王劍 曲百友 馬超 韓耀東 劉通

調(diào)查報(bào)告

鄒平地區(qū)豬偽狂犬病PCR檢測及流行病學(xué)調(diào)查

王劍 曲百友 馬超 韓耀東 劉通

（山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）（山東省濱州市畜牧獸醫(yī)局）

鄒平縣位于山東省中部偏北，西北臨黃河。近年來，畜牧業(yè)飛速發(fā)展。目前存欄生豬40.76萬頭。隨著存欄數(shù)發(fā)展，新生豬死亡率，豬呼吸道疾病越發(fā)難以控制。選取山東省鄒平縣地區(qū)9家豬場，每家豬場抽取母豬，后備母豬，仔豬各15份血清樣品進(jìn)行偽狂犬PCR診斷檢測。檢測結(jié)果：母豬感染率33%，后備母豬感染率18% ，仔豬感染率24%，總體感染率25%。

偽狂犬病(PR)是由偽狂犬病毒(PRV)引起的一種傳染病。能夠引起多種家畜和野生動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢(豬除外)、及腦脊髓炎為主要癥狀的一種傳染病。目前世界上有40多個(gè)國家都有本病報(bào)道，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，中國已有20多個(gè)省、市流行過本病，中國許多省市豬場呈爆發(fā)流行趨勢。種豬感染偽狂犬病，主要表現(xiàn)為繁殖障礙，新生仔豬死亡率可達(dá)100%。隨著規(guī)?；i場飼養(yǎng)密度和規(guī)?；潭鹊奶岣?，豬的呼吸道病日趨嚴(yán)重，成年豬感染偽狂犬病雖然不表現(xiàn)臨床癥狀，但偽狂犬病病毒會(huì)引發(fā)呼吸道病或造成免疫抑制，因而仍然是規(guī)模化豬場最嚴(yán)重的傳染病之一[1, 2]。此次調(diào)查采用PCR檢測方法，對(duì)鄒平縣9家豬場405份血樣進(jìn)行提取擴(kuò)增。

1 材料和方法

1.1 樣品

選擇當(dāng)?shù)?個(gè)規(guī)?；i場進(jìn)行耳靜脈采血，共取得405份血清樣品。其中母豬、后備母豬、仔豬各135份。

1.2 主要試劑及儀器

離心吸附柱法病毒DNA提取試劑盒購自世紀(jì)元亨。即用型PCR混合液PCR MIX 購于北京佳蘭生物。上游引物：5’~CAGGAGGACGAGCTGGGGCT~3’，下游引物：5’~GTCCACGCCCCGCTTGAAGCT~3’。引物由生工生物合成。染色劑使用GelRed染色。PCR儀使用晶格科學(xué)儀器T960。

1.3 方法

1.3.1 提取模板DNA 按試劑盒說明取血清100ul,加入消化液及蛋白酶K水浴1h。加入300ulDNA結(jié)合液10000rpm離心30s。加入500ulDNA洗滌液10000rpm洗滌兩次。洗脫離心得模板DNA。

1.3.2 PCR擴(kuò)增 每份總體積為20ul.PCR MIX10ul,引物2ul，模板2ul,超純水6ul。按擴(kuò)増條件為:94℃變性3min，進(jìn)入循環(huán)。94℃60s→65℃60s→72℃60s，40個(gè)循環(huán)后72℃延伸5min。

1.3.3 電泳 1%的瓊脂糖TAE電泳緩沖液中電泳。

2 結(jié)果

2.1 樣品電泳圖

見附圖。

2.2 各類豬感染率

目的基因217bp。從左到右依次為DL2000 DNA MARKER，標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品，樣品1~7。其中樣品1，3，5，7為陽性樣品。(見附表)。檢測的9個(gè)場內(nèi)僅有1個(gè)場沒有出現(xiàn)陽性樣品?？傮w陽性率25%。

附圖 PCR檢測結(jié)果

附表 各類豬感染數(shù)量及感染率(頭、%)

項(xiàng)目母豬后備母豬仔豬總體 感染數(shù)量452432101 感染率33.317.823.724.9

3 結(jié)論

豬偽狂犬病是當(dāng)?shù)刎i場主要威脅之一。出現(xiàn)的氣喘，死胎等癥狀很可能與帶偽狂犬病毒存在很大關(guān)系。母豬陽性率>仔豬陽性率>后備母豬陽性率。帶毒母豬作為重要傳染源之一，很多仔豬存在垂直傳播或者出生后不久被感染。隱性感染帶毒豬與健康豬共存，缺乏有效的隔離檢疫是造成豬偽狂犬病持續(xù)蔓延的原因之一。

[1] 楊睿, 翟少欽, 王孝友等. 重慶地區(qū)豬偽狂犬野毒株感染的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 獸醫(yī)科技, 2013(1): 96-97.

[2] 劉中原, 劉石, 徐衛(wèi)松等. 利用技術(shù)對(duì)豬偽狂犬疫苗含毒量的評(píng)價(jià)[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013(4): 475-477.

[3] 呂愛軍, 謝三星. 豬偽狂犬病的診斷與防治研究進(jìn)展[J]. 當(dāng)代畜牧, 2000(5): 26-27.

（2014–02–11）

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