普 毅白圓圓雷 金孫 立

1.個(gè)舊市疾病預(yù)防控制中心，云南個(gè)舊 661000；2.個(gè)舊市第三人民醫(yī)院，云南個(gè)舊 661000

結(jié)核感染仍是威脅全世界人類健康的重要疾病，雖然我國(guó)公共衛(wèi)生發(fā)展迅速，疫苗接種率較高，但近年來(lái)發(fā)生率又呈現(xiàn)反彈趨勢(shì)[1]，每年新增病例約占世界的15%，位居第二，其中兒童仍是結(jié)核?。═B）的主體人群[2]。目前，兒童結(jié)核發(fā)病初期診斷仍存在一定的困難，痰菌陽(yáng)性率較低，肺外結(jié)核細(xì)菌檢查的陽(yáng)性率更低[3]。本文通過(guò)對(duì)結(jié)核抗體檢測(cè)在小兒結(jié)核病診斷中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析，旨在探討其在小兒肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值及優(yōu)勢(shì)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本地區(qū)2012年3月—2013年3月收治的疑似結(jié)核病患兒患48例為觀察組，其中男21例，女27例，年齡6個(gè)月～11歲，平均5.7歲，肺結(jié)核29例，肺外結(jié)核19例。所有患兒的臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查均符合結(jié)核感染的標(biāo)準(zhǔn)[4]。另以同期入院的非結(jié)核病患兒35例為對(duì)照組，男18例，女17例，年齡8至14歲，平均6.2歲，兩組間基本資料具有可比性（P>0.05）。

1.2 方法

所有患兒入院后均接受體液標(biāo)本涂片、卡介菌純化蛋白衍生物和結(jié)核抗體檢測(cè)，體液涂片參照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)格》完成：采集患者5 mL痰液加入5 mL消化液，充分混勻后消化5～8 min，轉(zhuǎn)移至試管內(nèi)并加入蒸餾水10 mL，以轉(zhuǎn)速為3000 r/min條件下離心10 min（Anke TDL-5-A型低速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠），棄上清，留沉渣0.2ml混勻后完成涂片，并以萋-尼（Ziehl-Neelsen）染色。PPD試驗(yàn)：采用左前臂掌側(cè)中下1/3處皮內(nèi)注射 PPD 0.1 mL（成都生物制品研究所），含PPD 5IU，于 72h后觀察，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：硬結(jié)直徑大于10 mm；結(jié)核抗體檢測(cè)：按照結(jié)核分枝桿菌膠體金法原理，采用結(jié)核抗體試劑盒（上海奧普生物醫(yī)藥有限公司，規(guī)格：20人/盒）進(jìn)行檢測(cè)，操作方法：①在反應(yīng)板中各孔內(nèi)加入2 mL封閉液，等待薄膜吸入；②取患者40 mL采集受試者血清，加入反應(yīng)孔中，等待薄膜吸入；③ 在反應(yīng)孔中加入6滴洗活液，等待薄膜吸入；④加入2滴金標(biāo)液，等待薄膜吸入；⑤加入6滴洗滌液，等待薄膜吸收，并目測(cè)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果比較

三種方法在兩組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)核病患兒診斷方面，三種方法間比較，以PPD法陽(yáng)性率最高，涂片法最低，PPD法和結(jié)核抗體法陽(yáng)性率差異不顯著（χ2=3.49，P>0.05），但均顯著高于涂片法（χ2=13.81和 5.32，P<0.05），非結(jié)核病患兒中，涂片法和結(jié)核抗體法的特異度均為100%，而PPD特異度僅為 77.1%，差異具有顯著性（P<0.01），見(jiàn)表 1。

表1 三種方法檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 不同類型結(jié)核檢測(cè)結(jié)果比較

涂片法肺結(jié)核的陽(yáng)性率顯著高于肺外結(jié)核（P<0.05），而PPD法和結(jié)核抗體法在肺結(jié)核和肺外結(jié)核的陽(yáng)性率方面差異均不顯著（P>0.05），見(jiàn)表 2。

表2 不同類型結(jié)核檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

近年來(lái)，結(jié)核病的發(fā)病率呈抬頭趨勢(shì)，尤其是兒童免疫力較低，更易感染。傳統(tǒng)的結(jié)核感染診斷金標(biāo)準(zhǔn)主要依賴于體液涂片中結(jié)核桿菌的發(fā)現(xiàn)，輔以影像學(xué)等檢查確診，可用于結(jié)核病的早期診斷。但由于兒童呼吸系統(tǒng)發(fā)育不完善，結(jié)核肺內(nèi)感染多見(jiàn)于肺內(nèi)通氣較好，且膨脹度高的部位，加之咳痰困難，因而痰液中排菌率低[3]，均不利于診斷的早期完成。

近年來(lái)，小兒結(jié)核感染的早期診斷困難已經(jīng)受到學(xué)界的普遍關(guān)注，相關(guān)的生物工程技術(shù)也陸續(xù)引入該領(lǐng)域，但均存在著一定的陽(yáng)性率低，或假陽(yáng)性率高的問(wèn)題。PPD技術(shù)不僅可用于卡介苗免疫效果的評(píng)價(jià)，也逐漸應(yīng)用于兒童潛伏感染的診斷，其陰性可在排除免疫因素外，作為機(jī)體未受到人工或自然感染的佐證，多用于潛伏感染的排查[5]，本研究也發(fā)現(xiàn)結(jié)核患兒PPD陽(yáng)性率高達(dá)68.8%，與國(guó)內(nèi)報(bào)道相近，但與結(jié)核抗體比較，差異不顯著（P>0.05）但均高于涂片法，可能與兒童體液中結(jié)核活菌少有關(guān)。同時(shí)也有報(bào)道表明雖然PPD方法靈敏，但影響因素較多，10%的患兒對(duì)其無(wú)應(yīng)答[5]，且操作過(guò)程中部分患兒對(duì)其易產(chǎn)生不良反應(yīng)，這也抑制了其使用。結(jié)核抗體研究始于1898年，作為結(jié)核感染的輔助診斷手段至今已有上百年的歷史，人感染結(jié)核菌后，即會(huì)有免疫應(yīng)答，T淋巴細(xì)胞識(shí)別后，特異性的表達(dá)抗原，因而不受感染部位和活菌排出的影響，而且用于抗體檢測(cè)的新方法也不斷涌現(xiàn)[3-4]。黃紹梅等[3]報(bào)道表明與PPD法相比，結(jié)核抗體檢測(cè)可有效區(qū)分結(jié)核菌感染與、卡介苗注射以及其他分枝桿菌引發(fā)的特異性抗體表達(dá)，因而假陽(yáng)性率較低。本組結(jié)果也表明在非結(jié)核病患者診斷時(shí)，結(jié)核抗體法特異度高達(dá)100%，顯著高于PPD法77.1%，這與國(guó)內(nèi)報(bào)道相近[6]，提示結(jié)核抗體法可作為可靠的診斷依據(jù)。此外，結(jié)核感染部位也是限制診斷的重要因素，雖然涂片法和影像學(xué)診斷更為直接，但由于小兒肺外結(jié)核的體液獲取更為困難，也限制了診斷的完成，本研究結(jié)果表明，涂片法在肺結(jié)核的陽(yáng)性率顯著高于肺外結(jié)核，而結(jié)核抗體法和PPD法在肺結(jié)核和肺外結(jié)核的診斷方面則無(wú)差別，提示體液應(yīng)答不受感染部位的影響，因而結(jié)核抗體法具有較為穩(wěn)定的診斷效果，更適于肺外結(jié)核的無(wú)創(chuàng)診斷，這與李曉非等[2]報(bào)道基本一致。

總之，結(jié)核抗體檢測(cè)、涂片法和PPD檢測(cè)在結(jié)核病診斷中各有特色，其中結(jié)核抗體檢測(cè)尤其適于作為兒童、肺外結(jié)核及無(wú)痰患者的快速輔助診斷手段。

[1]曾永學(xué).肺結(jié)核的影像診斷及活動(dòng)性評(píng)價(jià) [J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2013,29（5）：751-752.

[2]李曉非，李冬玲，施巧霞，等.三種檢測(cè)方法對(duì)結(jié)核病診斷價(jià)值的比較研究[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2008,15（4）：451-452.

[3]黃紹梅，邱薇，許柳清.蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核抗體在兒童結(jié)核病中的診斷價(jià)值[J].廣東醫(yī)學(xué)，2012,33（16）：2421-2422.

[4]李瑞，劉繼賢，包麗麗，等.檢測(cè)分泌r-干擾素T細(xì)胞對(duì)診斷兒童結(jié)核的意義[J].醫(yī)技與臨床，2013,17（10）：80-83.

[5]周亞玲，鄭梅，鄭躍杰.深圳市553例門診兒童PPD試驗(yàn)反應(yīng)分析[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008,30（17）：1676-1677.

[6]杜正強(qiáng).結(jié)核抗體檢測(cè)在32例小兒結(jié)核病診斷中的臨床意義分析[J].山西醫(yī)藥雜志，2013,42（5）：574-575.