分化早期發(fā)揮重要作用[3]。本研究中，苦瓜正丁醇提取物可以顯著抑制脂肪細(xì)胞中C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表達(dá)，從而一定程度抑制了前脂肪細(xì)胞的分化；而Popovich等[14]研究表明PPARγ基因表達(dá)下調(diào)可能引起3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪沉積減少。Fasn、ACC1、GLUT4和LPL是脂肪酸合成途徑中關(guān)鍵酶，在脂肪沉積中發(fā)揮了重要作用[19]，石榴皮提取物可以通過抑制FAS酶活力而起到減肥效果[20]。本研究結(jié)果表明，苦瓜正丁醇提取物在mRNA水平對Fasn、ACC1和GLUT4表達(dá)下調(diào)顯著，從而顯著減少細(xì)胞內(nèi)三酰甘油脂滴生成；同時(shí)抑制脂肪酸吸收關(guān)鍵基因AP2和LPL表達(dá)，從而減少細(xì)胞對外界環(huán)境中脂肪酸的吸收。

總之，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明苦瓜正丁醇提取物具有一定減肥效果?？喙险〈继崛∥锬軌蝻@著抑制3T3-L1細(xì)胞分化，減少細(xì)胞脂肪沉積，可能通過減少轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表達(dá)量，下調(diào)脂肪酸代謝基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表達(dá)實(shí)現(xiàn)。因而推測苦瓜正丁醇提取物通過調(diào)節(jié)脂肪酸代謝途徑相關(guān)基因和轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)，從而抑制脂肪沉積，同時(shí)提示苦瓜在肥胖的預(yù)防治療中具有潛在的價(jià)值。

[1] POPKIN B M, DOAK C M. The obesity epidemic is a worldwide phenomenon[J]. Nutrition Reviews, 1998, 56(4): 106-114.

[2] ROSEN E D, SPIEGELMAN B M. Adipocytes as regulators of energy balance and glucose homeostasis[J]. Nature, 2006, 444: 847-853.

[3] LEFTEROVA M I, LAZAR M A. New developments in adipogenesis[J]. Trends in Endocrinology & Metabolism, 2009, 20(3): 107-114.

[4] 蔡教英, 劉姚, 王文君, 等. 3T3-L1前脂肪細(xì)胞在功能性成分評價(jià)中的應(yīng)用[J]. 食品科學(xué), 2011, 32(21): 301-305.

[5] 陳敬鑫, 張子沛, 羅金鳳, 等. 苦瓜保健功能的研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(1): 271-275.

[6] CHAN L L Y, CHEN Qixuan, GO A G G, et al. Reduced adiposity in bitter melon (Momordica charantia) fed rats is associated with increased lipid oxidative enzyme activities and uncoupling protein expression[J]. The Journal of Nutrition, 2005, 135(11): 2517-2523.

[7] HUANG H L, HONG Y W, WONG Y H, et al.Bitter melon (Momordica charantia L.) inhibits adipocyte hypertrophy and downregulates lipogenic gene expression in adipose tissue of diet-induced obese rats[J]. British Journal of Nutrition, 2008, 99(2): 230-239.

[8] TAN M J, YE J M, TURMER N, et al. Antidiabetic activities of triterpenoids isolated from bitter melon associated with activation of the AMPK pathway[J]. Chemistry & Biology, 2008, 15(3): 263-273.

[9] 董英, 錢希文, 白娟, 等. 苦瓜改善胰島素抵抗功能與作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(21): 369-374.

[10] 楊靜玉, 王春明, 侯悅, 等. 苦瓜乙醇提取物對肥胖大鼠糖代謝和內(nèi)臟脂肪的影響[J]. 中草藥, 2012, 43(10): 2002-2008.

[11] 曾珂, 吳曉駿, 曹家慶, 等. 苦瓜提取物對高脂飼料誘導(dǎo)肥胖大鼠的減肥作用[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 29(6): 473-478.

[12] 鮑斌, 陳彥光, 劉健. 苦瓜降低脂肪組織炎性改善肥胖小鼠糖脂代謝紊亂[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(15): 246-251.

[13] BAO B, CHEN Y G, ZHANG L, et al. Momordicacharantia (bitter melon) reduces obesity-associated macrophage and mast cell infiltration as well as inflammatory cytokine expression in adipose tissues[J]. PLoS ONE, 2013, 8(12): e84075.

[14] POPOVICH D G, LI L, ZHANG W. Bitter melon (Momordica charantia)triterpenoid extract reduces preadipocyte viability, lipid accumulation and adiponectin expression in 3T3-L1 cells[J]. Food and Chemical Toxicology, 2010, 48(6): 1619-1626.

[15] ZHANG W, POPOVICH D G. Effect of soyasapogenol A and soyasapogenol B concentrated extracts on HEP-G2 cell proliferation and apoptosis[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(8): 2603-2608.

[16] DINDA B, DEBNATH S, MOHANTA B C, et al. Naturally occurring triterpenoidsaponins[J]. Chemistry & Biodiversity, 2010, 7(10): 2327-2580.

[17] POPOVICH D G, LEE Y Y, LI L, et al. Momordica charantia seed extract reduces pre-adipocyte viability, affects lactate dehydrogenase release, and lipid accumulation in 3T3-L1 cells[J]. Journal of Medicinal Food, 2011, 14(3): 201-208.

[18] NERURKAR P V, LEE Y K, NERURKAR V R. Momordica charantia(bitter melon) inhibits primary human adipocyte differentiation by modulating adipogenic genes[J]. BMC Complementary and Alternative Medicine, 2010, 10(1): 34-44.

[19] WAKIL S J, ABU-ELHEIGA L A. Fatty acid metabolism: target for metabolic syndrome[J]. Journal of Lipid Research, 2009, 50(Suppl 1): 138-143.

[20] DAN W, MA X F, TIAN W X. Pomegranate husk extract, punicalagin and ellagic acid inhibit fatty acid synthase and adipogenesis of 3T3-L1 adipocyte[J]. Journal of Functional Foods, 2013, 5(2): 633-641.

Anti-adipogenic Effects of Bitter Melon Extracts in 3T3-L1 Adipocytes

QU Wei, CHEN Yan-guang, WU Zu-qiang, WANG Xin
(School of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China)

Bitter melon (Momordica charantia) has been shown to ameliorate high-fat diet-induced obesity, but the underlying molecular mechanisms are still unknown. The objective of this study was to elucidate the effect of bitter melon extracts on adipogenesis in 3T3-L1 adipocytes. MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay was used to measure cell viability; Oil red O staining and spectrometric determination were carried out to investigate the effect of bitter melon extracts on adipocyte differentiation.The mRNA expression levels of adipogenic genes were measured by real time-polymerase chain reaction (RT-PCR). The results revealed that bitter melon extracts markedly inhibited lipid accumulation. The n-butanol fraction blocked the expression of adipogenic transcription factors, including peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARγ), ccaat-enhancer-binding protein-alpha (C/EBPα) and sterol regulatory element-binding protein-1c (SREBP-1c) at the mRNA level. Moreover, the mRNA levels of 5 key lipogenic enzymes including glucose transporte r-4 (GLUT4), acetyl-CoA carboxylase (ACC1) fatty acid synthase (Fasn), adipocyte protein 2 (AP2) and lipoprotein lipase (LPL) were down-regulated. These results indicate that the n-butanol fraction of bitter melon suppresses adipocyte differentiation and lipid accumulation through inhibiting the transcription of adipogenic genes and may have applications for the treatment of obesity.

bitter melon; adipogenesis; 3T3-L1 adipocytes

TS201.4

A

1002-6630（2014）05-0188-05

10.7506/spkx1002-6630-201405037

2013-05-16

教育部高等學(xué)校博士點(diǎn)新教師類專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目（20110111120025）；安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（KJ2011A214）

屈瑋（1979—），男，講師，博士，研究方向?yàn)楣δ苄允称?。E-mail：quweiok@126.com